恶病质的治疗剂制造技术

本文公开了一种恶病质治疗剂，它含有作为活性成分的能抑制甲状旁腺素相关肽和其受体结合的物质。所述的抑制性物质的例子包括甲状旁腺素相关肽受体的拮抗剂、甲状旁腺素相关肽抗体、抗体片段和被修饰的抗体。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及恶病质的治疗剂，它包括作为活性组分的能抑制甲状旁腺素(PTHrP)与其受体之间结合的物质。
技术介绍
在晚期癌患者中可见的恶病质是恶性肿瘤的-种常见综合症，其特征为系统紊乱，主要症状为厌食、体重减轻、贫血、电解质失衡和免疫功能降低。癌患者中恶病质的发展导致死亡和晚期症状、损害患者的生活质量(QOL)并对患者及其家属和周围的人们带来强烈的心理、物质和社会的影响。最近发现被认为是癌症恶病质的致病因素的恶病质素与肿瘤坏死因子(TNF)相同。其后发现细胞因子(如白介素(IL)-1、IL-6、LTF、IFN)也具有与恶病质素同样的作用，因而恶病质是由多种因子的组合作用所诱导。已知从人口腔癌得到的OCC-1细胞系能产生涉及肿瘤恶病质的多种液体因子。注射OCC-1细胞的裸鼠发展出包括恶病质的多种症状(Kajimura N.et al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，1996，38 Suppl.pS48-52；Tanaka R.et al.，Jpn.J.Clin.Oncology Apr.1996，26(2)p88-94)。据信这是因为注射进裸鼠的OCC-1细胞系在细胞的生长中产生了多种细胞因子(如G-CSF、IL-6、LTF、IL-11、PTHRP)，这些因子在裸鼠中的组合作用导致了这些症状。在注射OCC-1细胞系的裸鼠中发现的症状与人晚期癌症患者表现出的症状高度相似。然而，还没有涉及恶病质的药物和治疗剂的报告。专利技术公开本专利技术的目的是要提供恶病质的治疗剂，它包括作为活性组分的能抑制甲状旁腺素(PTHrP)与其受体之间结合的物质。本专利技术人为发现这些治疗剂进行了广泛和深入的研究。他们发现能抑制PTHrP与其受体之间结合的物质能达到如此效果。该发现导致本专利技术的完成。也就是，本专利技术涉及恶病质的治疗剂，它包括作为活性组分的能抑制PTHrP与其受体之间结合的物质。在本专利技术中，“恶病质”包括由癌症带来的那些症状。本专利技术涉及恶病质的治疗剂，它包括作为活性组分的能抑制甲状旁腺素(此后称为“PTHrP”)与其受体(此后称为“PTHrP受体”)之间结合的物质。在此使用的“PTHrP受体”是指能与PTHrP结合的任何受体(例如那些在日本国家阶段公开的No.6-506598中描述的那些受体)，而不管PTHrP受体是否在靶器官(如骨、肾)上。在此使用的“能抑制PTHrP与其受体(PTHrP受体)之间结合的物质”是指能结合到PTHrP上以阻止PTHrP与PTHrP受体结合的任何物质如抗-PTHrP抗体、能结合到PTHrP受体上以阻止PTHrP受体与PTHrP结合的任何物质如对抗PTHrP受体的拮抗剂(PTHrP拮抗剂)，特别是由PTHrP肽置换或缺失至少-个氨基酸残基而得的肽或由部分PTHrP肽序列组成的肽，或它们的组合。抗-PTHrP抗体包括那些已知的任何种类，如人源化抗体、人抗体(WO 96/33735)或嵌合抗体(日本专利申请公开No.4-228089)。抗体可是多克隆型或单克隆型，但优选为单克隆型。PTHrP拮抗剂包括多肽或低分子量物质。PTHrP拮抗剂包括以对抗PTHrP的拮抗方式与PTHrP受体结合的物质，如在日本专利申请公开No.7-165790；肽(Peptides)(美国)，1995，6(6)1031-1037；生物化学(Biochemistry)(美国)Apr.281992，31(16)4026-4033和日本国家阶段公开No.5-509098中描述的具有PTHrP拮抗活性的一种多肽。这些多肽可以有至少一个氨基酸残基的缺失、置换、增加或插入，只要它们能保持相当的PTHrP拮抗活性，也被包括在本专利技术的PTHrP拮抗剂之中。下面，本专利技术将要在用一种抗-PTHrP抗体作为“能抑制PTHrP与PTHrP受体之间的结合的物质”的示范中被详细描述。