白术挥发油部位的抗炎成分制备及其在制备抗炎药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了从中药材白术中提取分离的挥发油中的抗炎成分的制备及其该抗炎成分在制备抗炎药物的用途，本发明专利技术采用超临界ＣＯ↓［２］萃取获得白术挥发油部位，挥发油部位经硅胶柱层析获得石油醚、石油醚－乙醚（１∶１）（ＢＺＣ－２）、乙醚和甲醇四个洗脱部位。继而对ＢＺＣ－２进行Ｃ↓［１８］硅胶反相柱层析分离精制，得到白术内酯Ｉ和白术炔类组分。经药效学实验研究表明，白术内酯Ｉ和白术多炔类组分能显著降低醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有很强的抗炎活性。ＢＺＣ－２具有显著的抗急性炎症和慢性炎症作用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及从中药材白术中提取分离的挥发油的抗炎作用及其在制备药物方面的用途，特别是白术挥发油部位的抗炎成分制备方法及其在制备抗炎药物方面的用途。
技术介绍
白术(Atractylodes macrocephala Koidz)为菊科(Compositae)苍术属植物。具有健脾益气等功效。用于治疗脾虚食少、水肿、自汗、胎动不安等症。白术主要含有倍半萜类和炔类化合物。Yamahara et al.(Yakugaku Zasshi 1977，97，873-879)发现白术有抗炎作用但没有镇痛作用。Katsuya Ento et al.(Chem.Pharm.Bull.1979，27，2954-2958)发现东苍术酮(sesquiterpenes(+)-eudesma-4(14)，7(11)-dien-8-one)和白术内酯I(atracylenolide I)是A.japonica.的抗炎有效成分。Sin，K.S.et al.(Arch.Pharm.Res.1989，12，236-238)报道苍术酮对大鼠棉球肉芽肿有抑制作用。Yu，S.et al.(Phytomedicine 1994，1，55-58)报道苍术酮对TPA诱导的小鼠耳廓肿胀有抑制作用。与早期的报道比较Marion Resch et al.(J.Nat.Prod.1998，61，347-350)发现白术内酯类化合物对5-脂氧酶和环加氧酶-1没有抑制作用。然而，白术挥发油部位的抗炎作用及白术挥发油部位的抗炎成分制备方法未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供白术挥发油部位的抗炎成分在制备抗炎药物方面的用途。为了探讨白术抗炎作用的有效部位，专利技术人对其进行了有效部位的提取分离、筛选和抗炎药理活性研究。本专利技术采用超临界CO2萃取获得白术挥发油部位(BZC)，BZC经硅胶柱层析获得石油醚、石油醚-乙醚(1∶1)、乙醚和甲醇四种不同分离部位，分别记作BZC-1、BZC-2、BZC-3和BZC-4。。经过白细胞膜色谱模型和肺细胞膜色谱模型筛选，发现BZC-2在这两种色谱模型上有保留，初步药理筛选实验表明，BZC-2对角叉菜胶致正常大鼠足跖肿胀具有显著的抑制作用，对小鼠棉球肉芽肿有显著的抑制作用，其高剂量组能明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的升高。继而对BZC-2进行C18硅胶反相柱层析分离精制，得到白术内酯I和白术炔类组分。深入的药效学实验研究表明，白术内酯I和白术多炔类组分能显著降低醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有很强的抗炎活性。附图说明图1是白术活性部位和活性成分的色谱图，其中符号表示1、BZC-2，2、白术内酯I(白细胞膜柱)；3、BZC-2，4、白术内酯I(肺细胞膜柱)。以下结合专利技术人给出的实施例和药效学实验对本专利技术作进一步的详细说明。具体实施例方式一、白术挥发油的制备工艺1仪器HA220-50-06超临界萃取装置(南通市华安超临界萃取有限公司)；LC-10ATvp型高效液相色谱系统(日本岛津公司)。2制备工艺取白术(Atractylodes macrocephala Koidz)饮片，粉碎，过筛(60目)，称取药粉2kg，置于5L超临界萃取釜中。开启制冷装置、萃取釜和分离釜加温装置，待达到设定温度后打开压缩泵，使萃取釜压力保持为20.0MPa，温度为50℃，以40kg/h的CO2流速循环萃取。分离釜压力和温度分别为10.0MPa和30℃，循环提取3h。得到黄色油状物，提取率为2.5％，作为白术挥发油部位(BZC)。按《中华人民共和国药典》2000年版一部，附录XD，挥发油测定法测定挥发油含量大于50％。取BZC 50g，加乙醚溶解，用适量硅胶吸附，室温下挥去乙醚。取约300g硅胶干法装柱(1000mm×100mm)，加样于柱上端，用石油醚、石油醚-乙醚(1∶1)、乙醚、甲醇依次自流洗脱，分别收集洗脱液，减压回收洗脱液溶剂，得到BZC的4种不同分离部位，分别记作BZC-1、BZC-2、BZC-3和BZC-4。取BZC-2 10.0g，加甲醇溶解，用适量硅胶吸附，室温下挥去甲醇。取约100g C18硅胶(粒径200-300μm)湿法装柱(600mm×30mm)，加样于柱上端，用60％-65％甲醇加压洗脱，高效液相色谱检测(ODS色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，检测波长220nm，柱温室温，流动相甲醇-水(67∶34))，分别合并白术内酯I和白术多炔类流份，回收甲醇，乙醚萃取得到白术内酯I和白术多炔类组分。