一种用于加强温血动物的免疫、抗炎、抗肿瘤以及 D N A修复过程的植物水溶性提取物生物制造技术

本发明专利技术提供了一种分离“猫爪草”（Ｕｎｃａｒｉａ　　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ）水溶性提取物，即Ｃ－ＭＥＤ　　１００提取物的生物活性组分的方法，所述方法包括（ｉ）从Ｃ－ＭＥＤ－１００＊提取物沉淀喷雾干燥载体以获得用于薄层层析（ＴＬＣ）的点样混合物；（ｉｉｉ）将Ｃ－ＭＥＤ－１００＊提取物点样混合物点在预跑板的ＴＬＣ板上并洗脱薄层板获得Ｒ↓［ｆ］＝０．２－０．３的荧光条带；（ｉｖ）将Ｒ↓［ｆ］＝０．２－０．３谱带刮下，在氨气中洗脱并将洗脱的条带冷冻干燥形成粉末；以及（ｖ）用甲醇提取粉末以除去溶解的硅胶，浓缩甲醇溶液并将浓缩液结晶以获得生物活性组分。分离的生物活性组分为奎尼酸类似物，优选为奎尼酸内酯。本发明专利技术还提供了包含药用有效量生物活性组分和无毒惰性载体或稀释剂的药物组合物。本发明专利技术的生物活性组分可用于所有哺乳动物以加强免疫功能，治疗与免疫系统相关的失调，抑制炎性应答，治疗与炎性应答相关的失调，加强抗肿瘤应答，以及治疗与对肿瘤形成和生长的应答相关的失调。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
一种用于加强温血动物的免疫、抗炎、抗肿瘤以及 d n a修复过程的植物水溶性提取物生 ...的制作方法
技术介绍
专利
本专利技术涉及“猫爪草”(钩藤种)水提取物生物活性组分的分离、纯化和结构鉴定。所述生物活性组分被鉴定为奎尼酸内酯。本专利技术同样涉及所述生物活性组分在加强温血动物免疫、抗炎、抗老化、抗肿瘤和DNA修复过程中的药物应用。
技术介绍
的讨论通常称作Una de Gato或“猫爪草”的Uncaria tomentosa过去被广泛应用为天然补品，并且现在被应用于多种营养制品中以治疗多种健康失调。以本专利技术申请人的知识范围，所有公开在美国专利6,039,949和6,238,675B1以及授权给Pero的美国专利09/824,508(“Pero专利”)中的”猫爪草”的市售制品除水溶性提取物(“Pero提取物”)外都是基于其羟吲哚生物碱成分。这是由于在20世纪60年代早期Keplinger博士(澳大利亚)发现羟吲哚生物碱的存在(Keplinger，K.，Laus，G.，Wurm，M.，Dierich，M.P.，Teppner，H.Uncaria tomentosa(Willd.)DC.-桥亚乙基药学应用以及新的药学，毒理学和植物学结果(Uncariatomentosa(Willd.)DC.Ethnomedicinal use and newpharmacological，toxicological and botanical results，)J.Ethanopharmacology 6423-34，1999)。其优选实施方案中以商品名C-MED-100市售的Pero提取物是一种以水为稀释剂的“猫爪草”(Uncaria tomentosa)的树皮提取物，又名Una de Gato或“猫爪草”提取物，其与任一其他的市售形式完全不同，因为它只含微量的生物碱(＜0.05％)。反之，Pero提取物含有在Pero专利中已经描述并且受到保护的已经阐明效力的新类别活性成分-羧基烷基酯(CAEs)。C-MED-100是营养工业中不仅支持自身免疫而且加强DNA修复功能的首要产品，其关键在于减轻与老化相关的失调，诸如自身免疫性，炎性以及肿瘤疾病。这里涉及的C-MED-100提取物应该理解为包括Pero提取物，其中C-MED-100提取物是优选实施方案。在此以前尚未实现Pero提取物活性成分的精确化学鉴定。然而，那些成分的化学以及生物学特性已经得以充分鉴定以使Pero提取物的市售制造得以标准化。(参见Pero专利)。