24-同一维生素-D-衍生物在制药中的应用制造技术

＊＊＊ （Ⅰ）， 本文描述了式Ⅰ的新２４－同一维生素－Ｄ－衍生物，式中： Ｒ↑［１］为一个氢原子、一个羟基或一个有１至８个碳原子的酰氧基，Ｒ↑［２］和Ｒ↑［３］各自独立地为一个有１至４个碳原子的直链或有支链的烷基，一个三氟甲基或者共同为一个与碳原子２５相连的有３至９个碳原子的饱和碳环， Ｒ↑［４］和Ｒ↑［５］各自独立地为一个氢原子或有１至８个碳原子的酰基，Ａ和Ｂ各为一个氢原子或共同为一个第二键， ｎ为１、２、３、４或５， 以及它的一种制备方法，含有该化合物的药物制剂以及它用于制备药品的应用。 该新化合物具有抑制增殖和分异细胞的作用。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及式I的24-同-维生素-D-衍生物， 式中R1为一个氢原子、一个羟基或有1至8个碳原子的酰氧基，R2和R3各自独立地为一个有1至4个碳原子的直链或有支链的烷基、一个三氟甲基或者共同为一个与碳原子25相连的有3至9个碳原子的饱和碳环，R4和R5各自独立地为一个氢原子或有1至8个碳原子的酰基，A和B各为一个氢原子或者共同为一个第二键，n为1、2、3、4或5，本专利技术还涉及上述衍生物的制备方法、含有这些化合物的药物制剂以及其对于制造药品的应用。可能作为取代基R1、R4和R5的酰氧基及酰基特别是由饱和的羧酸或也由苯酸衍生的。如果R2和R3与碳原子25共同为一个饱和的碳环，则特别优先考虑环丙环、环戊环或环己环。本专利技术优选的通式I的24-同-维生素-D-衍生物是，R1为一个羟基，R2和R3为一个甲基，R4和R5为一个氢原子，和n为1、2或3。在碳原子22和23之间最好有一个双键。特别优选的化合物是(5Z，7E，22E)-(1S，3R，24R)-9，10-闭联-24a-同-5，7，10(19)，22-胆甾四烯-1，3，24-三醇，和(5Z，7E，22E)-(1S，3R，24S)-9，10-闭联-24a-同-5，7，10(19)，22-胆甾四烯-1，3，24-三醇。天然维生素D2和D3及其生物活性代谢物(天然维生素D2和D3本身是非生物活性，在肝的25位或肾的1位上羟基化后才是活性的)在C10和C19的位置之间有一个双键作为区别的结构特征，该双键对维生素D活性起决定性作用(见通式Ⅴ)。维生素D2和D3的作用在于使等离子体Ca++和等离子体磷酸盐反射体稳定化，它们抑制等离子体Ca++反射体的沉积。 麦角钙化醇Ra＝Rb＝H，Rc＝CH3，维生素D2双键C-22/23胆钙化醇Ra＝Rb＝Rc＝H 维生素D325-羟胆钙化醇Ra＝Rc＝H，Rb＝OH1a-羟胆钙化醇Ra＝OH，Rb＝Rc＝H1a，25-二羟基胆钙化醇Ra＝Rb＝OH，Rc＝H 钙三醇除了对钙和磷酸盐物质交换的明显作用外，维生素D2和D3及其合成的衍生物还具有抑制增殖和区分细胞的作用(H、F、Deluca，维生素D在甾类激素生物化学中的代谢作用和功能，Hrsg、H.L.Makin，第二版，Blackwell科学出版社，1984，71-116页)。但在应用维生素D时可能出现过剂量现象(血钙过多)。DE-AS2526981已经公开过在24位羟基化的1a-胆钙化醇;它的毒性低于未羟基化的相应1a-胆钙化醇。羟基化的化合物显示了肠钙吸收的选择性活化作用和比1α-胆钙化醇弱的骨吸收作用。国际专利申请WO87/00834中描述的24-羟基维生素-D-类似物可以用于治疗人和动物由于不正常的细胞增殖和/或细胞分化所引起的障碍。对于各种1，25-二羟基-同-维生素-D-衍生物，Deluca不久前曾提及与骨吸收作用和HL-60细胞区分性质有关的离解。其中，体外的骨吸收作用是体内钙活动化作用的直接量度。现已发现，与维生素-D-衍生物钙三醇(1a，25-二羟基胆钙化醇)相比，本专利技术通式I的24-同-维生素-D-衍生物具有好的惊人的作用图谱。当对于钙和磷酸盐物质交换的影响明显减弱时(通过过剂量或要求高剂量减少副作用)，抑制增殖和区分细胞的作用大体保持不变(离解)。本专利技术化合物的维生素-D-活性借助于钙三醇受体试验确定。用一种由患佝偻病的鸡肠中得到的特定受体蛋白质进行该试验。在一个试管中，用反应体积为0.575ml的3H-钙三醇(0.5ng/ml)将含有受体的粘合蛋白质培育1小时，分有和没有待试物质两种情况。