尿β－胶原降解产物检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种尿β-胶原降解产物检测试剂盒，包括盒体，盒体内主要有：具有放置试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶、以及置于塑料框架中的微孔板；所述微孔板的微孔内包被有CTX-I抗原层，所述包被的CTX-I抗原量为0.54-0.66μg；所述试剂瓶包括装有浓度为3.8ug/ml-4.2ug/ml的兔抗CTX抗体溶液的试剂瓶和装有过氧化物酶偶联羊抗兔抗体溶液的试剂瓶。所述尿β-胶原降解产物检测试剂盒具有特异性、灵敏度和精密度都非常好的优点。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

Urine beta collagen degradation product test kit

The utility model discloses a urinary beta collagen degradation products detection kit, which comprises a box body, the box body includes: having a concave bottle, the bottle is placed in the concave bottle on the reagent bottle, and a plastic frame in the microplate; CTX-I antigen is the microporous layer microplate within the package for the 0.54-0.66 CTX-I antigen was g; the reagent bottle comprises a bottle bottles filled with a concentration of 3.8ug/ml-4.2ug/ml of Rabbit anti CTX antibody solution and a peroxidase conjugated Goat anti rabbit antibody solution. The urine beta collagen degradation product detection kit has the advantages of specificity, sensitivity and precision.

