一种大丽轮枝菌突变菌株及其构建方法和应用技术

本公开提供了一种大丽轮枝菌突变菌株及其构建方法和应用，采用同源重组技术将小柱孢酮脱水酶编码基因用潮霉素基因代替，获得了常规培养条件下能够大量积累小柱孢酮的基因工程菌株，该菌株培养过程简单、表型稳定，能够用于生产小柱孢酮，并且利用其合成真菌黑色素，克服了传统提取真菌黑色素方法中的耗时及步骤繁琐等缺点。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及微生物，具体地，涉及一种大丽轮枝菌突变菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

1、黑色素是一类由酚类或吲哚类物质氧化聚合形成的多聚物，广泛存在于细菌、真菌、植物和动物中。其独特的理化特性赋予其抗紫外辐射、抗氧化、抗水解酶、结合重金属、抵抗极端温度及干旱等多种生物学功能，对生物体的生存和自我保护至关重要。在真菌中，黑色素不仅参与生理活动的调节（如菌丝分化、孢子形成），还与其致病性密切相关，例如植物病原真菌通过黑色素增强对宿主的侵染能力。此外，真菌黑色素在人类生活中展现出广泛的应用潜力，包括作为防晒剂、抗氧化剂、生物半导体材料的活性成分。

2、目前，真菌黑色素主要通过两条途径合成：多巴（dopa）途径和二羟基萘（dhn）途径。其中，dhn途径在子囊菌和半知菌中尤为常见，其合成过程起始于聚酮合酶催化生成的1,3,6,8-四羟基萘（1,3,6,8-thn），随后经还原酶作用转化为中间产物小柱孢酮（scytalone），再通过脱水、氧化聚合等步骤形成终产物dhn黑色素。然而，真菌黑色素的终产物因结构复杂、非均质化而难以高效提取，传统方法（如高温碱溶本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大丽轮枝菌突变菌株，其特征在于，所述大丽轮枝菌突变菌株为通过利用包含潮霉素基因Hyg上下游编码区的重组片段，对大丽轮枝菌野生型菌株中的小柱孢酮脱水酶编码基因VDAG_03393进行敲除获得；

2.权利要求1所述的大丽轮枝菌突变菌株的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤S1中，所述上游同源臂和下游同源臂的长度各自独立地为1-2kb，且分别靶向所述VDAG_03393基因起始密码子上游和终止密码子下游的基因组序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤S2中，过重叠延伸PCR将上游同源臂、潮霉素...

【技术特征摘要】

1.一种大丽轮枝菌突变菌株，其特征在于，所述大丽轮枝菌突变菌株为通过利用包含潮霉素基因hyg上下游编码区的重组片段，对大丽轮枝菌野生型菌株中的小柱孢酮脱水酶编码基因vdag_03393进行敲除获得；

2.权利要求1所述的大丽轮枝菌突变菌株的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤s1中，所述上游同源臂和下游同源臂的长度各自独立地为1-2kb，且分别靶向所述vdag_03393基因起始密码子上游和终止密码子下游的基因组序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤s2中，过重叠延伸pcr将上游同源臂、潮霉素抗性基因hyg表达盒和下游同源臂连接为线性重组片段；

5.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤s4中，所述pcr验证包...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈捷胤，张嘉欣，张丹丹，孔志强，戴小枫，李冉，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：