流感病毒的中和抗体制造技术

本发明专利技术涉及鉴定、生产和设计针对甲型流感病毒的中和抗体的方法和手段，还涉及产生的中和抗体。特别是，本发明专利技术涉及针对各种甲型流感病毒亚型的中和抗体，例如包括针对Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ５、Ｈ７和Ｈ９中两种或多种（例如所有Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３和Ｈ５亚型）的中和抗体，还涉及用于制备所述抗体的方法和手段。更具体地，本发明专利技术涉及能够中和甲型流感病毒亚型的多于一种，优选所有的分离物的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及鉴定、生产和设计(engineer)针对甲型流感病毒(influenza A vimses)的中和抗体的方法和手段，还涉及产生的中和抗体。特别是，本发 明涉及针对各种甲型流感病毒亚型的中和抗体，包括针对H1、 H2、 H3、 H5、 H7和H9中两种或更多种(例如所有Hl 、 H2、 H3和H5亚型)的中和抗 体，还涉及用于制备所述抗体的方法和手段(means)。更具体地，本专利技术涉 及能够中和多于一种，优选所有的曱型流感病毒亚型的分离物的抗体。
技术介绍
流行性感冒(flu)是一种由流感病毒引起的传染性呼吸系统疾病。其引起 轻度至重度疾病，且有时可导致死亡。在美国，每年有5-20%人口感染流行 性感冒，住院约200,000例，SI起约36,000例死亡。流感病毒在由咳。軟和喷咬产生的呼吸飞沫(respiratory droplet)中传播， 其通常在人与人之间传播。对流感表面抗原(特别是血凝素)的免疫力使感染 的可能性和(如果感染发生)疾病的严重性减少。虽然流感疫苗是可用的，但 因为针对一种类型流感病毒或亚型的抗体对另一种类型或亚型的流感赋予 有限的保护或没有保护，所以有必要在每年的流感疫苗中并入一种或多种 新菌株。流感病毒是分段的负链RNA病毒(segmented negative-strand RNA viruses),属于正粘病毒一牛(0^2om少xovzWcbe family)。曱型流感病毒由9种结 构蛋白组成，且另外编码一种具有调节功能的非结构NS1蛋白。非结构NS1 蛋白在生殖周期中大量合成，定位在受感染细胞的胞质溶胶(cytosol)和核 中。病毒基因组的分段性质允许在细胞与不同病毒抹混合感染期间发生遗 传重排列(genetic reassortment)(基因组节段的交换)的机制。根据其表面上显 示的不同血凝素(hemagglutinin) (HA)和神经氨酸酶(neuraminidase) (NA)病 毒蛋白质，将曱型流感病毒进一步划分成不同亚型。通过两种病毒表面糖蛋白，血凝素(HA或H)和神经氨酸酶(NA或N),来鉴定甲型流感病毒亚型。每种流感病毒亚型通过其H和N蛋白质的组合来鉴定。存在16种已知的HA亚型和9种已知的NA亚型。曱型流感病毒 可感染人类、禽类、猪、马和其它动物，但野生鸟类是这些病毒的天然宿 主。当前在人类中传播的仅是某些曱型流感亚型(即，H1N1、H1N2和H3N2)， 但在禽类中(特别是野生水禽(wild waterfowl)和岸禽(shorebird)中)已经鉴定 出16 H和9 NA亚型的所有组合。此外，有越来越多的证据表明H5和H7 流感病毒也可引起人类疾病。甲型流感病毒的HA包括两个结构上不同的区域，即球状头区(globular head region)和千区(stem region)。 J求状头区包含受体结合部位，其负责病毒 附着到靶细胞，并参与HA的血凝活性。干区包含融合肽，其对于病毒包膜 和细胞的内体膜之间的膜融合是必要的，因而与融合活性有关(Wiley等，爿朋. T ev.肠c/z置，56:365-394 (1987》。大流行(pandemic)是指全球性疾病暴发。当新的甲型流感病毒有以下情 况时，发生流感大流行(l)在人群中出现对其有很少或没有免疫性，(2)开 始引起严重的疾病，然后(3)很容易在世界各地人对人传播。在20世纪中， 已有3次这样的流感大流行。第一次在1918年，"西班牙流感，，流感大流4亍， 造成在美国至少500,000人死亡，全世界高达4000万人死亡。