用木炭-葡聚糖吸收分离没有和粘有受体的钙三醇。为此，向每个试管加入200μl木炭-葡聚糖悬浮液，并在22℃培育30分钟。接着，在4℃和1500×g条件下离心分离10分钟。沉淀分离剩余物，平衡1小时后，在一个β计数器中用原子光测量。用不同浓度的待试物质以及参比物(未作标记的钙三醇)得到一些排斥3H-标记的参比物的竞争曲线，将其相互关联，找出一个竞争因子(KF)。它被定义为50%竞争所需的待试物质浓度与参比物浓度的商KF＝ (50%竞争时的待试物浓度)/(50%竞争时的参比物浓度)因此，(5Z，7E，22E)-(1S，3R，24R)-9，10-闭联-24a-同-5，7，10(19)，22-胆甾四烯-1，3，24-三醇(化合物A)的KF值为67，(5Z，7E，22E)-(1S，3R，24S)-9，10-闭联-24a-同-5，7，10(19)，22-胆甾四烯-1，3，24-三醇(化合物B)的KF值为0.8。为了确定本专利技术化合物的抗增殖能力，代之以化合物A和B作为待试物质，进行了下述试验用Yuspa，S和Harris，C.C，的改进方法，“用乙酸视黄酯体外处理老鼠表皮细胞的变更分异”，Exp.CellRes.8695-105，1974制备和培养新生老鼠的角化细胞。通过断头杀死两种性别的新生NMRI老鼠，剥去皮肤，在一种抗菌素-抗霉菌剂溶液中洗净，用这一侧朝下在Dispase II溶液中(1.2U/ml在组织培养介质M19.9中+25mmol/L HEPS+15%胎儿小牛血清(FCS)+50U/ml青霉素/链霉素(P/S)(制备介质，PM))于4℃下培养一夜。取出表皮，通过受胰蛋白酶作用制备单细胞悬浮液。离心分离后，使细胞沉积物重新悬浮，变为锥虫蓝色后确定活的小圆细胞数目，在Primaria 24孔板中和组织培养介质(M199+15%FCS+50U/ml P/S)中以4×105细胞/cm2的密度播种细胞。在37℃培养24小时后，用以磷酸盐缓冲的盐溶液(PBS)洗细胞，再在32.5℃及有和没有待试物质的无血清组织培养介质(M199，50U/ml P/S+0.5%乙醇)中继续培养24小时。然后，加入0.4μCi/50μl3H-甲基胸苷(40Ci/mmol)。4小时后抽出介质，加入500μl冰冷的10%三氯醋酸(TCA)结束反应。用TCA和PBS洗细胞，并通过在一种朊酶K-溶液(10mmol/l三-HCl，10mmol/l EDTA，10mmol/i NaCl，0.2%Triton-X100，PH8.0，50μg/ml朊激酶K)中培养使之溶解，并通过离心分离提纯溶胞产物。在剩余物中用闪烁计光法确定放射性，用联咪苯基吲哚(DAPI)对DNA进行比染色后，用荧光计光法确定DNA浓度。因此，钙三醇及化合物A和B按所用剂量以大约相同的IC50阻止3H-胸苷进入DNA钙三醇 2.7×10-9mol/l化合物A 6.0×10-9mol/l化合物B 9.5×10-9mol/l由于减少了血钙过多的危险，本专利技术的物质适用于以特定方式制造治疗以过度增生为特征的疾病，例如皮肤的过度增生疾病(牛皮癣)和恶性肿瘤(白血病，结肠癌，乳腺癌)。成功治疗的前提条件是证明标的组织中的钙三醇受体。该化合物可以配制成具有药理上可接受溶剂的溶液，或者在适当的药物溶剂或载体中的乳液、悬浮液或分散液，或者配成以已知方式含有固体载体的丸剂、片剂或胶囊。对于局部应用，这些化合物最好配制成乳脂、膏剂或一种适用于局部应用的类似药品形式。这类配制品中的每个还可以含有其它药学上可接受且无毒的助剂，例如稳定剂、抗氧化剂、粘本文档来自技高网...

【技术保护点】
式Ⅰ的２４－同－维生素－Ｄ－衍生物在制备药物中的应用＊＊＊ （Ⅰ），式中：Ｒ↑［１］为一个氢原子、一个羟基Ｒ↑［２］和Ｒ↑［３］各自独立地为一个有１至４个碳原子的直链或支链烷基、或者共同为一个与碳原子２５相连的有３至９个碳原 子的饱和碳环，Ｒ↑［５］和Ｒ↑［６］各自独立地为一个氢原子，Ａ和Ｂ各为一个氢原子或者共同为一个第二键，ｎ为１、２、３、４或５。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：盖尔拉德克舒，根特尼夫，卡迪加舒尔茨，马休斯布劳迪格姆，露斯瑟罗夫埃克德，皮特拉赫，
申请(专利权)人：舍林股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]