雷公藤甲素在制备治疗肾小球足细胞疾病的药物中的应用制造技术

一种雷公藤甲素的用途，它可以用于治疗肾小球足细胞疾病。它可以抑制肾小球足细胞的损伤，显著降低肾小球足细胞疾病中蛋白尿的产生，因此可以用于制备治疗肾小球足细胞疾病的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及雷公藤甲素，具体地说，是涉及雷公藤甲素在治疗肾小球足细胞疾病中的应用。
技术介绍
肾小球足细胞疾病是一种临床常见的肾小球疾病，包括膜性肾病、微小病变、局灶节段肾小球硬化(FSGS)、糖尿病肾病、膜增生性病变等，目前临床上缺乏有效的治疗。雷公藤甲素(triptolide，以下简称TP)其结构如下 它是从卫矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii)中分离出的活性最高的环氧化二萜内酯化合物，是雷公藤的主要有效成分之一，其相关效价比雷公藤总苷高100～200倍。因此雷公藤甲素作为药物有其优越性。
技术实现思路
肾小球的足细胞发生功能结构的改变是上述这些疾病中产生大量蛋白尿的一个重要因素，从这一环节进行干预是治疗这些肾小球疾病的途径之一。本专利技术人进一步研究表明，口服雷公藤甲素能有效降低Heymann肾炎大鼠的蛋白尿，体外研究发现雷公藤甲素能保护足细胞的骨架结构，恢复足细胞相关蛋白的表达。实验表明，雷公藤甲素治疗7天即可显著降低大鼠的蛋白尿，与模型对照组相比，低剂量雷公藤甲素治疗组和高剂量治疗组的蛋白尿显著降低。治疗14天后，低剂量治疗组和高剂量治疗组的大鼠尿蛋白均转阴，与模型对照组相比，差异非常显著(P＜0.01)。实验表明，雷公藤甲素对Heymann肾炎大鼠肾组织病变有明显的治疗作用。光镜下模型组可见肾小球基底膜增厚，GBM外侧钉突形成，上皮下少量嗜复红物；观察至2周时可见广泛的钉突形成，血管袢僵硬，局部基底膜呈链条样改变。雷公藤甲素治疗组上述病变程度减轻，钉突形成减少，血管袢开放得到改善。在电镜下模型对照组观察7天时出现少许上皮下电子致密物沉积，第14天时已有明显电子致密物沉积，钉突形成，基底膜增厚，足突变平、融合或消失。雷公藤甲素治疗组可见钉突形成减少，上皮下电子致密物沉积减少，基底膜增厚现象较对照组有明显改善，足突融合也有明显改善。实验表明，雷公藤甲素对膜性肾病足细胞表面分子损伤的治疗作用。肾组织使用抗Nephrin的免疫组化染色，观察雷公藤甲素对足细胞损伤的治疗作用。免疫组化结果显示，Nephrin在正常大鼠肾小球中沿毛细血管袢呈均匀连续的线样分布，模型对照组可见Nephrin的表达明显减少，观察至第7天时呈颗粒状分布，第14天呈弥散稀疏的颗粒状分布。在低剂量和高剂量的雷公藤甲素治疗组中，Nephrin的表达均比模型对照组有明显增加。实验表明，正常分化足细胞F-actin呈丝状结构，密度大，丝强劲有力，沿细胞极性分布；podocin和synaptopodin呈线状均匀分布于胞质内、核膜及胞膜的表面；ZO-1沿足突呈线状分布。PAN作用24h小时后，细胞表现出去分化现象，细胞骨架结构发生改变细胞足突回缩，F-actin几乎完全解聚。足细胞相关分子podocin丝状结构消失，呈均匀团块状；synaptopodin表达消失；ZO-1表达减弱。而雷公藤甲素与PAN同时作用24h，足细胞未表现出上述骨架结构和足细胞相关分子表达的改变。嘌呤霉素(PAN)作用24h后再加入雷公藤甲素，细胞骨架表现出修复，细胞内重新出现了沿细胞极性分布的微丝，podocin丝状结构恢复，synaptopodin和ZO-1表达恢复。表明雷公藤甲素可稳定足细胞的细胞骨架，保护足细胞并对足细胞的损伤具有治疗作用。从上述实验结果证明雷公藤甲素能治疗肾小球足细胞疾病，能应用与制备治疗肾小球足细胞疾病的药物。附图说明图1为口服雷公藤甲素对Heymann肾炎大鼠肾组织病变的电镜结果。A为型对照组的电镜照片(箭头示电子致密物)，B为雷公藤甲素治疗2周后的电镜照片。