生物抗龋免疫制剂制造技术

本发明专利技术的生物抗龋免疫制剂是对变形链球菌分泌释放到胞外的葡糖进行基转移酶分离纯化，由此制备出多价亚单位疫苗，再免疫奶牛获取免疫乳清，并进一步分离提取葡糖转移酶的特异性抗体。该制剂经含化或添加牙膏中等使用形式直接发挥安全有效的生物抗龋效应。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及利用引起龋病的变形链球菌所产生的葡糖基转移酶作为亚单位疫苗，免疫奶牛并从其分泌乳汁中提取特异性抗体，用于龋病的防治。目前现有使用被动免疫进行生物抗龋的技术中，制备抗体所使用的抗原为变形链球菌的菌体。美国阿拉巴马大学所研制的抗龋抗体，系用灭活的变形链球菌的完整菌体细胞为抗原进行免疫制备特异性抗体(Michalek，SM.，et al，Infect.Immun.1987，552341-2347)。虽然该抗体具有良好的抗龋作用，但是由于变形链球菌表面蛋白抗原与人心脏组织有交叉抗原反应，另外还诱导风湿因子的产生等，因此该抗体一直未形成产品和推广应用。本专利技术的目的是提供一种安全有效的生物抗龋免疫制剂。现已公认葡糖基转移酶是口腔变形链球菌致龋的主要毒力因素。它是在细菌代谢过程中所产生的细胞外酶，该酶利用蔗糖合成的葡聚糖是菌斑形成和菌斑细菌产酸的物质基础，病启始的首要因素。通过制备活性高、作用迅速的葡糖基转移酶抗体来消除该酶的作用，在不破坏口腔天然菌群生态情况下，有效地抑制致龋菌在牙齿表面的粘附、聚集和菌斑的形成，从而达到抗龋的目的。本专利技术首先提取纯化不同血清型变形链球菌的葡糖基转移酶。对变形链球菌常规培养基进行改良，添加Tween 800.05～0.1％，提高酵母浸提物浓度至1％，由此显著地提高细胞外葡糖基转移酶的产量。培养物上清经乙醇粗提，然后再经Sephadex G-75纯化。其次将纯化后的多价葡糖基砖移酶(其中C型占80％，其它型占20％)配以铝佐剂制成复合葡糖转移酶亚单位疫苗，对预产前6～8周的奶牛进行免疫，2周一次，直到泌乳结束。在此期间采血样分析，对奶牛的免疫状况进行动态观察。第三，收集的免疫牛奶经过离心获得乳清，再采用一般的超滤和DEAE树脂分离纯化特异性抗体。第四，免疫制剂的形式一方面在免疫乳清中直接添加天然甜味剂甜菊总甙替代糖的成分，制成冰砖类的含化品。另一方面采用0.05～0.1％的纯化抗体，添加入牙膏或含濑液中。本专利技术从上述方面写明生物抗龋免疫制剂的特点、工艺流程及制剂形式。这不仅使抗龋抗体安全可靠，在维持口腔天然菌群生态的同时，有效地防治龋病，而且首次改变了国内常规从免疫动物血清中制备抗体的方法，因此使大规模治疗用抗体的获取有了一个更经济的来源。另外本专利技术的制剂形式在有效地保护抗体生物活性的前提下，使其使用更方便，作用更直接。权利要求1.利用变形链球菌的萄糖基转移酶作为多价亚单位疫苗，免疫奶牛制备免疫乳清，并从中分离提取葡糖基转移酶特异性抗体。其中包括(i)采用多种变形链球菌的葡糖基转移酶作为多价抗原。(ii)获取高产量葡糖转移酶的方法，即培养基中加入0.05～0.1％Tween80和酵母浸提物浓度为1％。(iii)所选用的免疫动物为奶牛，所使用提取抗体的原料为初乳和乳汁。2.按照权利要求1所述免疫乳清直接添加甜菊总甙制成冰砖类含化品。3.按照权利要求1所述的特异性抗龋抗体添加于牙膏、含濑液或口香糖等食品中进行龋病的防治。全文摘要本专利技术的生物抗龋免疫制剂是对变形链球菌分泌释放到胞外的葡糖进行基转移酶分离纯化，由此制备出多价亚单位疫苗，再免疫奶牛获取免疫乳清，并进一步分离提取葡糖转移酶的特异性抗体。该制剂经含化或添加牙膏中等使用形式直接发挥安全有效的生物抗龋效应。文档编号A61K35/20GK1114222SQ9411067公开日1996年1月3日 申请日期1994年6月29日 优先权日1994年6月29日专利技术者宋长征 申请人:宋长征本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用变形链球菌的葡糖基转移酶作为多价亚单位疫苗，免疫奶牛制备免疫乳清，并从中分离提取葡糖基转移酶特异性抗体。其中包括：（ｉ）采用多种变形链球菌的葡糖基转移酶作为多价抗原。（ｉｉ）获取高产量葡糖转移酶的方法，即培养基中加入０．０５～０ ．１％Ｔｗｅｅｎ８０和酵母浸提物浓度为１％。（ｉｉｉ）所选用的免疫动物为奶牛，所使用提取抗体的原料为初乳和乳汁。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋长征，
申请(专利权)人：宋长征，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]