【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于一种生物制品,涉及一种病毒灭活疫苗的制备和应用检定,具体涉及的是四价轮状病毒灭活疫苗的制备及其应用。
技术介绍
轮状病毒属于肠病毒科的双链RNA病毒,其外壳蛋白是型特异性抗原,根据其抗原性的不同,将轮状病毒分A、B两群,其中引起人类腹泻的主要是A群。A群轮状病毒又依据外壳蛋白VP7的不同分为14个血清型,即G1-G14型,而引起婴幼儿腹泻的主要是G1、G2、G3、G4型轮状病毒。目前有关四价轮状病毒灭活疫苗的制备未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备。本专利技术的另一目的是提供一种四价轮状病毒灭活疫苗的应用。本专利技术的目的可以通过以下措施实现一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法,包括以下工艺步骤①细胞的制备将小牛肾细胞或Vero细胞用胰酶消化分散,加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片,再用无血清D-MEM培养液清洗细胞,用于接种轮状病毒。②病毒接种和培养将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒毒种加入10~15ug/ml胰酶,37℃消化45分钟,以感染复数为5~10将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒分别接种到步骤①制备的细胞,并在36.5-37.5℃吸附40~60分钟后吸弃病毒液,再用含1~1.5ug/ml胰酶的无血清D-MEM培养液于33~35℃培养至细胞出现明显病变时终止;③病毒收集、浓缩和纯化将上述接种的各病变细胞冻融,高速离心后收集上清液得各病毒原液;通过超滤浓缩上述病毒原液,并以蔗糖密度梯度离心或柱层析纯化病毒后即为各单价病毒原液。④病毒灭活采用0.05%福尔马林或1∶4000β-丙内 ...
【技术保护点】
一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法,包括以下工艺步骤:①细胞的制备:将小牛肾细胞或Vero细胞用胰酶消化分散,加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片,再用无血清D-MEM培养液清洗细胞,用于接种轮状病毒。②病毒接种和 培养:将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒毒种加入10~15ug/ml胰酶,于37℃消化45分钟,以感染复数为5~10将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒分别接种到步骤①制备的细胞,并在36.5-37.5℃吸附40~60分钟后吸弃病毒液,再用含1~1.5ug/ml胰酶的无血清D-MEM培养液于33~35℃培养至细胞出现明显病变时终止;③病毒收集、浓缩和纯化:将上述接种的各病变细胞冻融,高速离心后收集上清液得各病毒原液;通过超滤浓缩上述病毒原液,并以蔗糖密度梯度 离心或柱层析纯化病毒后即为各单价病毒原液。④病毒灭活:采用0.05%福尔马林或1∶4000β-丙内酯灭活上述各单价病毒,除菌过滤后即为单价疫苗原液;⑤混合上述各单价疫苗原液;⑥成品的配制:将经混合的单价疫苗原液加入适 ...
【技术特征摘要】
1.一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法,包括以下工艺步骤①细胞的制备将小牛肾细胞或Vero细胞用胰酶消化分散,加入D-MEM完全培养液在37℃培养至细胞成片,再用无血清D-MEM培养液清洗细胞,用于接种轮状病毒。②病毒接种和培养将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒毒种加入10~15ug/ml胰酶,于37℃消化45分钟,以感染复数为5~10将G1型、G2型、G3型、G4型轮状病毒分别接种到步骤①制备的细胞,并在36.5-37.5℃吸附40~60分钟后吸弃病毒液,再用含1~1.5ug/ml胰酶的无血清D-MEM培养液于33~35...
【专利技术属性】
技术研发人员:周旭,
申请(专利权)人:兰州生物制品研究所,
类型:发明
国别省市:62[中国|甘肃]
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