高效止血原料药三七素的制备方法技术

本发明专利技术是由中药材三七制备三七素原料药的方法。凝血酶类止血药难以解决迅速止血有效急救的问题。本发明专利技术方法依次包括以下步骤：三七原料粉碎过４．０目或更细目筛→用７５％以上浓度的醇提取→提取液另作用途，渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于４０－７０℃下萃取→正丁醇部份废弃，水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。所得产品及其制剂能高效快速止血，且剂量极小给药途径便捷，易于在危重病情时起有效急救的作用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于一种以药用植物为原料生产药物的方法，特别是以中药材三七(Panaxnotoginseng(Burk)F.H Chen)为原料制备三七素(dencichine)原料药的方法。中药材三七具有止血散瘀、活血化瘀、消肿定痛、舒筋活络诸功能，其中尤以止血功能称著。《本草纲目》称“三七止血散血定痛”；《本草拾遗》称“三七止血活血，止血不伤新”。历版《中华人民共和国药典》对三七的主治功能均界定其为止血。数百年来，历代医家将三七作为止血上品，广泛用于跌打损伤、内伤出血等内外出血症。但作为速效止血药，国内外至今尚无专门的三七止血成份提纯物及其制备方法，更无止血成份提纯物制剂。而生化药凝血酶类止血药，由于使用剂量较大，给药过程较慢，难以解决迅速止血有效急救的问题。本专利技术的目的是提供一种制备高效止血原料药——三七素(dencichine)的方法。本专利技术方法依次包括以下步骤三七原料粉碎过40目或更细目筛→用75％以上浓度的醇提取→提取液另作用途，渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于40-70℃下萃取→正丁醇部份废弃，水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。以上步骤和工艺参数的进一步优化所说树脂层析为两次，第一次层析采用SephadexLH-20凝胶树脂，第二次层析采用CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂。从层析液中收集提取物的过程依次包括浓缩→脱色→结晶→过滤、干燥→成品。脱色分氧化铝过滤和活性炭吸附两次完成；干燥采用真空干燥。再进一步优化的步骤和工艺参数为(1)、粉碎过60目筛，(2)、醇提取用80％以上甲醇或乙醇，连续渗漉循环提取2-3次，每次24～48小时，合并提取液，(3)、水提取；用去离子水于常温条件下，连续渗漉循环提取2-4次，每次24～48小时，合并提取液，(4)、过滤先粗滤，再用精密滤棒真空吸滤，(5)、浓缩真空减压浓缩至8～10波美度，(6)、正丁醇萃取将浓缩液注入已清洗好的萃取锅中，加入3～5倍量正丁醇，在55-65℃条件下搅拌20-40分钟，静置3-5小时，待分层后，收集水溶液，废弃含杂质的正丁醇液，(7)、层析分别将Sephadex LH-20凝胶树脂和CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂装入两个层析柱中，预处理至中性水饱和状，滤析时，先关闭柱底阀，缓缓注入水提浓缩液使分布均匀，吸附饱和后，再开启柱底阀排出废液，并用乙醇冲洗，吸附物(三七素)用蒸馏水反复洗脱、收集合并，(8)、脱色洗脱液过氧化铝柱，脱去深色素，滤液加3～5％活性炭，在反应釜中加热至75-85℃，搅拌15-25分钟，脱去浅色素，精滤除去活性炭后，得纯三七素水溶液，(9)、浓缩结晶纯三七素水溶液减压浓缩至15～20波美度后，排出静置20小时以上，结晶析出，过滤干燥后即为成品三七素原料药。用本专利技术方法从三七中提取得到的三七素(dencichine)为β-N-乙二酸-草酰基-L-α，β-二氨基丙酸，化学结构式为 性状无色板状结晶，味苦涩。可溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙醇等有机溶剂；熔点207～208℃；鉴别(1)本品与荧光胺试剂反应，产生强烈荧光；(2)高效薄层(HPTCL)扫描测定(检出量4ng)，最大吸收波长395nm；(3)氨基酸层析谱测定，保留吸收峰值为5.40～5.41。药效学研究1、分别用大鼠、家兔作血小板生成与聚集试验，结果证明本品具有极强的血小板生成和聚集作用。与对照品止血环酸(transamine)比，最大聚集率为4∶1；2、用绒膜激素(HCG)2单位引起未成熟雌小鼠卵巢出血点动物数为指标，注射三七素，观察到能使卵巢出血点动物显著减少；3、分别用毛细管折断法、小鼠断尾动脉法，设止血环酸为对照品，测得注射本品2mg/kg，小鼠出血缩短时间为7分钟；而注射止血环酸100mg/kg，小鼠出血缩短时间仅为0.5分钟。三七素的止血活性，是等量止血环酸的700倍。毒理研究1、神经毒作用30～40g仔鸡腹腔给药20mg，2～6小时后呈现神经毒症状。表现为颈僵硬，腿肌麻痹伸直，6小时后症状逐渐消失，说明本品在过高剂量时有神经毒作用；2、急性毒性试验大鼠每3天断尾动脉一次，注射本品低剂量组1mg/kg，高剂量组5mg/kg，连续给药9天，未显毒副作用。