舌癌的判定方法技术

本发明专利技术提供可以客观且正确地判定舌癌的恶性度的舌癌的判定方法、舌癌组织标本的分析方法以及舌癌组织标本的分析用试剂盒。所提供的舌癌的判定方法的特征在于，测定舌癌组织标本中的整联蛋白家族基因和对照基因的ｍＲＮＡ量，根据整联蛋白家族基因的ｍＲＮＡ量／对照基因的ｍＲＮＡ量的比值来判定舌癌的恶性度；所提供的舌癌组织标本的分析方法的特征在于，包括测定舌癌组织标本中的整联蛋白家族基因和对照基因的ｍＲＮＡ量的步骤，以及将整联蛋白家族基因的ｍＲＮＡ量／对照基因的ｍＲＮＡ量的比值与临床数据进行关联的步骤；还提供舌癌组织标本的分析用试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及判定舌癌的恶性度的。
技术介绍
舌癌在口腔癌中发病率最高，出现淋巴结转移的频率也高，还有报道称，舌癌的5年生存率在转移阴性病例中为50%左右，在包括迟发转移的阳 性病例中为11%左右(非专利文献1)。此外，在临床病程中存在比以其它部 位为原发部位的口腔鳞状上皮癌更早地发生转移的倾向。因此，不论肿瘤 的大小，正确地判定舌癌的恶性度，决定基于该判定的治疗方针不仅从癌 的控制的角度，从受到治疗后的摄食吞咽和发音障碍的影响的QOL的角度来 看也是重要的。目前，作为舌癌的预后的推定因子，采用病理组织学上的分化度(非专 利文献2)、浸润性(非专利文献2)、淋巴结转移(非专利文献2和3)、原发性 病灶的大小(非专利文献2)、血清中的肿瘤标记(非专利文献4)等。非专利文献l:Jan Nyman等舌癌的局部控制和生存的预后因子(Progn otic factors for local control and survival of cancer of the ora 1 tongue).ActOncologia;1993:677-73非专利文献2:Kurokawa H等舌鳞状细胞癌的深度浸润前沿的组织学 分级的高予页后值(The high prognostic value of the histologic grade at the deep invasive front of tongue squamous cell carcinoma). J Oral Pathol Med 2005:34:329-33非专利文献3:0kamoto M等1/1I期舌鳞状细胞癌患者的迟发性颈部转 移的予页测(Prediction of delayed neck metastasis in patients with stage I/II squamous cell carcinoma of the tongue). J Oral Pathol Med 2002:15:227-2335非专利文献4:Xin Huang等舌癌中的舌鳞状细胞癌抗原1的血清蛋白 质组学石开究(Serum proteoraics study of the squamous cell carcinoma antigenl in tongue cancer). J. oraloncology. 2006 Jan;42(1):25-30专利技术的揭示然而，病理组织学的检査方法虽然可以通过癌组织的形态分析来了解 口腔癌的存在，但缺乏关于其生物学性质的客观信息和可靠性，在实际的 治疗法的决定上，并不是足以作为生物学性质(恶性度)涉及许多方面的口 腔癌的独立信息源的检查方法。另外，采用肿瘤标记的检查方法虽然是客观的定量数据，但停留于检 查时掌握病理状态，假阳性或假阴性的频率高，作为用于决定治疗法的信 息的可靠性不足。于是，近年来期待可在分子水平上对肿瘤的特性进行特征化的生物标 记的实用化，但具体的判定系统的构建尚未完成。目前，作为候选的口腔癌的分子生物学的生物标记，可以例举基质金 属蛋白酶(matrix metal loproteinase)家族、钙粘着蛋白(cadherin)家族、 整联蛋白(integrin)家族等。如上所述，舌癌的预后和转归在流行病学上 与淋巴结转移的数量有密切关系，在预测肿瘤的恶性度方面是单纯且现实 的指标。因此，通过使用前述的参与组织改造、细胞粘着、细胞运动或血管新 生等的适当的分子作为生物标记，可以实现未发生转移的更早期的阶段的 舌癌恶性度的精确判定。而且，若在早期精确掌握癌的生物学性质，则可 以实现与之相应的最适的治疗，带来非常大的好处。但是，目前还没有采用基因表达水平的舌癌的恶性度判定的实用例。于是，本专利技术的目的在于提供通过使用整联蛋白家族基因作为生物标 记，测定整联蛋白家族基因的mRNA量，从而可以更客观且正确地判定舌癌 的恶性度的。本专利技术人事先进行的口腔鳞状上皮癌的微阵列基因表达分析的结果 中，整联蛋白a 3和整联蛋白0 4显示出在转移阳性肿瘤中表达显著较高的倾向。整联蛋白(ITG)具有由a链和0链构成的跨膜型的异源二聚体的结构， 是连结细胞质和细胞外基质的受体。细胞膜表面的ITG作为纤连蛋白、胶原 或层粘连蛋白等细胞外基质蛋白的受体或者参与血小板或白细胞的连接的 受体而形成超家族。目前，ITG在人类中克隆了18种a链、8种0链，作为 a链和P链组合而成的受体确认了24种。各种受体的细胞外结构域(domain: 与特定的细胞外基质形成特异性的结合。a链、3链都有90%为细胞外结 构域，在剩下的较短的细胞内结构域上介以踝蛋白、桩蛋白、a-辅肌动蛋 白等细胞内锚定蛋白结合有细胞骨架的肌动蛋白纤维。