二、白术挥发油中活性成分的筛选为了探明白术挥发油中的活性组分，专利技术人建立了白细胞膜色谱模型和肺细胞膜色谱模型，并用于筛选白术挥发油中有保留的活性组分。1实验1)材料与试药色谱分析系统包括SPECTRA SERIE P200色谱泵和SPECTRA 100紫外检测器(ThermoSeparation Products，美国)，7125型手动进样阀(Rheodyne公司，美国)和ANASTAR色谱工作站(奥泰科技有限公司，天津)；HERMLE ZK-401型低温冷冻高速离心机(德国)；Philips XLseries.XL20型扫描电子显微镜；EDAX DX-4能谱仪(荷兰)。地塞米松、氢化可的松、可的松、泼尼松、泼尼松龙(中国药品生物制品检定所)；紫杉醇(西安保赛生物工程公司，纯度＞98％)；三磷酸腺苷二钠盐(ATPNa2)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、Dextran T500和Tris碱(华美生物工程公司)；磷酸二氢钠、EDTANa2、氯化钠、氯化钾、盐酸、磷酸等均为分析纯(西安化学试剂厂)；色谱纯甲醇(美国Fisher公司)；蛋白质测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；白术饮片(市售)经西安交通大学药学院生药教研室鉴定为正品药材。健康家兔，雌雄不限，体重2-2.5kg，SD大鼠，雌雄不限，体重200-220g，均由西安交通大学医学实验动物中心提供。大孔球形硅胶(粒度3-5μm，孔径100)，中国科学院化学研究所提供。2)白细胞膜和肺细胞膜色谱模型建立(1)细胞膜制备兔白细胞膜和大鼠肺细胞膜按照文献(徐叔云，卞如濂，陈修，主编.药理实验方法学，第2版.北京人民卫生出版社，1994)方法制备，家兔自颈动脉取血，肝素抗凝，加入等体积3％Dextran T500生理盐水溶液混匀，将试管直立室温静止30-60min，待形成清晰红细胞界面时，将血浆层移入离心管中，先以2500r/min、4℃离心10min，弃上层血浆。加入生理盐水，以2500r/min、4℃离心5min，洗涤3次，加入细胞30倍体积的破膜液，超声破膜5min，8000r/min离心除去细胞核等，再用12000r/min离心得白细胞膜。SD大鼠颈动脉放血处死后取出肺脏，放入冰冷的PBS缓冲液(pH7.3)中，除去气管及支气管，洗掉残留血迹，剪碎，匀浆，得淡粉色匀浆液。匀浆液先以8100r/min、4℃离心15min，弃去沉淀，上清液以5400r/min、4℃离心25min，弃去沉淀，上清液超声15min后以14000r/min、4℃离心15min，得肺细胞膜。(2)细胞膜固定相制备按照文献(贺冲浪，杨广德，耿信笃.科本文档来自技高网...

【技术保护点】
白术挥发油和白术挥发油中抗炎成分的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：１）取白术饮片，粉碎，过６０目筛，并将药粉置于５Ｌ超临界萃取釜中；２）开启制冷装置、萃取釜和分离釜加温装置，待达到设定温度后打开压缩泵，使萃取釜压力保持为 ２０．０ＭＰａ，温度为５０℃，以４０ｋｇ／ｈ的ＣＯ↓［２］流速循环萃取；３）分离釜压力和温度分别为１０．０ＭＰａ和３０℃，循环提取３ｈ，得到黄色油状物，即为白术挥发油部位ＢＺＣ；４）取ＢＺＣ加乙醚溶解，用硅胶吸附，室温下挥去 乙醚；５）取硅胶干法装柱，加样于柱上端，用石油醚、石油醚－乙醚（１∶１）、乙醚、甲醇依次自流洗脱，分别收集洗脱液，减压回收洗脱液溶剂，得到ＢＺＣ的４种不同分离部位，分别记作ＢＺＣ－１、ＢＺＣ－２、ＢＺＣ－３和ＢＺＣ－４；６） 取ＢＺＣ－２，加甲醇溶解，用适量硅胶吸附，室温下挥去甲醇；７）取Ｃ↓［１８］硅胶，粒径为２００－３００μｍ湿法装柱，加样于柱上端，用６０％－６５％甲醇加压洗脱，高效液相色谱检测，色谱条件：ＯＤＳ色谱柱，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ ，流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：２２０ｎｍ，柱温：室温，流动相：甲醇和水，其比例为６７∶３４。分别合并白术内酯Ⅰ和白术多炔类流份，回收甲醇，乙醚萃取得到抗炎成分白术内酯Ⅰ和白术多炔类组分。...

【技术特征摘要】
1.白术挥发油和白术挥发油中抗炎成分的制备方法，其特征在于，包括下列步骤1)取白术饮片，粉碎，过60目筛，并将药粉置于5L超临界萃取釜中；2)开启制冷装置、萃取釜和分离釜加温装置，待达到设定温度后打开压缩泵，使萃取釜压力保持为20.0MPa，温度为50℃，以40kg/h的CO2流速循环萃取；3)分离釜压力和温度分别为10.0MPa和30℃，循环提取3h，得到黄色油状物，即为白术挥发油部位BZC；4)取BZC加乙醚溶解，用硅胶吸附，室温下挥去乙醚；5)取硅胶干法装柱，加样于柱上端，用石油醚、石油醚-乙醚(1∶1)、乙醚、甲醇依次自流洗脱，分别收集洗脱液，减压回收洗脱液溶剂，得到BZC的4种不同分离部位，分别记作BZC-1、BZC-2、BZC-3和B...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺浪冲，李翠芹，董海燕，杨林，王嫦鹤，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]