一种可以用于引发针对肿瘤相关巨噬细胞的免疫应答的ＤＮＡ组合物，该组合物包含一种编码半胱氨酸肽链内切酶（例如豆荚蛋白）或编码含有其在诸如肿瘤相关巨噬细胞的肿瘤相关细胞中过表达的至少一个免疫原性片段的多肽的ＤＮＡ构建体，或该构建体的在免疫细胞中可表达的免疫原性片段，此ＤＮＡ组合物掺入一种药用可接受的载体中。在一种优选实施方案中，该组合物编码一种多肽，该多肽包含肿瘤相关半胱氨酸肽链内切酶的（例如豆荚蛋白）的多个免疫原性片段，其免疫原性片段之间依次连接，每个片段通过诸如ＡｌａＡｌａＡｌａ或ＡｌａＡｌａＴｙｒ的连接肽连接到至少一个其他片段。在一种优选实施方案中，该组合物也包含编码诸如细胞因子的免疫效应蛋白的ＤＮＡ构建体。本发明专利技术的ＤＮＡ组合物可以单独使用，也可与化疗药物一起使用，用于治疗诸如肿瘤和肿瘤转移的疾病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及编码能够引发针对肿瘤相关巨噬细胞的免疫应答的适 当分子的脱氧核糖核酸(DNA)组合物。更特别地，本专利技术涉及DNA 组合物，该组合物编码一种肽链内切酶，例如豆荚蛋白(legumain)的至 少一个表位，该肽链内切酶在肿瘤相关细力包，例如肿瘤相关巨噬细月包 中有表达。本专利技术也涉及使用该DNA组合物抑制肿瘤生长和肿瘤转移 的方法。
技术介绍
月中瘤相关巨喧细胞(tumor-associated macrophages, TAMs )与月中瘤 的恶化和转移有关。 一种新的抗肿瘤策略是对被TAM过表达的分子进 行免疫，从而改变吸引巨噬细胞并介导它们的作用的肿瘤微环境的结 构(参见Oosterling等，2005 J. Pathol. 207:147-155; Emens等，2005 Endocr. Relat Cancer 12:1-17 )。 TAM主要由一种极化了的M2( CD206+， F4/80+)巨噬细胞群体组成，由于它们仅能产生有限的一氧化氮和促炎 症细胞因子，因此这类巨噬细胞对肿瘤细胞几乎没有细胞毒性(参见 Mills等，2000 J. Immunol. 164:6166-6173 )。TAM也有^f艮弱的抗原呈递能力，并能有效地抑制T细胞激活。事实上，通过分泌多种类型的生长和血管再生前因子以及金属蛋白酶， 并通过它们在调节肺瘤细胞基质中成纤维细胞的功能的信号环路中的参与，这些M2表现型的巨噬细胞确实能促进肿瘤细胞的增殖和转移 (Mantovani等。2004, Novartis. Found. Symp. 256:137-145 )。当前，已有报道表明小分子抑制剂诱导产生的抗TAM效果能够对 肺瘤产生抑制效果(参见Lewis等，2005 Am. J. Pathol. 167:627-635, 和Manto權i等，2004, Eur. J. Cancer 40:1660-1667 )。例如，yondelis, 一种抗肺瘤药，具有对TAM的选择性细胞毒作用，从而明显减少它们 产生IL6和CCL2的量，因此对炎症相关人类肿瘤的生长抑制起到效果 (参见Allavena等，2005, Cancer Res. 65:2964-2971 )。另 一个这样的例 子是一种双磷酸盐化合物，唑来膦酸，它能够抑制TAM分泌MMP9， 从而抑制肺瘤金属蛋白酶的活性并逐渐减弱VEGF与其酪氨酸激酶受 体在表皮细胞生长中的联系(参见Giraudo等，2004, J. Clin. Invest. 114:623-633 )。在另 一种不同的实验模型中，趋化因子CCL5被表明在TAM的聚 集中具有重要作用。该趋化因子的一种拮抗剂减弱肿瘤的浸润，从而 减慢肿瘤生长(参见Robinson等，2003, Cancer Res. 63:8360-8365 )。 因此，尽管TAM作为治疗目标依然是一相对较新的途径，初步的临床 结论是令人鼓舞的，因为它们表明以TAM作为靶点可能会带来更多的 常规癌症治疗方法。豆荚蛋白是半胱氨酸蛋白酶C13家族的一种全新的进化分支(参 见Ishii 1994, Methods Enzymol. 244:604-615 )，并且在植物和包含人类 的哺乳动物中相当保守。豆荚蛋白最初被作为 一 种种子萌发过程中的 存储蛋白的处理酶发现于植物中，随即在寄生虫中和哺乳动物中也被 发现。豆荚蛋白是一种稳定的酸性半胱氨酸肽链内切酶，它具有非常 显著的限定特异性，要求其底物序列的PI位置必须有一个天冬酰胺酸 (参见Chen et al. 1997, J. Biol. Chem. 272:8090-8098 )。