采用植物组织培养葡萄风信子的方法技术

本发明专利技术涉及一种采用植物组织培养葡萄风信子的方法，包括以下步骤：(1)制备培养基：培养基A：MS+2，4-D+6-BA、培养基B：MS+NAA+6-BA、培养基C：MS+IBA+6-BA、培养基D：MS+IAA、培养基E：MS+IBA；(2)外植体消毒；(3)外植体接种在培养基A上进行诱导培养得到愈伤组织；(4)增殖培养：将愈伤组织转接到培养基B上培养；(5)不定芽分化：将经增殖培养的愈伤组织转接到培养基C上，得到分化的不定芽；(6)生根培养：将不定芽转入培养基D上培养，得到组培苗；(7)继代培养：将生根的组培苗转接到培养基E上；(8)炼苗，将组培苗移栽至营养杯中，再转栽到大棚中。本发明专利技术解决了葡萄风信子繁殖率低并带有病菌，使品种严重退化、鳞茎萎缩，不利于其品质延续和开发的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种葡萄风信子的培养方法，尤其是一种采用植物组织培养葡萄风信 子的方法，属于植物组织培养

技术介绍
葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)是百合科蓝壶花属，又名蓝壶花、葡萄百 合、葡萄水仙。葡萄风信子为多年生草本球根花卉，植株矮小，叶线状披针形，丛生，长10 30cm,宽0. 5 1. 5cm,穗状花序，1 3枝自叶丛中抽出，直立圆筒状，花茎高10 30cm，着 花20 40朵。花色有蓝色、蓝紫色、白色、淡蓝、淡粉色和黄色，秀丽高雅。花期早，自然花 期3月中旬到4月上旬，开放时间长，群体开花时间可达20 30天。在园林中，常用来布 置多年生混合花境、花坛镶边或点缀山石，是良好的林下地被花卉，亦可作盆栽观赏，别具 情趣，是具有较高观赏价值的纯化花卉，适于盆栽观赏与切花。葡萄风信子的传统繁殖方法以分植鳞茎为主，繁殖率低并带有病菌，使品种严重 退化，鳞茎萎缩，不利于其品质的延续和开发。利用组织培养技术在短时间内既能大规模的 扩大植株的繁殖量，使其亲本的优良性状得以保存，并且不受自然环境条件的限制。组织培 养技术已经在水仙、百合、风信子等球茎植物上得到很好的应用，故研究植物组织培养生产 葡萄风信子是很有现实意义的。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种采用植物组织培养葡萄风 信子的方法，解决了葡萄风信子繁殖率低并带有病菌，使品种严重退化、鳞茎萎缩，不利于 其品质延续和开发的问题。按照本专利技术提供的技术方案，所述，特征是， 包括以下步骤(1)制备培养基选择MS培养基作为基本培养基，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)、 3-吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、6_苄氨基嘌呤(6-BA)和3-吲哚丁酸(IBA)作为调控的 生长激素分别制备五种培养基培养基A :MS+2,4-D 0. 5 1. Omg/L+6-BA 1. 0 2. Omg/L,培养基B :MS+NAA 0. 5 1. Omg/L+6-BA 1. 0 2. Omg/L,培养基C :MS+IBA 0. 5 1. Omg/L+6-BA 1. 0 2. Omg/L,培养基D :MS+IAA 0. 2 1. 0mg/L, 培养基 E :MS+IBA 0. 5 1. 0mg/L ； 培养基A、B、C和D中均附加25 30g/L的蔗糖和4 5g/L的琼脂，培养基E中 附加25 30g/L的蔗糖和1 2g/L的琼脂，用1 2mol/L的NaOH溶液和HCL溶液调pH 至5. 8 6. 0，并将培养基A、B、C、D和E在高压蒸汽灭菌锅中在121 125°C下灭菌15 20min，高压蒸汽灭菌锅中的压力为0. 1 0. 15MPa ；(2)外植体消毒选用葡萄风信子鳞茎作为外植体，用自来水冲洗1 2h后，在无 菌操作台上用浓度为1 % 2%的84消毒液消毒0. 5 2min，用无菌水冲洗2 3次，再用 浓度为0. 