图2为雷公藤甲素对膜性肾病足细胞表面分子Nephrin损伤的治疗作用。A.正常大鼠观察1周的光镜照片；B.正常大鼠观察2周的光镜照片；C.模型对照观察1周的光镜照片；D.模型对照观察2周的光镜照片；E.低剂量治疗1周的光镜照片；F.低剂量治疗2周的光镜照片；G.高剂量治疗1周的光镜照片；H.高剂量治疗2周的光镜照片。图3为雷公藤甲素对足细胞骨架结构和相关分子表达的影响的共聚焦照片。A、E、I正常分化足细胞骨架蛋白(A红色荧光)、ZO-1(A绿色荧光)、podocin(E)和synaptopodin(I)染色B、F、J嘌呤霉素处理组足细胞骨架蛋白(B红色荧光)、ZO-1(B绿色荧光)、podocin(F)和synaptopodin(J)染色C、G、K雷公藤甲素与嘌呤霉素同时作用24h，足细胞骨架蛋白(C红色荧光)、ZO-1(C绿色荧光)、podocin(G)和synaptopodin染色(K)D、H、L嘌呤霉素作用24h后再加入雷公藤甲素，足细胞骨架蛋白(D红色荧光)、ZO-1(D绿色荧光)、podocin(H)和synaptopodin染色(L)具体实施方式实施例1 口服雷公藤甲素降低Heymann肾炎大鼠蛋白尿的作用药品雷公藤甲素，白色晶体，DMSO溶解后用蒸馏水稀释成20μg/ml，灌胃。Heymann肾炎模型的建立从健康雄性Wistar大鼠中提取FX1A抗原，免疫新西兰白兔，获取兔抗血清。选择150g-180g健康雌性SD大鼠，腹腔注射兔抗FX1A抗原的血清，留取24h尿液，尿蛋白＞10mg/24h认为模型建立。实验方法将模型大鼠分为对照组、雷公藤甲素低剂量治疗组和高剂量治疗组，同时选择正常大鼠作为对照。留取24h尿液，测尿蛋白。观察重点雷公藤甲素降低Heymann肾炎大鼠蛋白尿的作用。实验结果雷公藤甲素治疗7天即可显著降低大鼠的蛋白尿，与模型对照组(90.04±39.93mg/24h)相比，低剂量治疗组(33.18±5.80mg/24h)和高剂量治疗组(53.52±26.63mg/24h)的蛋白尿显著降低。治疗14天后，低剂量治疗组和高剂量治疗组的大鼠尿蛋白均转阴，与模型对照组(32.32±14.09mg/24h)相比，差异非常显著(P＜0.01)。实施例2 口服雷公藤甲素对Heymann肾炎大鼠肾组织病变的治疗作用药品雷公藤甲素，白色晶体，DMSO溶解后用蒸馏水稀释成20μg/ml，灌胃。实验方法被动性Heymann肾炎模型的建立以及模型动物的分组同实施例1。分别在治疗1周和2周时，观察肾小球组织结构的改变；电镜观察足突结构、上皮下电子致密物的沉积以及基底膜的改变。实验结果光镜下模型组可见肾小球基底膜增厚，GBM外侧钉突形成，上皮下少量嗜复红物；观察至2周时可见广泛的钉突形成，血管袢僵硬，局部基底膜呈链条样改变。治疗组上述病变程度减轻，钉突形成减少，血管袢开放得到改善。电镜模型对照组观察7天时出现少许上皮下电子致密物沉积，第14天时已有明显电子致密物沉积，钉突形成，基底膜增厚，足突变平、融合或消失。治疗组可见钉突形成减少，上皮下电子致密物沉积减少，基底膜增厚现象较对照组有明显改善，足突融合也有明显改善(见图1)。实施例3 雷公藤甲素对膜性肾病足细胞表面分子损伤的治疗作用使用药品和实验方法同实施例2，肾组织使用抗Nephrin的免疫组化染色，观察雷公藤甲素对足细胞损伤的治疗作用。实验结果免疫组化结果显示，Nephrin在正常大鼠肾小球中沿毛细血管袢呈均匀连续的线样分布，模型对照组可见Nephrin的表达明显减少，观察至第7天时呈颗粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
雷公藤甲素在制备治疗肾小球足细胞疾病中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志红，黎磊石，
申请(专利权)人：中国人民解放军肾脏病研究所，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]