本发明专利技术涉及用于鉴别金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ?ａｕｒｅｕｓ）的反应培养基，其包含是β－核糖苷酶底物的代谢指示物与至少一种其它代谢指示物和／或至少一种代谢调节物的组合。本发明专利技术还涉及检测和／或鉴定金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于其包括下述步骤：ａ）提供一种反应培养基，其包含是β－核糖苷酶底物的代谢指示物与至少一种其它代谢指示物和／或至少一种代谢调节物的组合，ｂ）用待测生物学样品接种该培养基，ｃ）允许温育，以及ｄ）鉴别金黄色葡萄球菌的存在。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测和/或鉴定金黄色葡萄球菌的反应培养基本专利技术涉及特异于金黄色葡萄球菌的反应培养基。其还涉及使用这种培养基检测 和/或鉴定金黄色葡萄球菌的方法。葡萄球菌属的大多数物种是人类机会致病菌，其在由于外伤或由于直接植入医学 产品所导致的皮肤损伤类事件中呈现很高风险。在葡萄球菌中，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)毫无疑问是致病性最 强的物种，因为其产生大量胞外酶和毒素。其可以是导致许多各种各样的病理状况的原因， 从简单的甲沟炎到最严重的感染诸如败血病、心内膜炎、肺病或者骨关节感染，对此的预后 不是非常乐观的。其可常见于必须接受涉及诸如注射器或导管等设备的住院治疗的患者。 因此对于这个日益增加的牵涉到院内疾病的病原菌之存在的检测具有很大价值。在细菌学中，常规是将特征在于产生凝固酶的金黄色葡萄球菌物种与称为“凝固酶阴性”的其它物种对比。区分金黄色葡萄球菌和非葡萄球金黄色菌的常规方法是基于对 游离凝固酶和脱氧核糖核酸酶的搜寻，以及基于乳胶上凝集反应的获取，其目的在于证实 纤维蛋白原亲和因子、A蛋白和荚膜抗原的存在。然而，其它的潜在病原性葡萄球菌物种能 表达凝固酶。也有技术可在选择性培养基上培养从而可以评估金黄色葡萄球菌的存在，如高盐 Chapman培养基(含有7. 5% NaCl)，其通常对金黄色葡萄球菌和水解甘露醇的葡萄球菌是 选择性的，以及Baird Parker培养基(含有亚碲酸钾和氯化锂作为选择剂)，其用于分离及 计数食品中的凝固酶阳性葡萄球菌并使得证实卵磷脂酶活性成为可能。然而，这些技术缺 乏灵敏性(检测到少量存在于待测生物学样品中的所搜寻物种的能力)以及特别是缺乏特 异性(在含有其它物种的待测生物学样品中检测所搜寻物种的能力)并且仅可给出推定性 诊断，需要其它确认测试。但是，鉴定金黄色葡萄球菌所必需的额外操作增加了分析时间及 成本。它们需要众多的试剂及有资格的人员的参与。也可以使用含有酶底物特别是磷酸酶及/或β-葡糖苷酶或者α-葡糖苷酶的底 物的培养基。例如可以提及的是显色培养基CHROMagar (商标)Staph. Aureus，其使得分离 葡萄球菌及通过显色底物鉴定金黄色葡萄球菌成为可能，所述底物使金黄色葡萄球菌显示 淡紫色着色(Gaillot O.et al.，2000. J. Clin. Microbiol. 38，4，1587-1591)。同一属的其 它物种继而在理论上可由蓝色或无色着色所检测。该鉴定本质上是基于磷酸酶、葡糖 苷酶、葡糖醛酸糖苷酶及半乳糖苷酶活性，也基于抑制剂去铁胺的存在，去铁胺使 得区分金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)成为可能。然而， 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的区分并不完全，因为这两个物种在CHROMagar (商标)培 养基上产生相同颜色的菌落。这是由于磷酸酶底物缺乏特异性所致，该底物对于金黄色葡 萄球菌和表皮葡萄球菌均是阳性的，以及由于去铁胺对于表皮葡萄球菌仅仅是部分抑制这 一事实。也可以如专利申请WO 02/079486所述使用α -葡糖苷酶底物。如此，则仅利 用对α-葡糖苷酶活性的检测即可将金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌 (Staphylococcus saprophyticus)分开，它们是三种临床分离的主要葡萄球菌物种。然而，虽然具有含吲哚酚核的生色团的α-葡糖苷酶底物非常适合用于固体培养基中，它们在液 体培养基中的应用却是会产生问题的，因为该着色在液体培养基中并不扩散。令人惊奇地是，本专利技术人已证实使用一或多种核糖苷酶(ribosidase)底物可使 快速、简易地鉴定金黄色葡萄球菌成为可能。特别是，一或多种核糖苷酶底物与代谢调节物 和/或另一种代谢指示物的组合使用可使区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌物种成为 可能。在介绍本专利技术前，先给出下述定义以使本专利技术能够被更清楚的理解。 它们决不具 限制性的。术语^^^意指包含微生物的代谢表达和/或生长所必需的所有元素的培 养基。该反应培养基可以是固体、半固体或液体。术语“固体培养基”意指，例如一种凝胶培 养基。琼脂是微生物学中培养微生物的常规胶凝剂，但也可以使用明胶或琼脂糖。