用于质粒DNA残留检测的引物探针组合及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了用于质粒DNA残留检测的引物探针组合及其应用和试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明专利技术提供的引物探针组合中包括引物对和探针；所述的引物对具有如SEQ ID NO.1‑2或SEQ ID NO.4‑5所示的核苷酸序列，所述的探针具有如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.6所述的核苷酸序列。本发明专利技术提供的引物探针组合制备得到的试剂盒可用于慢病毒、γ‑逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒载体中的质粒DNA残留的检测，不需要额外建立标准品，不需要额外的样品预处理，同时可获得准确可重复的检测数据，具有较好的重复性和精密度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，具体涉及用于质粒dna残留检测的引物探针组合及其应用和试剂盒。

技术介绍

1、随着近些年细胞治疗、基因治疗的快速发展，慢病毒、腺相关病毒(adeno-associated virus，aav)等病毒载体的应用越来越广泛。一般在病毒载体的生产过程中要用到多质粒转染的过程，残留的质粒dna存在基因片段的自我复制和随机插入机体基因组内的风险。所以，监管机构会严格控制病毒类载体的质粒dna残留。

2、现有技术中存在三种质粒dna残留检测方法：dna探针杂交法、picogreen荧光法和定量pcr法。其中，dna探针杂交法存在样品干扰导致假阳性、检测量低估、方法不稳定、检测时间过长等问题；荧光染色法存在特异性低、抗干扰差的问题。定量pcr法(简称qpcr法)，也是生物制品中常用的dna残留量的检测方法。定量pcr法用于质粒dna残留的检测方法为：重组aav病毒样品经蛋白酶k预处理后，配制pcr反应体系后，分别用质粒标准品制备标准曲线、预处理的样品稀释后，加入到分装的pcr反应体系中，进行pcr扩增，通过拟合的标准曲线回算重组aav本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于质粒DNA残留检测的引物探针组合，其特征在于，所述的引物探针组合中包括引物对和探针；

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述的引物探针组合的引物对包括正向引物和反向引物；

3.根据权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于，所述的引物探针组合中正向引物、反向引物和探针的浓度比为2：2：1。

4.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述的探针可在5'端或3'端标记荧光基团或淬灭基团；

5.权利要求1-4任一项所述的引物探针组合在制备试剂盒中的应用。

6.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权...

【技术特征摘要】

1.一种用于质粒dna残留检测的引物探针组合，其特征在于，所述的引物探针组合中包括引物对和探针；

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述的引物探针组合的引物对包括正向引物和反向引物；

3.根据权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于，所述的引物探针组合中正向引物、反向引物和探针的浓度比为2：2：1。

4.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述的探针可在5'端或3'端标记荧光基团或淬灭基团；

5.权利要求1-4任一项所述的引物探针组合在制备试剂盒中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚明，王海峰，邱超达，
申请(专利权)人：上海佰炼生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：