胚胎移植受体牛同期发情的方法技术

本发明专利技术涉及“胚胎移植受体牛同期发情的方法，”属于胚胎工程领域。胚胎移植受体牛同期发情的方法，其特征在于：受体牛发情周期中牛只发情周期中任意一天放入Ｃｕｅ－Ｍａｔｅ（阴道栓），并注射１００μｇＧｎＲＨ，设为第１天，在第５～７天撤栓并注射５００μｇＰＧ，２天后牛只发情；发情后７－７．５天进行移植。经过本方法处理后，缩短了牛只的处理时间，提高了牛只的应用效率，节约了饲养成本，处理后牛只发情率也由原来７５％～８０％提高到８５％～９０％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胚胎工程领域，特别是涉及利用同期发情进行胚胎移植技术。技术背景胚胎移植是将一头良种奶牛配种后的早期胚胎取出，移植到另一头同种的生理状态相同 的奶牛体内，使之继续发育成为一个个体的技术。由于牛经济价值高，属单胎动物，产仔数 量少，繁殖周期长，用胚胎移植技术进行纯种扩群繁殖和黄牛改良效果好，速度快。应用某 些激素或药物以及畜牧管理措施人工控制雌性动物群体在同一时间内发情并排卵的技术，称 为同期发情(estrus synchronization)。同期发情的基本原理，是通过调节发情周期，控制动物 群体的发情排卵在同一时间发生。使黄体期延长或缩短的方法，可以控制卵泡的发生或黄体 的形成，均可使动物达到同期发情并安排排卵。常用的同期发情激素是GnRH、孕激素、PG 等。GnRH在雌性动物上可以诱导发情、排卵，提高配种受胎率，还可用于治疗牛卵巢静止 和卵泡囊肿等症；孕激素的主要功能是通过刺激子宫内膜腺体分泌和抑制子宫肌肉收縮而促 进胚胎着床并维持妊娠；PG对牛卵巢上的黄体均具有溶解作用。胚胎移植技术结合超数排卵 技术，对于挖掘优秀母畜的繁殖潜力意义重大，可以快速扩繁高产奶牛(母牛)，增加高产奶 牛数量。目前胚胎移植的方法主要是牛只发情周期中任意一天放入Cue-Mate(阴道栓)，9~11 天后撤栓并注射PG，撤栓2d后发情，发情7d后移植。这样从牛只前期处理到最后移植大约 需要18-20天，处理时间较长，造成了受体牛使用次数减少，增加了饲养成本。
技术实现思路
针对上述缺点，本专利技术对胚胎移植受体牛同期发情方法进行改进，縮短了牛只处理时间， 提高了牛只的应用效率，节约了饲养成本。，其特征在于受体牛发情周期中牛只发情周期中任意一天放入Cue-Mate (阴道栓)，并注射100昭GnRH，设为第1天，在第5~7天撤栓并注射 500吗PG, 2天后牛只发情；发情后7-7.5天进行移植。 所述撤栓时间为第5天，移植时间为发情后第7天。该方法在发情周期中任意一天放入Cue-Mate，所述方法中放入Cue-Mate同时注射GnRH， 促进牛只卵巢上卵泡的发育；在第5-7天撤栓，较常规方法提前4 5天；所述方法中撤栓同 时注射PG，促进母牛卵泡成熟并排卵，2天后受体牛发情，发情后7-7.5天进行移植。经过本方法处理后，縮短了牛只的处理时间，提高了牛只的应用效率，节约了饲养成本，处理后牛只发情率也由原来75%~80%提高到85%~90%。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术作进一步的详细说明。 实施例1 1试剂1.1 PG (氯前列烯醇)1.2 GnRH促性腺激素释放激素1.3 Cue-Mate 阴道栓 1.4盐酸利多卡因2器材2.1 法国卡苏移植枪配套2.2 日本富士平移植枪配套2.3 剪毛剪(18cm)2.4 细管剪2.5 直剪(18cm)3胚胎移植受体牛准备3.1生殖生理健康，无生殖系统疾病，无传染病。3.2发情周期正常，能正常发情排卵形成黄体。3.3无难产史，无流史。无久配不孕记录。3.4体型中等以上，体重达350kg，膘情中上等。被毛光亮。3.5直检生殖系统结构正常，功能正常，子宫有弹性无硬快。卵巢质地有弹性，有正常发育卵泡或周期性黄体，体积1XlXl 4X4X4cm。3.6外观阴门清洁无污物排出或排出的粘液清亮透明，无异味。4发情处理3.1处理方法选择适合做受体牛的牛只，在牛只发情周期中任意一天放入Cue-Mate (阴道栓)，并注射100ng GnRH，设为ld。第5d撤栓并注射500(agPG， 2天后牛只发情。