0.2%的升汞消毒8 12min，最后用无菌水冲洗4 5次，备用；(3)外植体诱导培养将消毒后的外植体切成1 1. 5cm2的片状外植体后，接种在 培养基A上，接种瓶内每瓶平放3 5片的片状外植体，在培养室内进行诱导培养；20 30 天后，在片状外植体的切口处产生淡黄色愈伤组织；(4)增殖培养将诱导培养出的愈伤组织转接到培养基B上培养30 40d，使愈伤 组织稳定的繁殖下去，保持进一步分化的能力；(5)不定芽分化将经增殖培养的愈伤组织转接到培养基C上，30 40d后可得到 分化的不定芽；(6)生根培养将不定芽转入培养基D上继续培养，培养30 40d得到株高为2 3cm的组培苗；(7)继代培养将生根的组培苗转接到培养基E上，培养7 IOd后，组培苗的根 须达到4 5cm ；(8)移栽把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗5 7d，光照周期为 24h · 1或16h .cT1,光照强度为2000 2400LUX，培养室温度为25士2°C ；取出接种瓶内的 组培苗，用自来水洗净，再用蒸馏水稀释成500 600倍的多菌灵浸泡组培苗的根部20 30min，移栽至以蛭石、珍珠岩和营养土为混合基质的营养杯中；将营养杯放到人工气候箱 中，光周期为16h · Γ，光照强度为2000 2400LUX，白天23 25°C，晚上18 20°C，保持 湿度在40% 60%;移栽后用1/12 1/10MS培养基母液浇灌，罩上塑料杯保湿，10 15d 后去掉塑料杯，隔两周浇一次1/12 1/10MS培养基母液，30 40d后转栽到大棚中，成活 率达95% 97%。其中的d为天，步骤(3)到步骤(7)中，培养条件为光周期为24h · Cf1或16h · cf1，光照强度为 2000 2400Lux，培养温度为 25士2°C。步骤⑶中，所述混合基质中蛭石珍珠岩营养土的质量比为1. 5 2 1. 5 2 1 1. 5，所述混合基质在压力0. 1 0. 15MPa、温度121 125°C的条件下灭菌15 20mino所述的1/12 1/10MS培养基母液的成分与MS培养基相同，将MS培养基母液稀 释10 12倍。本专利技术利用植物细胞全能性以及细胞极性和再生特性，将其从植物中分离出来并 给予一定的培养条件，是这些已分化的细胞脱分化，然后再在一定的条件下再分化，最后形 成完整的植株。因此组织培养就是细胞脱分化和再分化的过程。利用组织培养技术进行葡 萄风信子的无性快速繁殖具有许多优点，首先取材较少，培养经济，使用很少的外植体就能 培养出大量的愈伤组织；其次可人为控制培养条件，不受自然条件的影响，跳出了植物生长 环境、地域以及季节时间的限制；生长周期短，繁殖率高，能在较短的时间繁殖出大量的组 培苗，缩短了葡萄风信子的生长周期；保证了葡萄风信子的品质，葡萄风信子的传统繁殖方 法以分植鳞茎为主，繁殖率低并带有病菌，使品种严重退化，鳞茎萎缩，而组织培养主要采 用无性繁殖，避免了品种中的病毒通过有性遗传给下一代；管理方便，便于自动化控制。本专利技术利用组织培养技术在短时间内既能大规模的扩大植株的繁殖量，并且使其亲本的优良 性状得以保存。组织培养技术已经在水仙、百合、风信子等球茎植物上得到很好的应用，固 研究植物组织培养生产葡萄风信子是很有现实意义的。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例一一种，包括以下步骤(1)制备培养基选择MS培养基作为基本培养基，2，4-D、IAA、NAA、6_BA和IBA作 为调控的生长激素分别制备五种培养基培养基A :MS+2,4-D0. 5mg/L+6-BA 1. Omg/L、培养 基 B:MS+NAA 0. 5mg/L+6-BA 1. Omg/L、培养基 C :MS+IBA0. 5mg/L+6_BA 1. Omg/L、培养基 D : MS+IAAO. ang/L、培养基E :MS+IBA0. 5mg/L ；培养基A、B、C和D中均附加25g/L的蔗糖和5g/ L的琼脂，培养基E中附加25g/L的蔗糖和2g/L的琼脂，用lmol/L的NaOH溶液和HCL溶液 调pH至5. 