市售为Pero提取物的C-MED-100提取物是基于“猫爪草”的历史药物应用进行配制的，其中的重要步骤为在约95彻底热水提取约18小时。然后超滤提取物以除去高分子(＞10,000MW)有毒结合物并喷雾干燥以含8-10％的作为活性成分的羧基烷基酯(CAEs)。由于CAEs(85％)吸附在活性炭上，CAEs被表征为C-MED-100提取物的唯一活性成分。未吸附部分没观察到生物活性。使用薄层层析(TLC)作为纯化工具，活性成分在约200nm处显示UV最大吸收，并与羟胺和氯化铁反应，从而表征它们为酯(例如CAEs)。人类每日口服250-700mg之间剂量的C-MED-100提取物已被证实是有效的。这些剂量已经显示出对包括人类的温血动物能加强抗炎、DNA修复、免疫和抗肿瘤过程。(参见Pero专利，Lamm，S.，Sheng，Y.，Pero，R.W.，补充有“猫爪草”的新水溶液提取物，C-MED-100提取物的个体对肺炎球菌疫苗的持续应答(Persistent response topneumococcal vaccine in individuals supplemented with a novel watersoluble extract of Uncaria tomentosa，C-MED-100 extract).Phytomed8267-274，2001；Sheng，Y.，Li，L.，Holmgren，K.，Pero，R.W.，人类志愿者研究中“猫爪草”的水提取物对DNA修复的加强(DNA repairenhancement of aqueous extracts of Uncaria Tomentosa in a humanvolunteer study).Phytomed 8275-282，2001；Sheng，Y.，Bryngelsson，C.，Pero，R.W.“猫爪草”的新的水提取物C-MED-100提取物加强的DNA修复，免疫功能以及降低的毒性(EnhancedDNA repair，immune function and reduced toxicity of C-MED-100extract，a novel aqueous extract from Uncaria tomentosa)。J.ofEthnopharmacology 69115-126(2000))。C-MED-100提取物中的CAEs显示出作为营养增补剂能提供营养支持，因为CAEs加强DNA修复和免疫细胞应答，所述DNA修复和免疫细胞应答随后是调节老化的重要生理学过程。(参见Pero专利，Sheng，Y.，Pero，R.W.，Wagner，H.，“猫爪草”水提取物治疗大鼠模型化疗诱导的白血球减少(Treatment of chemotherapy-inducedLEUKOPENIA in a rat model with aqueous extract from Uncariatomentosa)。Phytomedicine 7(2)137-143(2000)如上所述)。这两个过程包括调节核转录κβ(NF-κB)。众所周知NF-KB控制(i)从程序性细胞死亡拯救细胞的核事件以及(ii)前炎性细胞因子的产生。(Beg，AA以及Baltimore，D.，NF-κB在阻止TNF-α诱导的细胞死亡中的重要作用。Science 274782-784，1996；Wang，C-Y，Mayo，M.W.，Baldwin，A.S.，TNF-α以及癌症治疗-诱导的细胞程序性死亡抑制NF-KB的增强作用。Science 274784-787，1996)。因此，这个机制直接将诱导细胞程序性死亡到程序性细胞毒性与前炎细胞因子产生和炎症联系起来。细胞程序性死亡是体内调节细胞从分裂(复制)到分化并到增强功能能力的重要生化过程。进入细胞程序性死亡的细胞不仅被刺激分化和增强功能性而且将最终死于这种“细胞程序死亡”。