在本申请中，选择豆荚蛋白作为胂瘤治疗的靶点的事实依据是， 编码该肽链内切酶的基因被发现在多种鼠和人类肿瘤组织中都是高度 上调的，但在所有这些生长有上述肿瘤的正常組织中则没有或仅有很 少量水平的存在。重要地，豆荚蛋白的过表达在诸如肺瘤缺氧的应激 条件下发生，并导致肿瘤恶化的增加、血管生成以及肿瘤转移。豆荚蛋白是本专利技术的组合物以及方法的 一种特别优选的目标肽链内切酶，这是基于如下观察资料在鼠乳腺癌组织中，基因表达谱和 免疫组织化学都表明豆荚蛋白被TAM高度过表达。TAM在肿瘤基质 中对豆荚蛋白有尤其充足的表达。与之相比，发挥重要的免疫监视和 抗原呈递功能的经典M1表现型巨噬细胞则不表达豆荚蛋白。因而，以 过量表达豆荚蛋白的TAM作为靶点不会与(Ml)巨噬细胞的包括细 胞毒性和抗原呈递的生物学功能发生干扰。本专利技术提供的DNA组合物 能够引发针对过量表达豆荚蛋白或其他在TAM中过量表达的肽链内切 酶的TAM的免疫应答，这对治疗紳瘤和其转移是有用的。专利技术概述本专利技术的DNA组合物包含一种DNA构建体，该构建体编码一种 包含在肿瘤相关细胞(例如，肺瘤相关巨噬细胞)中过量表达的半胱 氨酸肽链内切酶的至少一个免疫原性片段的多肽。该DNA构建体包含 能够协助多肽在该DNA构建体所施用的受试者的免疫细胞中表达的结 构性元件。优选地，该肽链内切酶包含豆荚蛋白或至少一种其免疫原 性片段(例如，表位)。该DNA构建体被搀入药用可接受的载体中， 以便能够施用于患者。组合物可以编码肽链内切酶的单个免疫原性片 段(例如豆荚蛋白的一个表位)，包含该肽链内切酶的两个或多个免疫 原性片段的多肽(即免疫原性多肽)，整个肽链内切酶蛋白，或其能够 引发受试者免疫应答的任何一部分。优选地，该DNA构建体编码具有 由SEQ ID NO: 2组成的氨基酸残基序列的人类豆荚蛋白，与SEQ ID NO:2的序列具有至少80%序列一致性的蛋白(例如人类豆荚蛋白，猪 豆荚蛋白，或小鼠豆荚蛋白)，或其免疫原性片段，且在被施用该DNA 构建体的受试者的免疫细胞中可表达。本专利技术的DNA构建体对抑制胂 瘤生长和转移有用。该DNA构建体可以是棵DNA构建体，优选地，以质粒的形式。 这些棵DNA构建体可以被掺入(incorporated in)脂质体递送载体、聚合 物递送载体中，或者必要的情况下可以通过电穿孔、基因枪和其他方 法施用。在一些优选的实施方案中，DNA构建体可以净皮掺入减毒病毒 载体或减毒细菌载体中。在一种优选实施方案中，DNA构建体被掺入如减毒鼠伤寒沙门氏菌的减毒细菌载体中，例如双减毒(AroA-、 dam。鼠伤寒沙门氏菌菌林。可选地，DNA組合物也可以包含编码免疫效应蛋白(如细胞因子) 的DNA构建体。优选的细胞因子包括CCL21、 IL-2和CD40LT。在一种尤其优选的实施方案中，本专利技术的DNA组合物包含编码免 疫原性多肽的DNA小基因(minigene)构建体，该多肽包含在肿瘤相关 细胞中高表达的半胱氨酸肽链内切酶(例如豆荚蛋白)的大量免疫原 性片段(例如抗原表位)。该免疫原性多肽能够引发对肿瘤相关细胞的 免疫应答，在免疫细胞中可表达，并被掺入药用可接受的载体中。通 过连接肽在每个相邻(successive)多肽片段之间的连接，这些免疫原性 片段依次连接在一起。典型地，连接肽长为至少3个氨基酸残基，优 选的情况下它包含氨基酸序列AAA或AAY。在此使用的术语"连接 肽"指至少2个氨基酸残基的序列，优选地，至少3个氨基酸残基的 序列，当它与本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包含编码多肽的ＤＮＡ小基因构建体的ＤＮＡ组合物，所述多肽包含在肿瘤相关细胞中表达的半胱氨酸肽链内切酶的多个免疫原性片段，所述多个免疫原性片段通过多肽中各相邻片段之间的连接肽依次连接起来，其中所述多肽能够引发对肿瘤相关细胞的免疫应答，可在免疫细胞中表达，并被掺入药用可接受的载体中。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：RA赖斯菲尔德，R向，Y罗，
申请(专利权)人：斯克里普斯研究学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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