1.抗-PTHrP抗体在本专利技术中应用的抗-PTHrP抗体可以是能表现对恶病质的治疗效果的任何一种抗体，不管它的来源、类型(单克隆或多克隆)和构型。在本专利技术中应用的抗-PTHrP抗体可以由任何已知的多克隆或单克隆抗体方法生产。优选地，抗-PTHrP抗体是来自哺乳动物的单克隆抗体。从哺乳动物来的单克隆抗体包括那些从杂交瘤中和通过基因工程技术从用载有此抗体基因的重组表达载体转化的宿主中生产的抗体。在本专利技术中应用的抗体能结合到PTHrP上以阻止PTHrP与PTH/PTHrP受体的结合，因而阻止PTHrP的信号传导，其结果是阻止PTHrP的生物学活性。此类抗体的一个具体例子是#23-57-137-1抗体，它可从杂交瘤克隆#23-57-137-1中被生产出来。杂交瘤克隆#23-57-137-1被命名为“鼠-鼠杂交瘤#23-57-137-1”并按照《布达佩斯条约》于1996年8月15日被保存在日本的日本国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi 1-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki，Japan)，其保藏编号为No.FERM BP-5631。2.产生抗体的杂交瘤产生单克隆抗体的杂交瘤可由任何已知技术生产。那就是，依据通常的免疫方法，将PTHrP用作抗原而进行免疫反应。得到的免疫细胞与已知的亲本细胞按通常的细胞融合方法融合，用通常的筛选方法从融合细胞中筛选产生单克隆抗体的细胞。更具体地讲，产生单克隆抗体的细胞可以下述的程序来制备。第一步，被用作用于生产抗体的致敏抗原的人PTHrP通过表达由Suva，L.J.等在Science(1987)237，893中公开的PTHrP基因/氨基酸序列而得到。即将编码PTHrP的核苷酸序列嵌入到任何已知的表达载体中去，再用此表达载体转化合适的宿主细胞。从转化的宿主细胞中或从被转化宿主细胞的培养上清液中用已知方法分离和纯化PTHrP蛋白质。第二步，把纯化的PTHrP蛋白质用作致敏抗原。或者，可将PTHrPN-末端的34个氨基酸的肽用作致敏抗原，该肽可被化学合成。可用致敏抗原免疫的哺乳动物不被特别地限制。然而，由于考虑到其与用于融合的亲代细胞的相容性而优先选择哺乳动物。一般地，啮齿类动物(如小鼠、大鼠、仓鼠、兔)或猴可被应用。用致敏抗原免疫哺乳动物，可按任何已知的方法完成，例如，腹腔内或皮下注射致敏抗原给哺乳动物。更具体地，将致敏抗原用磷酸盐缓冲液(PBS)或生理盐水适度稀释并悬浮于其中，接着把得到的悬浮液与适量的佐剂(如弗氏完全佐剂)混合得到乳浊液。以4到21天的间隔几次注射乳浊液给哺乳动物。在此免疫中，可将致敏抗原连接到合适载体上。免疫后，检测血清抗体水平。当血清抗体水平被确定已达到期望的水平时，从哺乳动物中分离出免疫细胞并用于细胞融合。优选的免疫细胞为脾细胞。用作细胞融合的亲本细胞(即与免疫细胞融合的细胞)是从哺乳动物而来的骨髓瘤细胞。骨髓瘤细胞可是任何一种已知的细胞系，例如可以是P3(P3x63Ag8.653)(免疫学杂志(J.Immnol.(1979)123，1548-1550)、P3X63Ag8U.1(当前微生物学和免疫学中的论题Current Topicsin Microbiology and Immunology)(1978)81，1-7)、NS-1(Kohler，G.AndMilstein，本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗甲状旁腺素相关肽（ＰＴＨｒＰ）的抗体作为活性成分在制备用于恶病质的治疗剂中的应用。

【技术特征摘要】
JP 1997-5-15 125505/97;JP 1997-7-18 194445/971.抗甲状旁腺素相关肽(PTHrP)的抗体作为活性成分在制备用于恶病质的治疗剂中的应用。2.权利要求1的应用，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤功，恒成利明，石井公惠，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]