发情后7d进行移植。3.2观察发情标准3.2.1在注射PG后第2d开始观察发情。3.2.2发情牛阴门红肿，流清亮透明粘液，接受其他牛爬跨站立不动。4移植用胚胎的选择 4.1胚胎质量等级划分4.1.1 A级质量最好的胚。胚胎细胞对称，外观呈球形，卵裂均匀，色泽良好，胚胎发育 阶段与胚龄一致。85%以上的卵裂球完整。4.1.2 B级质量较好的胚胎。透明带内有适量的不规则细胞，大多数卵裂球完整均匀色泽 良好，至少有50%的卵裂球完整。4丄3 C级质量差的胚胎。大量不规则细胞只有少数细胞完整，至少25%的卵裂球完整。 4丄4 D级死的或退化的和未受精的胚胎，不能发育。 4.2质量选择4.2.1 —般选择A级胚胎用于冷冻或鲜胚移植。4.2.2 B级胚胎一般直接用于鲜胚移植。4.2.3 C级和D级的胚胎则不适用于移植和冷冻。 5胚胎移植5.1移植时间以发情当天为0d，于第7 7.5d移植 5.2移植前准备5.2.1确定移植受体直肠检查发情牛排卵情况，黄体发育是否符合移植标准，确定移植部位，确定胚胎发育阶段。5.2丄1移植受体黄体选择标准5.2丄1.1受体牛发情能在12~36h内正常排卵。5.2丄1.2排卵后第6 7d检査黄体。5.2丄1.3黄体突出卵巢表面形状为规则的蘑菇型、火山口型、锥型或柱型，体积0.8X0.8X 0.8 3X3X3cm，则可以选作受体。5.2丄1.4黄体突出表面部分较少，但镶嵌在卵巢内部的部分超过卵巢体积的三分之一的也可 选为移植受体。5.2.2 受体保定准备。5.2.3 受体牛麻醉5.2.3.1位置荐尾间隙硬膜外。5.2.3.2剂量盐酸利多卡因40mg/2mlX2支。5.2.3.3荐尾间隙处剪毛一~^75%酒精棉脱脂一~^5%碘酊棉消毒一"^75%酒精棉脱碘。 5.2.3.4麻醉注射器垂直刺入荐尾间隙处硬膜外，缓慢推入。 5.2.3.5轻触牛会阴部无反应为达到麻醉效果。5.2.4 移植用胚胎准备5.2.4.1冷冻胚胎移植，保温桶内注水，水温控制在35"。5.2.4.2从液氮罐中取出将移植的胚胎，空气浴10s，水浴10-15 s。.5.2.4.3用吸水纸将胚胎细管外水渍擦干，记录细管上的全部信息。5.2.4.4用细管剪在距细管封口端5 6cm剪断，将胚胎细管插入移植枪中，套上枪套，扣紧， 准备移植。5.2.4.5鲜胚移植。胚胎经过鉴定评级确定可用后，先清洗，然后装管，即可移植。注胚胎冷冻的方法不同，解冻的方法也不同。不同的冷冻程序， 一般都有配套的解冻程序。以上胚胎准备方法仅用于参考。5.3移植操作5.3.1手入直肠清除宿便一~^清水清洗阴门外污物一"^1%。高锰酸钾溶液或r;新洁尔灭溶液消毒处理一~^灭菌吸水纸擦干。5.3.2助手将牛阴门掰开，术者将移植枪插入阴门，先向斜上方送入阴道前三分之一，然后 抬平送入阴道底部直达子宫颈口。5.3.3术者直肠内手抬起子宫颈外端，另一手持移植枪。双手协作将移植枪导入子宫颈，直 达移植侧子宫角前三分之一处。5.3.4最后匀速地将胚胎推入子宫，轻缓撤出移植枪。移植操作完成。 5.4注意事项5.4.1受体牛检查时要确定发情准确。5.4.2选择黄体要按黄体选择标准选择判断。5.4.3保定确实。5.4.4麻醉准确有效。5.4.5外因部清洗干净，消毒仔细，彻底。5.4.6移植枪导入时要轻缓，防止损伤子宫颈和子宫内膜。5.4.7推入胚胎时要保持轻缓匀速，不能过快过猛。5.4.8移植枪撤出时要保持匀速轻缓。5.4.9移植过程中要使牛保持安静。移植动作要干净利落。减少应激。 6妊娠检査6.1妊娠检査时间移植后两个月进行。 6.2妊娠检査方法直本文档来自技高网...

【技术保护点】
胚胎移植受体牛同期发情的方法，其特征在于：受体牛发情周期中牛只发情周期中任意一天放入阴道栓，并注射１００μｇＧｎＲＨ，设为第１天，在第５～７天撤栓并注射５００μｇＰＧ，２天后牛只发情；发情后７－７．５天进行移植。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王海，曹克富，张红霞，徐敬趁，刘佳新，张家新，
申请(专利权)人：北京锦绣大地农业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]