本发明专利技术公开了一种抗肿瘤生物活性物质，它是将心脏组织培养成具有抗肿瘤活性的心肌细胞培养液，具体步骤为制细胞悬液、反复冻融、离心过滤，本发明专利技术通过长达三年的实验研究，证明这种心肌细胞裂解液抑瘤（抗癌）作用确切，且无治疗的毒副作用，其剂型分为液体制剂和真空冻干粉剂两种剂型，其抗肿瘤作用强度和毒副作用方面都优于传统生物制剂，可望广泛用于恶性肿瘤的临床治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及将心脏组织培养成具有抗肿 瘤活性的心肌细胞培养液，以及其制备方法。
技术介绍
肿瘤是人体组织细胞在内外各种有害的因素长期作用下，发生基 因突变，表达紊乱，调节失控，产生过度增生及异常分化所形成的新 生物或赘生物，临床上常以肿块形式出现。这种新生物并非机体所需 要，不按正常规律生长或不可遏止的生长，已丧失正常组织细胞功能， 并可破坏原来器官组织结构，进而危及生命.恶性肿瘤具有三个共同特征即1.自主性生长，2.浸润性生长和转移灶形成，l癌细胞的特 性可传递给它的子代细胞。现有治疗肿瘤的药物一般分为七大类别，分别是烷化剂、抗代谢 类、抗肿瘤抗生素、植物碱、杂类常见的药物、激素类常见的药物和 生物工程生成的抗肺瘤药物。近几年生物制剂的发展特别迅速，对生物制剂中的活性物质的研 究也蓬勃发展，这些活性物质一般包括l.千扰素主要应用于毛细 胞白细胞、Kaposi肉瘤、低度恶性淋巴瘤；2.白细胞介素IL-2与 LAK细胞联合使用，对癌细胞产生非特异性杀伤作用，IL-11升高血小板，用于化疗药物使用导致的血小板降低的临床治疗；3.单克隆 抗体如抗CD20单抗美罗华用于治疗B细胞淋巴瘤；4.生长因子GM -CSF、 G-CSF;促进粒细胞、巨噬细胞分化成熟，用于抗肿瘤的辅 助治疗用药以及用于化疗药物使用导致的白细胞降低的临床治疗；5. 肿瘤坏死因子局部应用，瘤内注射可以起到一定的局部抗肿瘤作用。 生物制剂活性物质种类繁多，目前尚无任何药物有效的治疗各类 恶性肿瘤，其临床应用受到限制的常见原因为l.大部分生物制剂均 有发热、乏力、骨髓功能抑制等毒副作用；2.抗肿瘤作用通常为非特 异性，其抗肿瘤作用较弱，部分生物制剂仅有增强或调解免疫力从而 起到抗肺瘤辅助作用；3.大部分生物制剂由于受到化学工艺提取以 及合成的生产成本高等原因，其生物制剂价格昂贵，从而应用于临床 受到较大限制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺点而提供一种无毒的、 广谱的、具有免疫作用的并易于获得的抗肿瘤心肌细胞裂解液，本发 明的另 一 目的是提供这种抗肿瘤心肌细胞裂解液的制备方法。本专利技术的目的是这样实现的本专利技术的抗肿瘤活性物质是一种心肌细胞裂解液，具体的，这种 心肌细胞裂解液是由心脏组织经以下步骤获得l)制细胞悬液将心脏组织制成均匀的细胞悬液，迅速置于低 于-2(TC环境中冷冻；2) 反复冻融冷冻24小时后取出置于室温融解，待完全融解后， 再次置于-20。C环境中冷冻，如此反复三次，得到冻融裂解的匀浆液；3) 离心过滤将该匀浆液在3000转/分的条件下离心30分钟， 将上清液以截留量10KD的超滤过滤后，收集分子量小于10KD的滤液 即为心肌细胞裂解液。更为具体的，所述的心肌细胞培养液是由以下步骤制得1) 制细胞悬液将心脏组织制成的细胞悬液在2000转/分的条 件下勻浆30分钟后，迅速置于低于-20。C环境中冷冻；2) 反复冻融冷冻24小时后取出置于室温融解，待完全融解后， 再次置于-20。C环境中冷冻，如此反复三次，得到冻融裂解的勻浆液；3) 离心过滤将该勻浆液在3000转/分的条件下离心30分钟， 将上清液以截留量10KD的超滤过滤后，收集分子量小于10KD的滤液 即为心肌细胞裂解液。本专利技术通过长达三年的实-验研究，且无治疗的毒副作用。其剂型分为液体制剂和真空冻干粉剂两种剂型，可望广泛用于恶性肿瘤的临 床治疗，使用时将心肌细胞裂解液液体制剂经静脉注射，或者将心肌 细胞裂解液的真空冻干粉剂溶解于注射用水后经静脉注射给药，或者 将心肌细胞裂解液的真空冻干粉剂溶解于0. 9%氯化钠溶液(即生理 盐水)后经静脉注射给药途径从而实现抗胂瘤治疗目的。从而该生物 制剂可以弥补传统生物制剂的不足，在其抗肺瘤作用强度和毒副作用 方面都优于传统生物制剂。其具体实验如下心肌细胞裂解液体内抑 瘤活性研究实验，步骤为制备乳大鼠与成年大鼠心肌裂解液，收集分 子量小于10KD的滤液，小鼠接种S180细胞随机分组。