半数致死量(LD50)为1043mg/kg，为人用剂量的522倍；3、长期毒性试验上法连续给药90天，恢复期30天，动物外观无明显变化，血液生化指标，除血小板数增多外，其他各项无明显变化；心、肺、肝、胆、脾、肾、肠、胃、肾上腺等组织无明显变化。本品的明显副作用是创伤处止血后留瘀。研究结论表明(1)三七素具有极强的止血活性，其等量药效，大大超过国内外已有止血药；(2)本品药效高，显效快，可广泛用于内外出血症的治疗，用于外科手术止血，可大大减少手术期间的失血量，提高手术安全性；对血小板缺少症、血小板聚集无力症，同时具有治疗作用。(3)本品一次使用剂量轻微，仅1～2mg即达到止血作用，不宜使用过高剂量，避免出现神经毒作用。(4)本品有止血留瘀作用，应与三七皂甙等化瘀类药物配合使用，以便祛除血瘀。本专利技术的积极效果是提供了一种获取三七止血成份提纯物的方法，所得产品为高效止血原料药——三七素(dencichine)。该药物及其制剂具有高效快速止血的特点，且剂量极小，给药途径便捷，易于在危重病情时起有效急救的作用。实施例1将三七块根洗净，粉碎，过60目筛，放入提取罐中用4倍量80％乙醇循环浸提3次，每次36小时，排出、合并滤液另作用途(提取三七皂甙等)；残渣用4倍量去离子水常温循环浸提3次，每次48小时，排出并合并提取液。经粗滤、精滤(精密沙棒吸滤)，再注入真空浓缩锅中，加热减压浓缩至8波美度，排出，转入萃取锅中，再加4倍量正丁醇，于65℃条件下自动搅拌30分钟后，静置4小时，待混合液完全分层后，排出水溶液，废弃含杂质的正丁醇液。水溶液先过Sephadex LH-20凝胶树脂柱层析，用蒸馏水洗脱；洗脱液再过CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂柱层析，用蒸馏水洗脱，得粗三七素液。粗三七素液先注入氧化铝柱滤去深色素，再放入萃取锅中，加热至80℃，加入4％活性炭，开启自动搅拌器搅拌20分钟，待色素吸附完全后，用精密滤棒吸滤，除去活性炭，得纯三七素液。纯三七素液倾入清洗干净的真空浓缩锅中，加热减压浓缩至20波美度，排出静置24小时，结晶析出。再用滤布滤去废液，晶体放入真空干燥器中，在40℃条件下抽干水份，即得含量达95％以上三七素成品。成品抽检合格后，称量，以塑袋密封包装入库。实施例2将三七块根洗净，粉碎，过40目筛，放入提取罐中用5倍量80％以上乙醇循环浸提3次，每次24小时，排出、合并滤液另作用途(提取三七皂甙等)；残渣用3倍量去离子水常温循环浸提3次，每次24小时，排出并合并提取液。经粗滤、精滤(精密沙棒吸滤)，再注入真空浓缩锅中，加热减压浓缩至8-10波美度，排出，转入萃取锅中，再加4倍量正丁醇，于60℃条件下自动搅拌30分钟后，静置4小时，待混合液完全分层后，排出水溶液，废弃含杂质的正丁醇液。水溶液先过Sephadex LH-20凝胶树脂柱层析，用蒸馏水洗脱；洗脱液再过CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂柱层析，用蒸馏水洗脱，得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是依次包括以下步骤：三七原料粉碎过４０目或更细目筛→用７５％以上浓度的醇提取→提取液另作用途，废渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于４０－７０℃下萃取→正丁醇部份废弃，水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。

【技术特征摘要】
1.一种高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是依次包括以下步骤三七原料粉碎过40目或更细目筛→用75％以上浓度的醇提取→提取液另作用途，废渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于40-70℃下萃取→正丁醇部份废弃，水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。2.如权利要求1所说的高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是第一次层析采用Sephadex LH-20凝胶树脂，第二次层析采用CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂，从层析液中收集提取物的过程依次包括浓缩→脱色→结晶→过滤、干燥→成品，脱色分氧化铝过滤和活性炭吸附两次完成，干燥采用真空干燥。3.如权利要求2所说的高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是(1)、粉碎过60目筛，(2)、醇提取用80％以上甲醇或乙醇，连续渗漉循环提取2-3次，每次24～48小时，合并提取液，(3)、水提取用去离子水于常温条件下，连续渗漉循环提取2-4次，每次24～48小时，合...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓝桂华，蓝锋，陈蓬，
申请(专利权)人：蓝桂华，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]