融合肽治疗组合物制造技术

本发明专利技术提供含有包含弹性蛋白样肽（ＥＬＰｓ）和肽活性治疗剂的融合蛋白（ＦＰｓ）的治疗组合物，及制备和使用这种组合物和融合蛋白的方法。这类治疗组合物与单独的肽活性治疗剂相比，使得肽活性治疗剂的改进功效得以实现。与相应的含有相同肽活性治疗剂但不含相关ＥＬＰｓ的组合物相比，本发明专利技术治疗组合物中的肽活性治疗剂的增强的功效可包括改进的溶解性、生物利用度、生物不可利用度和半寿期等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】融合肽治疗组合物相关申请资料本申请依据美国法典第35巻第119条第5项(35U.S.C. § 119 (e))要求2006年9月6日提交的美国专利申请系列号60/842,464的优 先权，该专利申请通过引用整体结合到本文中。 专利
本专利技术提供掺入了包含弹性蛋白样肽(elastin-like peptides, ELPs)和肽活性治疗剂的融合蛋白(fUsion proteins, FPs)的新一代治疗合的ELPs的相应组合物相比，能使所给予的肽活性治疗剂的溶解度、 生物利用度或生物不可利用度(bio-unavailability)和半寿期的提高得 以实现。
技术介绍
为所有目的，将2005年2月8日授权的、Ashutosh Chilkoti 名下的题为 "FUSION PEPTIDES ISOLATABLE BY PHASE TRANSITION"(可通过相转变分离的融合肽)"的美国专利第6,852,834 号和2005年2月8日提交的Ashutosh Chilkoti名下的题为"FUSION PEPTIDES ISOLATABLE BY PHASE TRANSITION，，(可通过相转变 分离的融合肽)"的美国专利申请第11/053， 100号的公开内容各自通过 引用整体结合到本文中。上述Chilkoti的专利和专利申请公开了包含ELP肽的遗传上 可编码的环境响应性融合蛋白。这种融合蛋白显示出独特的物理化学 特性和功能特性，这些特性可随溶液环境变化来进行调节。 专利技术概述本专利技术主要涉及包含弹性蛋白样肽和肽活性治疗剂的融合蛋白治疗组合物。在本专利技术的FP治疗组合物中，有至少一个肽活性治疗剂与一 个或多个ELPs偶联(coupled)，例如在其N末端或C末端共价4建合， 以实现肽活性治疗剂的功效的增强，这一增强是相对于相应的单独治 疗剂而言。肽活性治疗剂-ELP构建物功效的增强表现在多个特性的 任何一个，如所给予的肽活性治疗剂的溶解度、生物利用度、生物不 可利用度、治疗剂量、对蛋白水解的抗性、半寿期等。 在另 一个方面，本专利技术涉及包含与表达控制元件如适当类型的 启动子可操作地连接(operably linked)的异源核苷酸序列的融合基因 构建物，其中异源核苷酸序列编码包含与至少一个ELP偶联的至少 一种肽活性治疗剂的融合蛋白。在又一个方面，本专利技术涉及增强肽活性治疗剂的功效的方法。 所述方法包括将肽活性治疗剂与至少 一个ELP偶联以形成FP治疗组 合物，其中这种FP治疗组合物中的肽活性治疗剂相对于单独的肽活 性治疗剂来说具有增强的功效。在一个方面，增强的功效是体内功效。 本专利技术的另 一个方面涉及治疗需要肽活性治疗剂的受试者的 方法，所述方法包括给予该患者包含以下的治疗组合物(i)与至少一 个ELP偶联的肽活性治疗剂，或(ii)编码包含肽活性治疗剂和至少一 个ELP的融合蛋白的核苷酸序列，这个序列可操作地连接到其表达 控制元件。在还另一个方面，本专利技术涉及其中治疗剂与ELP缀合 (conjugate)的治疗剂剂型。由下续的/>开内容和所附的权利要求书，可更加清楚地了解本 专利技术各个其他的方面、特征和实施方案。附图简述附图说明图1是SDS-PAGE凝胶图，显示了使用实施例1的表达和纯化方法进行的37个氨基酸的肽的表达情况。图2是曲线图，证实了实施例1的方法所得的肽的纯化。图3是SDS-PAGE凝胶图，显示了实施例6所述的BFP、 CAT 和Kl-3的ITC纯化的结果。图4A和4B是曲线图，显示了实施例8的每个融合构建物在 PBS緩冲液中作为温度函数的浊度的增加。