日本毛连菜提取物及其提取方法技术

本发明专利技术公开了一种日本毛连菜提取物及其提取方法，所述的提取物包括日本毛连菜的水提物水洗脱部分和总黄酮。日本毛连菜的水提物水洗脱部分的提取方法是将日本毛连菜加15-20倍量的蒸馏水提取，提取液合并、离心后取上清，浓缩至1g生药材/ml后，经树脂分离、洗脱，浓缩洗脱液即得。日本毛连菜总黄酮的提取方法是将日本毛连菜用20-30倍量30%-60%的乙醇提取，提取液离心后浓缩至无乙醇残留，用水稀释至1g生药材/ml后用3-5倍95%乙醇醇沉去多糖，取上清，浓缩蒸干，用水溶解至含黄酮20-30mg/ml，经树脂分离，分别用水、乙醇洗脱，留取乙醇洗脱部分，即得。本发明专利技术所述的日本毛连菜提取物可用于降血糖药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种日本毛连菜的提取物及其提取方法。
技术介绍
毛连菜属植物包括日本毛连菜、毛连菜(原亚种毛连菜、单毛毛连菜)、滇苦菜、新 疆毛连菜，一年生、两年生、多年生分枝草本。日本毛连菜G0Zcri1S japoncia Thunb)为菊科植物，又名枪刀菜。在我国主要分 布于河北、山西、陕西、吉林、黑龙江等地，其中山西主要分布在太原及周边县市，交城，五台 等地区。生于山坡草地、灌丛中或田边、河边，海拔650 3650米。日本及俄罗斯也有分布。 全草入蒙药，具有清热、消肿及止痛作用。目前还没有关于日本毛连菜提取物的降血糖作用 的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有降血糖作用日本毛连菜提取物，同时提供该提取物 的提取方法。为实现上述目的，本专利技术所述的一种日本毛连菜提取物包括日本毛连菜的水提物 水洗脱部分和总黄酮。水提取物水洗脱部位主要包括糖类化合物和黄酮类化合物，其出膏率为16g稠膏 /IOOg生药材以上，多糖含量占30%以上，黄酮含量占5%以上，有明显的降血糖作用，对正常 小鼠血糖值没影响。日本毛连菜总黄酮提取物中总黄酮含量占50%以上，有明显的降血糖 作用，对正常小鼠血糖值没影响。本专利技术首次公开了日本毛连菜提取物的降血糖作用，毒理 学实验证明其为无毒物质，并进一步筛选日本毛连菜降血糖的有效部位，最终确定为日本 毛连菜水提物水洗脱组分以及日本毛连菜总黄酮2个有效部位。日本毛连菜的水提物水洗脱部分的提取方法是将日本毛连菜洗净，晾干，切成均 勻小段，加适量的蒸馏水浸泡，加15-20倍量的蒸馏水提取2-3次，每次2-池，提取液合并、 离心后取上清，浓缩，浓缩至Ig生药材/ml后，经20倍量大孔吸附树脂分离，用3-4倍柱体 积蒸馏水洗脱，浓缩洗脱液即得。提取方法是回流提取、温浸提取或者超声提取。日本毛连 菜生药材清洗的过程要采用活水快速冲洗，不可浸泡，以免损失水溶性的成分。日本毛连菜总黄酮的提取方法是将日本毛连菜洗净，切成均勻小段，用20-30 倍量30%-60%的乙醇提取2-3次，每次2-3h，提取液离心后浓缩至无乙醇残留，用水稀释 至Ig生药材/ml后用3-5倍95%乙醇醇沉去多糖，取上清，浓缩蒸干，用水溶解至含黄酮 20-30mg/ml，经大孔吸附树脂分离，分别用2_5倍柱体积水洗脱、4-6倍柱体积50%_95%乙醇 洗脱，留取乙醇洗脱部分，即得。提取方法是70°C以上温浸提取或者回流提取。日本毛连菜 生药材清洗的过程要采用活水快速冲洗，不可浸泡，以免损失水溶性的成分。(1)总黄酮提取工艺的考察通过对乙醇浓度(30%_95%)、提取时间(0. 5_3h)以及 次数(2-4次)、料液比(10-50倍量)、提取温度(40-90°C以及回流提取)、粒度等因素进行考察，建立正交实验，以黄酮的含量以及纯度作为评价指标，通过极差分析和方差分析，最终 确定的提取工艺为用20-40倍量醇浓度为30%-60%乙醇提取2-3次，每次2_池，提取温度 为70-100°C。乙醇浓度和提取温度对总黄酮的提取效率影响较大，是大生产中条件控制的 重点，乙醇浓度在30%-60%提取得到最多的黄酮，醇浓度过大或者过小都会明显降低黄酮 得率，提取温度在达到70°C时，黄酮得率基本达到最高，低于70°C，黄酮得率明显降低，高 于70°C时，黄酮得率几乎不变或者略微降低，但是出膏率明显增大，为进一步的黄酮纯化带 来很大的麻烦，所以不建议为了方便选择回流提取的方法。