【技术实现步骤摘要】

本技术屈于医疗器械领域，具体地是涉及一种尿β-胶原降解产物检测试剂品.O
技术介绍
I型胶原占骨有机基质90%以上，并主要在骨中合成。骨骼更新时，I型胶原被降解，短肽片段进入尿液。这些片段可用尿胶原降解产物检测试剂盒检测，并有文献报道此分析有助于患骨代谢疾病的病人抗骨吸收治疗后的研究。目前，市场上缺少特异性、灵敏度好，且操作简单的相关检测试剂盒。
技术实现思路
本技术的目的之一是提供一种尿β -胶原降解产物检测试剂盒。实现上述目的的技术方案如下一种尿胶原降解产物检测试剂盒，包括盒体，盒体内主要有具有放置试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶、以及置于塑料框架中的微孔板；其特征是，所述微孔板的微孔内包被有CTX-I抗原层，所述包被的CTX-I抗原量为0. 54-0. 66 μ g ；所述试剂瓶包括装有浓度为3. 8ug/ml-4. 2ug/ml的兔抗CTX抗体溶液的试剂瓶和装有过氧化物酶偶联羊抗兔抗体溶液的试剂瓶。更进一步地，所述尿β-胶原降解产物检测试剂盒还包括有1瓶具有Ilml的 CTX-I标准品的试剂瓶，5瓶分别具有0. 3ml的CTX-I标准品的试剂瓶，2瓶分别具有0. 5ml 的尿质控品的试剂瓶，1瓶具有12ml的底物溶液的试剂瓶，1瓶具有12ml的终止液的试剂瓶和1瓶具有20ml冲洗液的试剂瓶。所述尿β -胶原降解产物检测试剂盒还包括有用于检测时密封微孔板的封口膜。所述尿β -胶原降解产物检测试剂盒采用酶联免疫法，基于抗CTX-I抗体对可溶性CTX-I抗原或包被CTX-I抗原的微孔的竞争性结合。所述尿β-胶原降解产物检测试剂盒具有特异性、灵敏度和精密度都非常好的优点。附图说明图1是本技术实施例1所述微孔板的结构示意图；图2是本技术实施例1所述盒体与下凹瓶位的结构示意图。具体实施方式本技术所述的尿β -胶原降解产物检测试剂盒，其检测方法为标准品、质控和待测样本加入微孔板中，再加入抗CTX-I抗体，18-22°c孵育1小时。洗涤微孔板，加入过氧化物酶偶联抗兔抗体，18-22°C下再孵育1小时。第二次洗涤微孔板后，与生色底物孵育 15分钟，终止显色反应，测量吸光度。实施例1(一 )、本实施例所述的尿β -胶原降解产物检测试剂盒的主要组成成份如下参见图1和图2，所述尿β -胶原降解产物检测试剂盒的盒体4内具有固定泡沫模具形成的下凹瓶位5 (共有13个下凹瓶位)，下凹瓶位5用于放置装有溶液的试剂瓶；位于塑料框架1中的微孔板2，微孔板2中的微孔3包被有CTX-I抗原层。具体组成如下1.微孔板预包被CTX-I抗原的6条微孔板Qx 8孔/每条)，置于塑料框架中。每个微孔包被CTX-I抗原的量为0.6yg。2. CTX-I标准品0试剂瓶一瓶(IlmL)可直接使用的缓冲溶液。3. CTX-I标准品1-5试剂瓶五瓶(0. 3mL/瓶)可直接使用的CTX-I标准品。4.尿质控品试剂瓶两瓶(0. 5mL/瓶)可直接使用的人尿，即尿质控品。5. 一抗溶液试剂瓶一瓶(12mL)可直接使用的兔抗CTX-I抗体，所述兔抗CTX-I抗体的浓度为4. Oug/ ml ο6.过氧化物酶偶联抗体试剂瓶—瓶(12mL)可直接使用的辣根过氧化物酶偶联的抗兔抗体。7.底物溶液试剂瓶一瓶(12mL)可直接使用的四甲基联苯胺(TMB)底物(溶于酸性缓冲液中)。请注意该生色底物可带浅蓝色。8.终止液试剂瓶一瓶(12mL)可直接使用的0. 18mol/L硫酸溶液。9.冲洗液50倍试剂瓶一瓶(20mL)含有去污剂和防腐剂的浓缩冲洗缓冲液。用前1 50的比例稀释。10.封口膜孵育时密封微孔板的粘性薄膜。( 二)、所述尿β -胶原降解产物检测试剂盒的制备方法如下一、包被CTX-I抗原的微孔板CTX-I 抗原购自 Nordic Bioscience Diagnostic A/S 公司。用 0· 05M PH 为 7· 4 的PBS缓冲液将CTX-I抗原稀释至CTX-I抗原含量为6. 0 μ g/ml。1)包被把稀释好的CTX-I抗原在每个微孔板的反应孔中加0. lml，37°C干燥》i，4°C密封保存。2)洗板次日弃去孔内液体，在纸巾上轻轻扣打以吸去残留液体，加入由洗涤液配制的冲洗液(约^0-300ul/孔)，漂洗3次，每次;3min。洗涤液含0.05% Tween 20的PBS ILPBS 中力口人 Tween_20500y L。3)封闭按200-250ul/孔加入封闭液，封闭液10mM的PBS缓冲液含10A的BSA，37°C封闭 1-2小时，也可4°C封闭过夜，然后弃去孔内封闭液。二、制备一抗溶液1)抗体制备取健康雄性家兔，采用皮下注射方式，对家兔5-8处部位进行免疫接种，初次免疫注射lmg/mL浓度的CTX抗原0. 2mL,第3周、第4周及第5周注射lmg/mL浓度的CTX抗原与不完全弗氏佐剂等体积混合溶液0. 4mL。拉颈处死家兔，收集血液，2000r/min离心30min后取上清，加入1 %的BSA、0. 1 % 的Tween20和0. 0075%的Bronidox 5L做为防腐剂和稳定剂，4°C密封保存。抗体纯化用Buffer A (0. 05M 硼酸，4. OM NaCl，pH 9.0)平衡 rProtein A 亲和层析柱，加少量血清抗体，用BufferB (0. 05M磷酸钠，0. 05M柠檬酸钠，0. 3MNaCl，pH3. 0)洗脱，收集蛋白进行效价评定。抗体效价的测定制备的兔抗CTX抗体用ELISA法测定效价，以OD值P > 1. 0的稀释度作为效价， 抗体效价达1 10000。2) 一抗溶液制备取制备后的兔抗CTX抗体，用lOmmol/L的PBS缓冲液和25mol/L的EDTA混合，取 12mL分装，4 °C密封保存。兔抗CTX抗体的浓度为4. Oug/ml。三、过氧化物酶偶联抗体通用羊抗兔抗体冻干粉购自英国Abcam公司。取羊抗兔抗体冻干粉0. Ig,与IOmL 浓度为lOmmol/L的PBS缓冲液混合。取HRP (辣根过氧化物酶)固体用去离子水稀释为5mg/ mL，采用简易过碘酸钠法将HRP与羊抗兔抗体交联。取制备后的HRP-抗兔抗体，用IOmmol/ L的PBS缓冲液和25mol/L的EDTA混合，加入1 %的BSA,0. 1 %的Tween 20和0. 0075%的 Bronidox5L做为防腐剂和稳定剂，取12mL分装，4°C密封保存。酶标抗体最佳工作浓度为 1 3000。四、标准品与质控品的制备1)来源CTX尿液样本取自某认证医院健康人群，-20°C下保存。2) CTX样本制备取CTX尿液样本，2000r/min离心IOmin后取上清，与10mmol/L的PBS缓冲液等体积混合，并加入1 %的BSA和0. 018%的Bronidox 5L做为防腐剂和稳定剂，4°C密封保存。3)质控品制备从CTX尿液样本中取高值、低值样本，制备内部质控。8000r/min离心IOmin后取上清，与10mmol/L的PBS缓冲液等体积混合，并加入1 %的BSA和0. 018%的Bronidox 5L做为防腐剂和稳定剂，各取0. 5mL分装，4°C密封保存。低值内部质控通常约为1000-本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种尿β－胶原降解产物检测试剂盒，包括盒体，盒体内主要有：具有放置试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶、以及置于塑料框架中的微孔板；其特征是，所述微孔板的微孔内包被有ＣＴＸ－Ｉ抗原层，所述ＣＴＸ－Ｉ抗原量为０．５４－０．６６μｇ；所述试剂瓶包括有浓度为３．８ｕｇ／ｍｌ－４．２ｕｇ／ｍｌ的兔抗ＣＴＸ抗体溶液的试剂瓶和装有过氧化物酶偶联羊抗兔抗体溶液的试剂瓶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭志程，
申请(专利权)人：广州固康生物科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：81