图5是曲线图，说明了实施例9所述的14C标记ELP的血液 浓度与时间的变化关系。图6是柱图，显示了实施例10所述的14C标记ELP1-150和 ELP 2-160在棵鼠中的生物分布。图7是柱图，显示了实施例10所述的14C标记ELP2-在棵鼠中的生物分布。专利技术详述本专利技术提供掺入了包含弹性蛋白样肽和肽活性治疗剂的融合 蛋白的治疗组合物。本专利技术的治疗组合物与含有相同肽活性治疗剂但不含与之结 合的ELPs的相应组合物相比，能使所给予的肽活性治疗剂的功效的 提高得以实现，所述功效的提高例如溶解度、生物利用度、生物不可 利用度(在需要避免出现蓄积和/或毒性如心脏毒性的情况下)、半寿期 等的改进。为在后续的说明中便于查考，以下给出在其中出现的具体术语 的定义。术语"蛋白(质)"在本文中以一般性含义使用，包括任何长度的 多肽。本文所用的术语"肽"要作广义解释，包括分子量最高达约 10,000的多肽本身，以及分子量超过约10,000的蛋白质，其中分子 量是数均分子量。在一个具体的方面，具有约2至约IOO个氨基酸残 基的肽特别优选作为本专利技术的肽活性治疗剂。本文所用的术语"偶联"意指各指定部分(specified moieties)相 互间直接发生共价#:合，或者它们相互间通过一个或多个间插部分(intervening moiety)例如桥(bridge)、间隔序列(spacer)或4定(linkage)部 分间接发生共价连接，或者它们相互间通过例如氩键键合、离子4建合、 范德华力等发生非共价偶联。本文所用的术语"半寿期"意指活性剂的生物活性出现50%减 低所需的时间。这个术语要与"持续期"和"清除率"区别开来，持续期 是活性剂在身体内的总持续时间，清除率是一个动态变化的变量，可 与半寿期和持续期的数值有关联或没有关联。词语"转化"在本文中作广义使用，指通过任何本领域公知的方 法(包括例如来自细胞或病毒颗粒的多核苷酸序列的直接传导及通过 感染性病毒颗粒的传导)将外源多核苷酸序列导入到原核生物或真核 生物细胞中，导致无限增殖化或非无限增值化细胞系的基因型的永久 或暂时改变。术语"功能等同物"在本文中用来指作为天然蛋白质的活性类 似物、衍生物、片段、截短同种型等的蛋白质。某多肽当它保持了相 应天然多肽的一些或全部生物活性时是有活性的。 本文所用的本专利技术制剂的"药物可接受"成分(如盐、载体、赋 形剂或稀释剂)是这样的成分，它(l)与制剂的其他成分相容，表现在 它能与本专利技术的FPs结合在一起又不会消除FPs的生物活性；和(2) 适合在动物(包括人)中使用而不会产生过度的不利副作用(如毒性、刺 激和过敏反应)。副作用在药物组合物的风险大于它们所提供的好处 时是"过度"的。药物可接受成分的实例包括但不限于任何标准的药物 载体如磷酸緩冲盐溶液、水、乳液如油/水乳液、微乳液和各种类型的湿润剂。本文所用的涉及蛋白质的术语"天然"表示该蛋白质具有自然 界中所存在的相应蛋白质的M酸序列。本文所用的术语"间隔序列，，指任何可插入在给定的ELP/肽活 性治疗剂构建物中的ELP和肽活性治疗剂之间的部分。例如，间隔 序列可以是在一个末端与ELP共价4建合、在另一个末端与肽活性治疗剂共Y介键合的二价基团。因此，ELP/肽活性治疗剂构建物能纳入任何另外的不会妨碍ELP/肽活性治疗剂构建物用于其预定用途的功效 的化学结构。间隔序列例如可以是提供来控制ELP/肽活性治疗剂构 建物的药代动力学的蛋白酶壽丈感性间隔序列部分，或者它可以是蛋白 酶不敏感性ELP/肽活性治疗剂构建物。本专利技术的融合蛋白(F本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种融合蛋白（ＦＰ）治疗组合物，所述ＦＰ治疗组合物包含与至少一个肽活性治疗剂偶联的至少一个弹性蛋白样肽（ＥＬＰ）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A基尔科蒂，
申请(专利权)人：费斯生物制药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]