从而，源于C-MED-100提取物的NF-KB抑制诱导的细胞程序性死亡将(i)有效地杀死肿瘤细胞，因为它们可能通过细胞程序性死亡被迫使不进行复制并最终死亡；并且同时(ii)增强免疫细胞应答，因为更多的免疫活性细胞因为DNA修复的平行增强将被迫分化并将存活更久。NF-kB同样发送信号到炎性细胞指导它们产生细胞因子(生长因子)。这些信号随后刺激吞噬细胞以杀死更多的侵入传染物，其至少部分由产生高水平的氧自由基得以实现。因此，抑制NF-KB具有抗炎特性因为它阻止可能对正常身体组织有害的炎性过程的过度反应。此外，因为前炎细胞因子是人类本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离植物水溶性提取物生物活性组分的方法，其中所述提取物在约１９９ｎｍ处显示ｕｖ最大值，在低于１００的温度下稳定２４小时和在约１２１通过高压灭菌稳定长达至少２０分钟，以及在约－２０液态下冷冻时保持至少６月的生物活性，并且主要由分子量高达约１２，０００的分子组成，所述方法包括如下步骤：（ａ）从所述水溶性提取物通过用第一醇溶液沉淀除去醇不溶性组分；（ｂ）将来自步骤（ａ）的所述水溶性提取物点样在预跑板的薄层层析（ｔｌｃ）板上并在约１％氨气的第二醇溶液系统中对点样板 进行层析分离，从而获得ｒ↓［ｆ］＝０．２－０．３的荧光条带；（ｃ）分离ｒ↓［ｆ］＝０．２－０．３的荧光条带；（ｄ）用氨水洗脱所述分离的荧光条带并干燥所述洗脱的分离荧光条带以形成粉末；（ｅ）用第三醇溶液提取所述粉末以除 去醇不溶解的硅胶，留下所述第三醇溶液；（ｆ）浓缩所述第三醇溶液；以及（ｇ）从所述浓缩的第三醇溶液分离所述生物活性组分。

【技术特征摘要】
US 2002-3-7 10/093,7941.一种分离植物水溶性提取物生物活性组分的方法，其中所述提取物在约199nm处显示uv最大值，在低于100的温度下稳定24小时和在约121通过高压灭菌稳定长达至少20分钟，以及在约-20液态下冷冻时保持至少6月的生物活性，并且主要由分子量高达约12,000的分子组成，所述方法包括如下步骤(a)从所述水溶性提取物通过用第一醇溶液沉淀除去醇不溶性组分；(b)将来自步骤(a)的所述水溶性提取物点样在预跑板的薄层层析(tlc)板上并在约1％氨气的第二醇溶液系统中对点样板进行层析分离，从而获得rf＝0.2-0.3的荧光条带；(c)分离rf＝0.2-0.3的荧光条带；(d)用氨水洗脱所述分离的荧光条带并干燥所述洗脱的分离荧光条带以形成粉末；(e)用第三醇溶液提取所述粉末以除去醇不溶解的硅胶，留下所述第三醇溶液；(f)浓缩所述第三醇溶液；以及(g)从所述浓缩的第三醇溶液分离所述生物活性组分。2.根据权利要求1的分离生物活性组分的方法，其中所述植物是钩藤。3.根据权利要求的1分离生物活性组分的方法，其中所述水溶性提取物是“猫爪草”提取物。4.一种植物水溶性提取物的生物活性组分，其中所述生物活性组分主要由一种或者多种羧基烷基酯(caes)组成。5.权利要求4的生物活性组分，其中所述caes是奎尼酸类似物。6.权利要求5的生物活性组分，其中所述奎尼酸类似物包括奎尼酸内酯或奎尼酸盐。7.权利要求4的生物活性组分，其中所述caes存在奎尼酸。8.一种药物组合物，包括a)药用有效量的一种或者多种羧基烷基酯(caes)以抑制tnf-α的产生或诱导白血球的细胞程序性死亡；以及b)无毒惰性载体或稀释剂。9.权利要求8的药物组合物，其中所述caes为奎尼酸类似物。10.权利要求8的药物组合物，其中所述奎尼酸类似物包括奎尼酸内酯或奎尼酸盐。11.一种给药方法，包括给哺乳动物施用权利要求8的药物组合物。12.权利要求11的方法，进一步包括通过抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗纳德W佩罗，
申请(专利权)人：罗纳德W佩罗，
类型：发明
国别省市：US[美国]