有些配 制品是可商购的，如例如Columbia琼脂、Trypticase-soy琼脂、MacConkey琼脂、Sabouraud 琼脂，或者更普遍地，在Handbook of Microbiological Media (CRC Press)中所描述的那 些。所述反应培养基可以包含一种或多种元素组合，如氨基酸、蛋白胨、碳水化合物、 核苷酸、矿物质、维生素等。该培养基也可包含着色剂。作为指示，可以提及的用作着色剂 的有Evans蓝、中性红、绵羊血、马血、遮光剂(opacifiant)如氧化钛、硝基苯胺、孔雀绿、亮 绿、一种或多种代谢指示物、一种或多种代谢调节物等。所述反应培养基可以是揭示性培养基(milieu de r6V6lation)，或者培养性及揭 示性培养基。在第一种情况中，微生物在接种前已被培养，在第二种情况中，检测和/或鉴 定培养基也构成培养性培养基。本领域技术人员也可以使用双平板(bi-boite)，使得可以便利地比较两种包含各 种底物或各种选择性混合物的培养基，其上沉积了相同的生物学样品。术语“代谢调节物”意指调节微生物生长的任何化合物。这种代谢调节物可以特别 是糖苷酶(osidase)调节物，选择性化合物，特别如氯化锂、亚碲酸钾或者氯化钠，或者选 择性化合物的混合物，抗生素，一或多种抗生素和/或一或多种抗真菌剂的混合物，任选包 含一种或多种内酰胺，一种或多种氨基葡糖苷，一种或多种糖肽，一种或多种喹诺酮， 一种或多种多肽，两性霉素，一种或多种吡咯化合物，其使得可以促进金黄色葡萄球菌的检 测，促进金黄色葡萄球菌细菌生长的抑制剂，特别如氯化锂(LiCl)，叠氮化钠(NaN3)，粘菌 素，两性霉素，氨曲南(AztrSonam)，粘杆菌素(Colimicine)，氯化钠(NaCl)，去铁胺，以及 弧菌抑制化合物0/129。优选地，依据本专利技术的培养基包含用于促进金黄色葡萄球菌生长和/或抑制其它 微生物物种生长的选择性混合物。这种混合物优选包含氯化锂、弧菌抑制化合物0/129、氨 曲南和两性霉素。术语“代谢糖苷酶调节物”特别是意指在反应培养基中可以诱导或抑制一种或多 种糖苷酶活性表达的化合物。优选地，代谢调节物的浓度在0. 5mg/l和75g/l之间。术语“代谢指示物”意指能证实微生物的存在的任意化合物。这种代谢指示物可以 特别是底物，如核糖苷酶底物，或者除了 核糖苷酶底物之外的底物，如特别是糖苷酶底物，酯酶底物或者肽酶底物，更特别地是β -葡糖苷酶和/或β -半乳糖苷酶和/或β -葡 糖醛酸糖苷酶和/或磷酸酶底物，由此促进金黄色葡萄球菌的检测。该培养基也可以包含 一种或多种不同于β-核糖苷酶底物的代谢指示物，如底物的组合。本领域技术人员会根 据所希望鉴定的微生物而调整底物浓度。优选地，底物浓度在5-1000mg/l之间，优选在 50-400mg/l 之间。术语底 意指可以被如β -核糖苷酶的酶水解以便产生能使直接或间接检测微 生物成为可能的本文档来自技高网...
【技术保护点】
鉴别金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）的反应培养基，其包含是β－核糖苷酶（ｂｅｔａｒｉｂｏｓｉｄａｓｅ）底物的代谢指示物与至少一种其它代谢指示物和／或至少一种代谢调节物的组合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】FR 2007-11-26 0759309鉴别金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的反应培养基，其包含是β-核糖苷酶(beta ribosidase)底物的代谢指示物与至少一种其它代谢指示物和/或至少一种代谢调节物的组合。2.权利要求1的反应培养基，其中所述代谢调节物选自糖苷酶(osidase)调节物、选择 性化合物或者选择性化合物的混合物、抗生素或者一或多种抗生素和/或一或多种抗真菌 剂的混合物。3.权利要求1或2的反应培养基，其中所述其它代谢指示物是酶底物，优选糖苷酶、酯 酶、肽酶、0 -葡糖苷酶和/或0 _半乳糖苷酶底物。4.权利要求3的反应培养基，其中所述酶底物选自0-葡糖苷酶和/或0 -半乳糖苷 酶底物。5.权利要求1-4任一项的反应培养基，其中所述核糖苷酶底物是呋喃核糖苷 _ (beta ribofuranosidase)帛―。6.权利要求1-5任一项的反应培养基，其中所述核糖苷酶底物是选自如下 的底物2_羟苯基-0-D-呋喃核糖苷(儿茶酚-3-D-核糖苷)；品红-3-D-核糖苷 (5-溴-6-氯-3-吲哚氧基-0 -D-核糖苷)；二羟基黄酮-0 -D-核糖苷；X-0 -D-核糖 苷(5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-3-D-核糖苷)；粉红-3-D-核糖苷(6-氯-3-吲哚氧 基-D-核糖苷)；6-溴-3-吲哚氧基-D-核糖苷；5-溴-3-吲哚氧基-D-核糖 苷；6-氟-3-吲哚氧基-3 -D-核糖苷；菌素-3 -D-核糖苷；⑵-硝基苯基-3 -D-核糖苷； 4-甲基伞形酮基_ 0 -D-核糖苷；萘酚-0 -D-核糖苷；二氯氨基苯基-0 -D-核...
【专利技术属性】
技术研发人员：D哈利米，S欧伦加，J佩里，
申请(专利权)人：生物梅里埃公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。