一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，包括基础培养液和尿苷；所述基础培养液含10％猪卵泡液、0.57mM半胱氨酸、0.5IU/mLLH、0.5IU/mL FSH、10ng/mL表皮生长因子、1％双抗的TCM 199培养基，其余为水；所述尿苷添加量为所述基础培养液的100μM。本发明专利技术方法通过使用人体所需代谢物尿苷(Urd)分别对体外培养的H<subgt;2</subgt;O<subgt;2</subgt;诱导的氧化应激的猪卵母细胞以及延时培养老化的猪卵母细胞进行挽救，以提高卵母细胞的质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生殖生物学，特别涉及一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液及其应用。

技术介绍

1、高质量的卵母细胞是成功受精和随后胚胎发育的先决条件，是生命开始的物质基础。在大多数哺乳动物中，雌性生殖老化的特征是卵泡和卵母细胞的数量和质量显著下降。研究表明，女性的生育能力在30岁出头开始下降，35岁以后下降更快，伴随着不孕症、流产、胚胎致死和先天性出生缺陷发病率的急剧增加。虽然辅助生殖技术可以在一定程度上补偿人类次优的生殖结果，但辅助生殖技术的成功率也随着年龄的增长而下降。因此，对于高龄产妇来说，低质量的卵母细胞是一个常见且难以克服的问题，也是生殖结果不佳的主要原因。尽管这个问题很重要，但随着年龄的增长维持卵母细胞质量的策略还没有得到很好的探索。

2、卵母细胞成熟是一种由外界信号刺激产生的细胞周期转换过程，包含卵母细胞核成熟和质成熟两个层面。卵母细胞核成熟是第一次减数分裂(metaphase i，mi)前期至第二次减数分裂中期(metaphase ii，mii)排出第一极体(first polar body，pbe)的过程，又称减数分裂成熟。该本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，其特征在于，包括基础培养液和尿苷；所述基础培养基含10％猪卵泡液、0.57mM半胱氨酸、0.5IU/mL LH、0.5IU/mL FSH、10ng/mL表皮生长因子、1％双抗的TCM 199培养基，其余为水；所述尿苷添加量为所述基础培养液的100μM。

2.根据权利要求1所述的一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，其特征在于，所述培养液的制备方法为：

3.根据权利要求1所述的一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，其特征在于，所述猪卵泡液的制备方法为：选择2～6mm的健康卵泡，抽取卵泡液，以5000rpm离心30min...

【技术特征摘要】

1.一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，其特征在于，包括基础培养液和尿苷；所述基础培养基含10％猪卵泡液、0.57mm半胱氨酸、0.5iu/ml lh、0.5iu/ml fsh、10ng/ml表皮生长因子、1％双抗的tcm 199培养基，其余为水；所述尿苷添加量为所述基础培养液的100μm。

2.根据权利要求1所述的一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，其特征在于，所述培养液的制备方法为：

3.根据权利要求1所述的一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液，其特征在于，所述猪卵泡液的制备方法为：选择2～6mm的健康卵泡，抽取卵泡液，以5000rpm离心30min，收集上清，1ml/管分装至1.5ml离心管置于-20℃冻存备用。

4.一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液的应用，其特征在于，所述培养液的应用方式如下：

5.根据权利要求4所述的一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液的应用，其特征在于，所述s2中，人为制备模拟老化猪cocs有h2o2氧化应激模型和体外延时培养老化模型两种制备方法模型。

6.根据权利要求5所述的一种添加尿苷恢复猪卵母细胞质量的培养液的应用，其特征在于，所述h2o2氧化应激模型具体方法步骤为：将挑选出的cocs于tl-hepes操作液中洗3遍清洗干净后，使用基础培养基洗1遍，然后随机选择cocs40～50个/组转移至4孔板中，其中4孔板中已含有提前平衡2-4h的一个孔的基础培养基以及两个孔的h2o2组培养基，每孔500μl...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛伟，李文文，高晨曦，李兰，程顺峰，王俊杰，沈伟，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：