这次大流行 是由甲型流感H1N1亚型引起的。第二次在1957年，"亚洲流感"流感大流 行，由曱型流感H2N2亚型引起，造成在美国至少70,000人死亡，全世界 100-200万人死亡。最近地在1968年，"香港流感，，流感大流行，由曱型流感 H3N2亚型引起，导致美国大约34,000人死亡，全世界700,000人死亡。1997年，香港报道了首例甲型流感H5N1病例。这是第一次这种禽类 病毒直接感染人类，但没有产生大流行，因为没有观察到人对人的传播。Lu等，i ew. A饥7:43 (2006) (doi: 10.1186/1465-992-7_43)报道，从用灭 活的H5N1病毒接种的马制备抗-H5Nl IgGs和H5Nl-特异性F(ab，)2片段， 其被描述用于保护以H5N1病毒感染的BALB/c小鼠。Hanson等，W邵.L 7:126 (doi: 10.1186/1465-9921-7-126)描述了特异 于曱型流感H5病毒血凝素的嵌合单克隆抗体用于被动免疫小鼠的用途。考虑到某些曱型流感病毒引起的呼吸系疾病的严重性，及潜在的大流 行威胁，迫切需要有效的预防和治疗方法。本专利技术通过提供针对病毒各种H 亚型的曱型流感中和抗体来满足这一需要，所述亚型包括但不限于甲型流9感病毒的HI和H3亚型，以及H5亚型。本专利技术进一步提供能够中和给定 的曱型流感病毒亚型的多于一种(优选全部)分离物(菌抹)的抗体，所迷分离 物包括但不限于获自各种人类和非人类物种的分离物和来自各种流感流行 和/或大流行的受害者和/或存活者的分离物。可将所述中和抗体用于预防和/或治疗流感病毒感染，包括在流行或大 流行的情况下受感染或有感染危险的人群的被动免疫。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术涉及中和抗体，其中和甲型流感病毒亚型的多于 一种分离物或者曱型流感病毒的多于一种亚型。在一个实施方案中，所述抗体中和甲型流感病毒亚型的基本上所有分离物，如H5、 H7和H9亚型的一种或多种。在另一个实施方案中，所述抗体中和特定的甲型流感病毒亚型的多于 一种分离物，如H5、 H7和H9亚型的一种或多种分离物。在又一个实施方案中，所述抗体中和曱型流感病毒的多于一种亚型和 至少一种亚型的多于一种分离物。在进一步的实施方案中，由本文的抗体所中和的至少一种亚型和/或分 离物具有感染人类的能力。在另一个实施方案中，至少一种分离物来自于禽类，包括例如野禽 (wild-fowls)和家禽(chicken)。在具体的实施方案中，本文的抗体中和甲型流感病毒的H5N1亚型。优选地，所述抗体中和该曱型流感病毒亚型的多于一种分离物，或者甚至 更优选地，基本上所有分离物。在另一个实施方案中，本文的抗体中和H5N1亚型和至少一种额外的 选自下组的亚型H1N1、 H1N2和H3N2亚型。在另外的实施方案中，本文的抗体中和额外的亚型的多于一种分离物， 优选基本上所有分离物。在另一个实施方案中，本专利技术的中和抗体结合H5蛋白。优选地，所述 抗体结合H5蛋白的多于一种变体，或者甚至更优选地，H5蛋白的基本上 所有变体。在另外的实施方案中，本文的抗体与H5蛋白及至少一种额外的H蛋白，如H1、 H2和/或H3蛋白结合。在不同的方面，本专利技术涉及含有本文所述的中和抗体的组合物。 在进一步的方面，本专利技术涉及鉴定抗体的方法，所述抗体能够中和单 个曱型流感病毒亚型的多于一种分离物或多个曱型流感病毒亚型。该方法 包括在抗体文库中鉴定抗体(所述抗体与曱型流感病毒亚型的第 一和第二分 离物反应，或者与曱型流感病毒的第一和第二亚型反应)，以及使鉴定的抗体-进ff连续交替本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中和抗体，其中和甲型流感病毒亚型的多于一种分离物和／或甲型流感病毒的多于一种亚型。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉梅什R巴特，劳伦斯霍罗威茨，阿伦K卡什亚普，
申请(专利权)人：航道生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]