一种HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法及筛选单克隆方法技术

本发明专利技术公开一种HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法及筛选单克隆方法，所述HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法包括以下步骤：S1、贴壁细胞准备；S2、贴壁转悬浮；S3、无血清悬浮驯化；S4、驯化稳定传代。本发明专利技术提供的技术方案中，采用无动物源成分的培养基，完全替代传统含血清培养基，从根源上消除了胎牛血清批次差异导致的实验不稳定性，以及动物源成分携带病毒、病原体的污染风险，显著提高了细胞培养的生物安全性。同时，无血清体系成分明确，为细胞生长提供稳定可控的环境，有利于实验结果的重复性和规模化生产的标准化，为后续病毒载体生产的质量均一性奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞培养、生物制药领域，具体涉及一种hek293t细胞无血清悬浮驯化方法及筛选单克隆方法。

技术介绍

1、hek293t细胞作为病毒载体包装的常用工具细胞，其传统培养方式以贴壁培养或含血清悬浮培养为主。贴壁培养通常使用含10％胎牛血清(fbs)的dmem培养基，通过塑料培养瓶或培养皿进行扩增，但存在培养密度低、规模化生产受限等问题；而含血清悬浮培养虽采用freestyle293、expi293等专用培养基，需从初始贴壁状态经血清浓度梯度降低或专用培养基驯化实现悬浮适应，但仍未摆脱血清依赖。血清成分的批次差异不仅导致实验稳定性差，还因含动物源成分增加了病毒或病原体污染风险，严重制约了病毒载体生产的标准化和安全性。

2、随着生物制药领域对规模化、无动物源培养体系的需求提升，hek293t细胞的无血清悬浮驯化技术成为研究热点。然而，现有驯化方法存在效率低下的问题：细胞在适应无血清环境过程中易出现结团现象，导致细胞活力下降；部分细胞株生长缓慢，甚至无法完全适应悬浮培养，难以达到高密度培养目标。这些问题不仅增加了驯化周期和成本，还限制了细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，所述HEK293T无血清悬浮培养基包括如下体积占比的组分：Transpro CD01 Plus98份、GlutaMax-I 2份。

3.根据权利要求1所述的HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，在步骤S2～S4中，摇瓶中震荡培养的条件均为36～38℃、6～8％CO2、155～165rpm。

4.根据权利要求1所述的HEK293T细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，在步骤S2～S3中，细胞收集方法...

【技术特征摘要】

1.一种hek293t细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的hek293t细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，所述hek293t无血清悬浮培养基包括如下体积占比的组分：transpro cd01 plus98份、glutamax-i 2份。

3.根据权利要求1所述的hek293t细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，在步骤s2～s4中，摇瓶中震荡培养的条件均为36～38℃、6～8％co2、155～165rpm。

4.根据权利要求1所述的hek293t细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，在步骤s2～s3中，细胞收集方法为取达到传代标准的细胞悬液，300g离心9～11min后，收集细胞沉淀。

5.根据权利要求1所述的hek293t细胞无血清悬浮驯化方法，其特征在于，在步骤s3中，所述连续传3代的过程中，每次传代均保持相同培养条件和抗结团剂比例。

6.一种使用如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙小越，王海峰，
申请(专利权)人：上海佰炼生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：