8，并将培养基A、B、C、D和E在高压蒸汽灭菌锅中在121°C下灭菌15min，高压本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种采用植物组织培养葡萄风信子的方法，其特征是，包括以下步骤：（１）制备培养基：选择ＭＳ培养基作为基本培养基，２，４－Ｄ、ＩＡＡ、ＮＡＡ、６－ＢＡ和ＩＢＡ作为调控的生长激素分别制备五种培养基：培养基Ａ：ＭＳ＋２，４－Ｄ　０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０～２．０ｍｇ／Ｌ，培养基Ｂ：ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０～２．０ｍｇ／Ｌ，培养基Ｃ：ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０～２．０ｍｇ／Ｌ，培养基Ｄ：ＭＳ＋ＩＡＡ　０．２～１．０ｍｇ／Ｌ，培养基Ｅ：ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５～１．０ｍｇ／Ｌ；培养基Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ中均附加２５～３０ｇ／Ｌ的蔗糖和４～５ｇ／Ｌ的琼脂，培养基Ｅ中附加２５～３０ｇ／Ｌ的蔗糖和１～２ｇ／Ｌ的琼脂，用１～２ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液和ＨＣＬ溶液调ｐＨ至５．８～６．０，并将培养基Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和Ｅ在高压蒸汽灭菌锅中在１２１～１２５℃下灭菌１５～２０ｍｉｎ，高压蒸汽灭菌锅中的压力为０．１～０．１５ＭＰａ；（２）外植体消毒：选用葡萄风信子鳞茎作为外植体，用自来水冲洗１～２ｈ后，在无菌操作台上用浓度为１％～２％的８４消毒液消毒０．５～２ｍｉｎ，用无菌水冲洗２～３次，再用浓度为０．１％～０．２％的升汞消毒８～１２ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗４～５次，备用；（３）外植体诱导培养：将消毒后的外植体切成１～１．５ｃｍ２的片状外植体后，接种在培养基Ａ上，接种瓶内每瓶平放３～５片的片状外植体，在培养室内进行诱导培养；２０～３０天后，在片状外植体的切口处产生淡黄色愈伤组织；（４）增殖培养：将诱导培养出的愈伤组织转接到培养基Ｂ上培养３０～４０ｄ，使愈伤组织稳定的繁殖下去，保持进一步分化的能力；（５）不定芽分化：将经增殖培养的愈伤组织转接到培养基Ｃ上，３０～４０ｄ后可得到分化的不定芽；（６）生根培养：将不定芽转入培养基Ｄ上继续培养，培养３０～４０ｄ得到株高为２～３ｃｍ的组培苗；（７）继代培养：将生根的组培苗转接到培养基Ｅ上，培养７～１０ｄ后，组培苗的根须达到４～５ｃｍ；（８）移栽：把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗５～７ｄ，光照周期为２４ｈ·ｄ－１或１６ｈ·ｄ－１，光照强度为２０００～２４００Ｌｕｘ，培养室温度为２５±２℃；取出接种瓶内的组培苗，用自来水洗净，再用蒸馏水稀释成５００～６００倍的多菌灵浸泡组培苗的根部２０～３０ｍｉｎ，移栽至以蛭石、珍珠岩和营养土为混合基质的营养杯中；将营养杯放到人工气候箱中，光周期为１６ｈ·ｄ－１，光照强度为２０００～２４００Ｌｕｘ，白天２３～２５℃，晚上１８～２０℃，保持湿度在４０％～６０％；移栽后用１／１２～１／１０ＭＳ培养基母液浇灌，罩上塑料杯保湿，１０～１５ｄ后去掉塑料杯，隔两周浇一次１／１２～１／１０ＭＳ培养基母液，３０～４０ｄ后转栽到大棚中，成活率达９５％～９７％。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩，
申请(专利权)人：江苏九久环境科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32