阴性对照组为 生理盐水；阳性对照组为顺柏注射液，实验组为乳鼠心肌细胞裂解液(CMCLnr )、成年大鼠心肌细胞裂解液(CMCLar )， CMCLnr、 CMCLar 组相比较其接种肿瘤出现时间无显著差异，其接种生长出的肿瘤瘤重 均无显著性差异，两组不同的心肌低分子抑瘤物组和顺铂组肿瘤出现 时间比生理盐水组出现时间要晚，从而我们得出，两组不同的心肌低 分子抑瘤物(即CMCLnr、 CMCLar)和传统抗癌化疗药物顺铂都具有 抗癌、抑瘤作用，CMCLnr、 CMCLar均具有相同的抑瘤活性，在小鼠 体内均能抑制S180肿瘤细胞的生长，其抑瘤分子量小于IOKD。同时 我们观察小鼠体重及小鼠体重增加两项指标，顺铂分别与生理盐水组 及CMCLnr、 CMCLar比较，两项指标的差异均有统计学意义；CMCLnr、 CMCLar与生理盐水组的差异均无统计学意义，且CMCLnr、 CMCLar两 组之间分别进行比较，其差异亦无统计学意义。实验结果表明CMCLnr、 CMCLar对小鼠的正常生长无明显影响，具有抗癌、抑瘤良好的生物 安全性，而没有传统抗癌化疗药物具有的影响机体正常生长等毒副作 用。(注CMCLnr:乳鼠心肌细胞裂解液CMCLar成年大鼠心肌细胞 裂解液) 附图说明图1:新生大鼠心肌细胞裂解液及成年大鼠心肌细胞裂解液匀浆 液图片；图l说明左侧匀浆管内液体为新生大鼠心肌细胞裂解液，右侧 匀浆内液体为成年大鼠心肌细胞裂解液，图片中显示的裂解液为心肌 组织剪碎并经过匀浆机充分匀浆后，第3次-20。C冷冻24小时后取出置于室温处于融解中的状态，两侧匀浆管内的裂解液中可见悬浮于管 中的裂解液冷冻块。新生大鼠心肌细胞裂解液(左侧管)裂解液为淡 黄色，管中尚未融解冷冻块颜色比裂解液稍深，呈乳黄色，未成年大 鼠心肌细胞裂解液(右侧管)裂解液为淡红色，管中尚未融解冷冻块 颜色比裂解液稍深，呈绛红色。图2:新生大鼠心肌细胞裂解液及成年大鼠心肌细胞裂解液超滤 后图片。图2说明图中为所收集的乳鼠和成年大鼠心肌细胞充分冻融裂 解的匀浆液，处理条件均以3000转/分离心30min，弃去沉淀，取上 清液以截留量10KD的超滤离心管4000转/分，10min离心，收集分 子量小于10KD的心肌细胞裂解液超滤液，其中图中A管为新生大鼠 心肌细胞裂解液超滤液，外观颜色为淡黄色液体，图中B管为成年大 鼠心肌细胞裂解液超滤液，外观颜色为淡红色液体，其余管中红色液 体为心肌细胞培养液超滤液。 具体实施例方式下面结合附困和具体实验对本专利技术作进一步的详细说明心肌细胞裂解液的作用从理论上分析为骨骼肌系统体积庞大， 血流丰富，尤其是剧烈运动时，因此经血流向骨骼肌播散的恶性肿瘤 数目应颇为可观，但骨骼肌转移瘤却罕见。心脏作为全身血液循环 的主要器官，其血液供应非常丰富，而转移瘤较少，其中主要是心包 转移，心肌转移罕见。心肌和骨骼肌同属于横紋肌系统，均具有恶性肿瘤不易转移到横紋肌系统特性，以色列的Djaldetti等国外学者， 周乃康、罗成华等国内学者通过实验并证明骨骼肌条件培养液中存在 低分子抑瘤活性物质，其对恶性肿瘤细胞具有广泛的抑制作用，而非 肺瘤的增殖则未受到明显本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗肿瘤生物活性物质，其特征在于，其为心肌细胞裂解液，所述心肌细胞裂解液由心脏组织经以下步骤获得： １）制细胞悬液：将心脏组织制成均匀的细胞悬液，迅速置于低于－２０℃环境中冷冻； ２）反复冻融：冷冻２４小时后取出置于室温融解，待完全融解后，再次置于－２０℃环境中冷冻，如此反复三次，得到冻融裂解的匀浆液； ３）离心过滤：将该匀浆液在３０００转／分的条件下离心３０分钟，将上清液以截留量１０ＫＤ的超滤过滤后，收集分子量小于１０ＫＤ的滤液即为心肌细胞裂解液。
【技术特征摘要】
1、一种抗肿瘤生物活性物质，其特征在于，其为心肌细胞裂解液，所述心肌细胞裂解液由心脏组织经以下步骤获得1)制细胞悬液将心脏组织制成均匀的细胞悬液，迅速置于低于-20℃环境中冷冻；2)反复冻融冷冻24小时后取出置于室温融解，待完全融解后，再次置于-20℃环境中冷冻，如此反复三次，得到冻融裂解的匀浆液；3)离心过滤将该匀浆液在3000转/分的条件下离心30分钟，将上清液以截留量10KD的超滤过滤后，收集分子量小于10KD的滤液即为心肌细胞裂解液。2、 一种抗肿瘤生物活性物质的制备工艺...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬波，
申请(专利权)人：泸州医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：51[中国|四川]
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