一种检测环孢素A血药浓度的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测环孢素A血药浓度的方法，包括：在磁珠表面耦联上环孢素A单克隆抗体，在样品孔中加入经抗凝稀释的血浆样品以及环孢素A生物素，经过洗脱加入荧光素标记亲合素，在激发光激发下测定荧光强度，即得环孢素A血药浓度。本发明专利技术操作简单，测定速度快，样品用量少，成本低，灵敏度以及线性范围比ELISA法更高更宽，具有良好的应用前景。

Method for detecting blood concentration of cyclosporine A

Including the method, the invention relates to a method for detection of serum concentration of cyclosporin A: cyclosporine A monoclonal antibody on the surface of the beads in the hole in the sample is added by anticoagulant diluted plasma samples and cyclosporine A biotin, after elution of fluorescein labeled avidin to join in, excited under the determination of fluorescence intensity, namely the blood concentration of cyclosporine A. The invention has the advantages of simple operation, fast measuring speed, low sample consumption, low cost, high sensitivity and linear range and higher application prospect than the ELISA method, and has a good application prospect.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测环孢素A领域，特别涉及一种检测环孢素A血药浓度的方法。
技术介绍
环孢素A(CyCl0Sprine，CsA)是由11个氨基酸组成的环状多肽，是土壤中一种真 菌的活性代谢物。1978年英国首次将CsA应用于临床肾移植，此后CsA又用于肝、心、肺、 胰腺、骨髓等器官的移植，均取得令人满意的效果，明显提高病人的生存率。1984年环孢素 A进入我国，形成了"环孢素A+硫唑嘌呤+激素"的三联免疫抑制方案，大大提高了移植 存活率，同时也使移植术后急性排斥反应的发生率大幅下降。CsA作为一种强效免疫抑制 剂，近年来人们对它的研究越来越多，发现它还可用来治疗自身免疫性疾病、血液病及寄生 虫病等。环孢索A 口服吸收不完全，用药时间长，药动学参数个体差异大，有效治疗浓度范 围狭窄。而且CsA血药浓度水平易受药物相互作用、肝胃肠功能、红细胞含量、服药方法、术 后时间、性别、年龄以及饮食等众多因素的影响。其血药浓度过低时易引起排斥反应或诱发 自身免疫性疾病，过高时对肝、肾及中枢神经系统均有一定毒性。因此，临床上必须定期监 测其血药浓度，调整给药剂量，以充分发挥药效，减轻不良反应。测定CsA血药浓度一般取谷值为参考值，即早晨服药前取血所测定的值。采用荧 光偏振免疫测定的治疗范围肾移植术后1个月内为300ng/ml左右，1 3个月内为250 300ng/ml，3 6个月内为250ng/ml左右，6 12个月内200 250ng/ml，12个月以后维 持在200ng/ml左右。需要说明的是CsA个体差异非常大。有些患者CsA的浓度不高，却发生中毒；有 些患者CsA浓度在治疗范围之内却发生排斥反应，即使同一患者，在术后的不同时间，相同 的血药浓度却会产生不同的结果。所以CsA的有效浓度的制定必须个体化，必需在专科医 生的指导下进行。目前，国内外最常用的测定方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、高效液相质谱 联用法(HPLC/MS)、高效毛细管电泳法(HPCE)、受体结合法(RBA)、荧光偏振免疫法(FPIA)、 放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)等。其中以HPLC法和FPIA法应用最为广 泛。Luminex xMAP技术，又称流式荧光技术，又称悬浮阵列、液态芯片，该技术的核心 是把直径为5. 6um的聚苯乙烯小球用荧光染色的方法进行编码，通过调节两种荧光染料的 不同配比获得最多可达100种具有不同特征荧光谱的微球，然后将每种编码微球共价交联 上针对特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等捕获分子。应用时，先把针对不同检测物的编 码微球混合，再加入微量待检样本，在悬液中靶分子与微球表面交联的捕获分子发生特异 性结合，在一个反应孔内可以同时完成多达100种不同的检测反应。最后用LuminexTM100 进行分析，仪器通过两束激光分别识别微球的编码和检测微球上报告分子的荧光强度。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种检测环孢素A血药浓度的方法，该方法操 作简单，测定速度快，样品用量少，成本低，灵敏度以及线性范围比ELISA法更高更宽，具有 良好的应用前景。本专利技术的一种检测环孢素A血药浓度的方法，包括在磁珠表面耦联上环孢素A单克隆抗体，在样品孔中加入经抗凝稀释的血浆样品 以及环孢素A生物素，经过洗脱加入荧光素标记亲合素，在激发光激发下测定荧光强度，即 得环孢素A血药浓度。所述抗凝所用抗凝剂为乙二胺四乙酸，稀释倍数为4 6倍。所述环孢素A生物素的结构式为权利要求1.一种检测环孢素A血药浓度的方法，包括在磁珠表面耦联上环孢素A单克隆抗体，在样品孔中加入经抗凝稀释的血浆样品以及 环孢素A生物素，经过洗脱加入荧光素标记亲合素，在激发光激发下测定荧光强度，即得环 孢素A血药浓度。2.根据权利要求1所述的一种检测环孢素A血药浓度的方法，其特征在于所述抗凝 所用抗凝剂为乙二胺四乙酸，稀释倍数为4 6倍。3.根据权利要求1所述的一种检测环孢素A血药浓度的方法，其特征在于所述荧光 素为PE。4.根据权利要求1所述的一种检测环孢素A血药浓度的方法，其特征在于所述激发 光波长为530nm。全文摘要本专利技术涉及一种检测环孢素A血药浓度的方法，包括在磁珠表面耦联上环孢素A单克隆抗体，在样品孔中加入经抗凝稀释的血浆样品以及环孢素A生物素，经过洗脱加入荧光素标记亲合素，在激发光激发下测定荧光强度，即得环孢素A血药浓度。本专利技术操作简单，测定速度快，样品用量少，成本低，灵敏度以及线性范围比ELISA法更高更宽，具有良好的应用前景。文档编号G01N33/543GK102095876SQ20111004747公开日2011年6月15日 申请日期2011年2月28日 优先权日2011年2月28日专利技术者孙庆莉 申请人:上海健耕医药科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测环孢素Ａ血药浓度的方法，包括：在磁珠表面耦联上环孢素Ａ单克隆抗体，在样品孔中加入经抗凝稀释的血浆样品以及环孢素Ａ生物素，经过洗脱加入荧光素标记亲合素，在激发光激发下测定荧光强度，即得环孢素Ａ血药浓度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙庆莉，
申请(专利权)人：上海健耕医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31