己知ITG在起到连结 细胞外配体和细胞骨架的连接分子的作用的同时，对于来自细胞外基质的 信号传递，通过引发酪氨酸磷酸化、细胞内钙浓度的变化、肌醇磷脂的合 成、细胞周期蛋白的合成、早期基因的表达来参与细胞运动和细胞的增殖、 分化、凋亡。除此之外，还报道了通过阻断ITG和配体间的反应而实现的细 胞分化和凋亡的抑制。肿瘤组织中，已知ITG分子的分布为适应高浸润，转 移能力而失去规律性。如果综合考虑这些方面，可以预想ITG介导的连接和 信号传递的无序化以各种各样的形式参与到肿瘤细胞的产生、增殖、凋亡、 运动性、浸润性等病理状态中。于是，本专利技术人基于事先的微阵列基因表达分析的结果，作为舌鳞状 上皮癌的转移性和生存预后的生物标记候选分子，着眼于整联蛋白家族基 因。对于至此为止被报道参与肿瘤细胞的连接、运动、分化的控制机制的 ITGa-1、 -2、 -3、 -5、 -6、 -v和ITGP-1、 -3、 -4、 -5、 -6，进行了采用 实时PCR法的基因表达定量分析。另外，肿瘤组织具有包括肿瘤细胞和位于周围的癌间质(cancer stro ma)中的成纤维细胞、炎症类细胞等多种细胞的细胞构成。所以，预想癌组 织的细胞构成对所定量的基因的mRNA量的影响较大。因此，在生物标记的 分析中重要的是利用适当的基因的m脂A量将ITG基因表达水平的标准化。作 为候选的用于标准化的分子，不仅可以是所谓的持家基因，也同样可以对 如下的基因进行定量编码上皮细胞骨架的KRT5，编码锚定蛋白的JUP、 PL EC1、 PXN，编码针对ITG的配体(Ligand)分子的LAMA3、 LAMA4、 LAMA5、 Col1A1、 VTN。另外，尝试了通过以功能性的或组织内局部存在的间接相关的基因的mRNA量将ITG基因的mRNA量标准化，从而避免因上述的临床样本的偏 差而导致的问题。如上所述，鉴于上述课题而认真研究后发现，测定整联蛋白家族基因 和对照基因的mRNA量，通过两者的比值将整联蛋白家族基因的mRNA量标准 化，根据所得的数值可以客观且正确地判定舌癌的恶性度，从而想到了本 专利技术。本专利技术提供，其特征在于，测定舌癌组织标本中的整 联蛋白家族基因和对照基因的mRNA量，根据整联蛋白家族基因的mRNA量/对 照基因的m脂A量的比值来判定舌癌的恶性度。本专利技术的中的所述整联蛋白家族基因可以是整联蛋白 a 3、整联蛋白P4、整联蛋白P5中的至少一种。本专利技术的中的所述整本文档来自技高网...

【技术保护点】
舌癌的判定方法，其特征在于，测定舌癌组织标本中的整联蛋白家族基因和对照基因的ｍＲＮＡ量，根据整联蛋白家族基因的ｍＲＮＡ量／对照基因的ｍＲＮＡ量的比值来判定舌癌的恶性度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2006-10-12 278203/20061. 舌癌的判定方法，其特征在于，测定舌癌组织标本中的整联蛋白家族基因和对照基因的mRNA量，根据整联蛋白家族基因的mRNA量/对照基因的mRNA量的比值来判定舌癌的恶性度。2. 如权利要求l所述的舌癌的判定方法，其特征在于，所述整联蛋白 家族基因是整联蛋白a3、整联蛋白P4、整联蛋白P5中的至少一种。3. 如权利要求1或2所述的舌癌的判定方法，其特征在于，通过实时PCR 法进行所述整联蛋白家族基因的mRNA量的测定。4. 如权利要求1或2所述的舌癌的判定方法，其特征在于，通过RNA印 迹法或固相杂交法进行所述整联蛋白家族基因和对照基因的mRNA量的测 定。5. 如权利要求1 4中的任一项所述的舌癌的判定方法，其特征在于， 所述对照基因是持家基因、细胞骨架分子基因、锚定蛋白基因、细胞外基 质基因中的至少一种。6. 如权利要求5所述的舌癌的判定方法，其特征在于，所述对照基因 是ACTB。7. 如权利要求5所述的舌癌的判定方法，其特征在于，所述对照基因 是KRT5。8. 如权利要求5所述的舌癌的判定方法，其特征在于，所述对照基因 是JUP和/或PXN。9. 如权利要求1 8的任一项所述的舌癌的判定方法，其特征在于，所 述舌癌是舌鳞状上皮癌。10. 舌癌组织标本的分析方法，其特征在于，包括测定舌癌组织标本 中的整联蛋白家族基因和对照基因的mRNA量的步骤，以及将整联蛋白家族 基因的mRNA量/对照基因的m認A量的比值与临床数据进行关联的步骤。11. 如权利要求10所述的舌癌组织标本的分析方法，其特征在于，所 述临床数据是选自TOM分期、Y-K分类、对化学疗法的反应、对放射线疗法 的反应、预后的1种或2种以上的数据。12. 如权利要求10或11所述的舌癌组织标本的分析方法，其特征在于，所述整联蛋白家族基因和对照基因的mRNA量的测定通过实时PCR法进行。13. 如权利要求10或11所述的舌癌组织标本的分析方法，其特征在于， 所述整联蛋白家族基因和对照基因的mRNA量的测定通过RNA印迹法或固相 杂交法进行。14. 如权利要求9 13中的任一项所述的舌癌组织标本的分析方法，其 特征在于，所述整联蛋白家族基因是整联蛋白a 3、整联蛋白P4、整联蛋 白P5中的至少一种。15. 如权利要求9 14中的任一项所述的舌癌组织标本的分析方法，其 特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：永田昌毅，黑川亮，
申请(专利权)人：国立大学法人新泻大学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]