一种基于核定位信号和C/D box茎环结构的高效载体及其递送方法技术

本发明专利技术属于病毒样颗粒技术领域，具体涉及一种基于核定位信号和C/D box茎环结构的高效载体及其递送方法。该方法利用蛋白‑茎环结构组合L7Ae‑C/Dbox，提高VLP载体中Cas9的递送效率及基因编辑效率。本发明专利技术基于核定位信号和C/Dbox茎环结构的高效载体可用于开发成用于疾病预防、或诊断、或治疗的试剂或药物，尤其是基因编辑试剂或药物，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病毒样颗粒，具体涉及一种基于核定位信号和c/d box茎环结构的高效vlp载体及其递送方法，尤其是递送mrna的方法。

技术介绍

1、vlp(virus like particle)技术来源于慢病毒系统，可利用病毒的高亲嗜性特性实现有效的细胞内递送，递送对象可为核酸、蛋白质或者核糖核蛋白(rnp)等。传统的慢病毒等载体多数以dna整合的方式递送目的dna或rna，持续翻译成cas9蛋白，会导致较大机率的“脱靶”效应(与原设计的基因剪切效应无关的基因剪切)。而vlp在实际应用中，可将cas9以mrna的形式瞬时递送到人体中，以达到治疗目的同时大幅降低脱靶效应。

2、现有慢病毒载体递送rna技术中采用ms2c和stem loop的特异性结合原理，如cn108504689a慢病毒载体及其递送外源rna的方法，利用rna结合蛋白和其所识别的rna序列相互结合的原理，将rna结合蛋白整合至慢病毒gagpol长链蛋白的骨架，并将其所识别的rna序列连接到外源目的rna，从而使目的rna在慢病毒颗粒的组装过程中被包装进慢病毒颗粒。将ms2噬菌体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于核定位信号和C/Dbox茎环结构的高效载体，其特征在于，包括载体颗粒、位于载体颗粒内的首尾携带核定位信号NLS并连接有C/Dbox茎环结构的Cas9 mRNA及位于载体颗粒内的gRNA，所述载体颗粒包括由结构蛋白构成的载体颗粒外壳及位于载体颗粒外壳内的融合了L7Ae蛋白的GagPol蛋白，所述C/Dbox茎环结构与L7Ae蛋白相互间结合，将Cas9mRNA包裹入载体颗粒内；

2.一种基于核定位信号和C/Dbox茎环结构的高效载体的组装系统，其特征在于，包括构成载体颗粒外壳的结构蛋白的表达载体、融合了L7Ae蛋白的GagPol蛋白的表达载体、融合了首尾携带核定位信号...

【技术特征摘要】

1.一种基于核定位信号和c/dbox茎环结构的高效载体，其特征在于，包括载体颗粒、位于载体颗粒内的首尾携带核定位信号nls并连接有c/dbox茎环结构的cas9 mrna及位于载体颗粒内的grna，所述载体颗粒包括由结构蛋白构成的载体颗粒外壳及位于载体颗粒外壳内的融合了l7ae蛋白的gagpol蛋白，所述c/dbox茎环结构与l7ae蛋白相互间结合，将cas9mrna包裹入载体颗粒内；

2.一种基于核定位信号和c/dbox茎环结构的高效载体的组装系统，其特征在于，包括构成载体颗粒外壳的结构蛋白的表达载体、融合了l7ae蛋白的gagpol蛋白的表达载体、融合了首尾携带核定位信号nls并连接有c/dbox茎环结构的cas9 mrna的表达载体、及grna的表达载体；

3.权利要求1所述的一种基于核定位信号和c/dbox茎环结构的高效载体或权利要求2所述的一种基于核定位信号和c/dbox茎环结构的高效载体的组装系统用于动物、人体或体外细胞的递送应用或用于制备疾病预防、或诊断、或治疗的试剂或药物。

4.一种疾病预防、或诊断、或治疗的试剂或药物，其特征在于，含有权利要求1所述的一种基于核定位信号和c/dbox茎环结构的高效载体或权利要求2所述的一种基于核定位信号和c/dbo...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘杨，王海峰，
申请(专利权)人：上海佰炼生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：