(2)纯化工艺的考察1)树脂的筛选以树脂的吸附量和解析率作为指标，检测了 Dku、HPD-450、HPD-700、 AB-8、聚酰胺(14-30目)，最终确立为Dltll大孔吸附树脂。2)95%醇沉用量的考察考察了 2-5倍量95%乙醇醇沉去多糖，以黄酮含量和纯度 作为评价指标，最终确定为3-4倍量95%乙醇醇沉去多糖，这样既可以去除尽可能完全的多 糖类成分，又最大限度的减少黄酮的损失。3)梯度洗脱中水用量的考察以黄酮含量和纯度作为评价指标，考察了 0. 2-8倍 柱体积的水用量，确定为2-5倍柱体积的水用量可以最大限度的弃去单糖类成分以及降低 黄酮的损失。4)梯度洗脱中乙醇浓度以及用量的考察以黄酮含量和纯度作为评价指标，分别 用10%-95%的醇浓度进行洗脱，最终确定50%-75%的乙醇洗脱5个柱体积以上，得到的黄酮 含量和纯度最高，纯度可达50%以上。日本毛连菜中多糖类及黄酮类化合物的含量测定 日本毛连菜总黄酮含量测定，包括如下步骤1)芦丁对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的芦丁标准品18. 60mg，用60%的乙醇(ν/ν)溶解，并转移至100 ml容量瓶中定容，摇勻，制成0. 186mg/ml的芦丁对照品溶液。2)芦丁标准曲线的制备精密吸取芦丁标准溶液OmUO. 5ml、1. 0ml,2. 0ml,3. 0ml,4. 0ml,5. Oml分别置干燥试 管中，各加60 %乙醇至5. 0ml，加5%亚硝酸钠溶液0. 3ml，摇勻，6 min后加10%的硝酸铝 溶液0. 3ml，摇勻，6 min后加4 %的氢氧化钠溶液，摇勻，加蒸馏水定容至IOml，摇勻，放 置15 min，试样空白作参比，在波长505nm处测定其吸光度。以浓度C&g/ml)为横坐标，吸 光度A为纵坐标得芦丁标准曲线回归方程Y = 0. 0146Χ-0. 0062 (r = 0. 9991)，结果显示 芦丁在9. 3 93Pg/ml之间线性关系良好。3)日本毛连菜总黄酮含量测定精密量取日本毛连菜总黄酮供试品溶液适量，按照标准曲线方法显色后测定其吸光 度，代入回归方程，计算总黄酮含量。日本毛连菜多糖含量测定，包括如下步骤 1)葡萄糖对照品溶液的制备精密称取105°c干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. 0104 g，加适量水溶解，转移至100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇勻，即得104 μδ/πι1的溶液。2)葡萄糖准曲线的制备取葡萄糖对照品溶液0.1 ml,0.2 ml,0.4 ml,0.6 ml,0.8 ml, 1.0 ml各加蒸馏水至2.0 ml，然后各加苯酚1.0 ml，摇勻，迅速滴加浓硫酸5.0 ml，摇勻，置沸水浴中加热15 min，然 后冷却至室温。在490 nm处测定吸光度值。以一系列葡萄糖对照品溶液的浓度为横坐标， 吸光度值为纵坐标，建立标准曲线，并进行回归处理。得葡萄糖标准曲线回归方程式Y=0. 0156χ 一 0. 0076 (r=0. 9994)，葡萄糖在5. 2 μδ/πιΓ52 Pg/ml之间线性关系良好。3)日本毛连菜多糖含量测定精密量取日本毛连菜总供试品溶液适量，按照标准曲线方法显色后测定其吸光度，代 入回归方程，计算总黄酮含量。日本毛连菜水提物水洗脱组分降糖作用的确立，其方法如下四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型的建立四氧嘧啶的注射量直接关系到小鼠的成模率、死 亡率、成模后血糖值以及给药后的降糖效果，给药量大虽然可以使成模率升高，但是血糖值 过高，死亡率增加，完不成整个给药过程，通过对四氧嘧啶用量的考察，最终确定为尾静脉 注射四氧嘧啶40-60mg/kg，0. lml/10g的给药量，成模率达到70%以上，成模后血糖值适宜、 稳定，几乎没有死亡，能完成整个实验过程，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种日本毛连菜提取物，其特征在于：所述的提取物包括日本毛连菜的水提物水洗脱部分和总黄酮。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高建平，席啸虎，葛睿，刘恩荔，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：14