探针法检测CHO细胞DNA含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种探针法检测CHO细胞DNA含量的方法，采用GeneBank登录号为EF540878.1的核苷酸序列设计特异性引物对及Taqman探针，对待测样本提取DNA后进行实时荧光定量PCR，根据所获得的标准曲线，计算得到待检样本中CHO细胞DNA的量。本发明专利技术还进一步公开了基于该方法的试剂盒。本发明专利技术可以精确定量检测来源于CHO细胞的治疗蛋白质药物、重组疫苗及单克隆抗体等产品中CHO细胞残留DNA含量，本方法还为分析CHO细胞中特定基因的拷贝数提供内参。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种定量检测CHO细胞DNA(即中国仓鼠卵巢细胞基因组DNA)含量的方法。
技术介绍
基因工程领域所用基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比，哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的糖基化修饰，因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。哺乳动物细胞的规模化生产技术也日渐成熟和完善。因此，通过哺乳动物细胞培养表达制备治疗性重组蛋白质药物已经成为当今生物制药领域的主流技术，目前已经上市和正在进行临床试验的蛋白质药物中，70%来自于哺乳动物细胞， 而这其中CHO细胞是最常用的细胞系。为了确保治疗性重组蛋白质药物的产品质量，欧美食品和药品管理局以及我国国家食品药品监督管理局都对药品中宿主细胞残留DNA量提出了明确的要求。分子杂交分析以及Threshold immunoassay分析具有灵敏度低、耗费时间长、不易定量检测等缺陷。基因拷贝数是指某一种基因或某一段特定的DNA序列在基因组中出现的次数。对 CHO细胞基因工程细胞株进行基因拷贝数的分析对于评价基因工程细胞株的稳本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种荧光定量ＰＣＲ检测ＣＨＯ细胞ＤＮＡ的方法，采用ＧｅｎｅＢａｎｋ登录号为ＥＦ５４０８７８．１的核苷酸序列设计特异性引物对及Ｔａｑｍａｎ探针，对待测样本提取ＤＮＡ后进行实时荧光定量ＰＣＲ，根据所获得的标准曲线，计算得到待检样本中ＣＨＯ细胞ＤＮＡ的量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郎国竣，郭新军，姜伟东，刘世高，周双宬，马辰，张二辉，
申请(专利权)人：上海复宏汉霖生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31