一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，是通过出芽短梗霉菌株EP1001和/或EP1001基因工程菌，在发酵24.0hr‑60.0hr后，添加1.0g/L‑30.0g/L的唾液酸，唾液酸经唾液酸转移酶催化，将唾液酸从活化的糖基供体转移到受体普鲁兰多糖糖链末端，形成唾液酸化的普鲁兰多糖复合物，即唾液酸化普鲁兰多糖，发酵液离心后的上清液经有机溶剂沉淀，最终获得唾液酸化普鲁兰多糖。唾液酸化普鲁兰多糖中普鲁兰多糖的含量为55.05g/L、唾液酸化普鲁兰多糖中唾液酸含量9.58g/L、培养物和/或培养液中游离唾液酸含量为0.42g/L、唾液酸转化率最高为95.8%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于合成生物学和代谢工程。特别地，本专利技术属于经代谢工程改造的宿主细胞的发酵工程，具体涉及出芽短梗霉及其基因工程菌发酵法制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法。

技术介绍

1、普鲁兰多糖（图1）是一种新型的高分子生物材料，具有极好的成膜、成纤维、阻气、粘接、易加工、无毒性等特性，已广泛应用于食品、医药、轻工、化工和石油等领域。研究发现，普鲁兰多糖可作为益生元，促进有益双歧杆菌的生长，且在人体中只能被酶缓慢分解为葡萄糖，不会导致人体内血糖短时间内快速升高，可以被纳入专门为糖尿病人和糖耐受缺陷的患者的饮食中；另外，由于普鲁兰多糖无毒、无免疫性、非诱变性和无致癌性，广泛应用在靶向药物、基因传递、创面愈合等诸多生物医学领域。一方面，病毒和普鲁兰多糖的共价结合可以显著增强免疫球蛋白g和免疫球蛋白m的固有生产力，降低免疫球蛋白e的生产力，从而充分钝化病毒；另一方面，在药物传导系统中，普鲁兰多糖和肝脏的特异性结合可以满足肝脏的靶向作用，普鲁兰多糖衍生物在作为疫苗的无毒偶联物方面也具有广阔的应用前景。

2、唾液酸（图2）是神经氨酸的n-或o-取代的衍生物的通本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述基因工程菌株是EP1001菌株过表达唾液酸转移酶基因获得的，唾液酸转移酶基因包括α-2，3-唾液酸基转移酶和/或α-2，6-唾液酸基转移酶和/或α-2，8-唾液酸基转移酶，可以单独表达一个和/或两个以上共同表达。

3.根据权利要求2所述的一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述基因工程菌株是EP1001菌株过表达唾液酸转移酶的基因，是在唾液酸转移酶基因序列SEQ IDNO:1的5’端链接SEQ ID NO:2序列，将...

【技术特征摘要】

1.一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述基因工程菌株是ep1001菌株过表达唾液酸转移酶基因获得的，唾液酸转移酶基因包括α-2，3-唾液酸基转移酶和/或α-2，6-唾液酸基转移酶和/或α-2，8-唾液酸基转移酶，可以单独表达一个和/或两个以上共同表达。

3.根据权利要求2所述的一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述基因工程菌株是ep1001菌株过表达唾液酸转移酶的基因，是在唾液酸转移酶基因序列seq idno:1的5’端链接seq id no:2序列，将seq id no:2序列和seq id no:1序列顺序克隆到ppic9质粒后，遗传转化到出芽短梗霉ep1001菌株获得的。

4.根据权利要求1所述的一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述发酵培养基培养，是在5.0l生物反应容器中，装液量1.0l-2.5l，接种量5.0%-25.0%，搅拌转速200rpm/min-600rpm/min，通气比1.0：1.0-2.0（v/v），容器压力0.01mpa-0.02mpa，发酵温度27.0℃-30.0℃，发酵前12.0hr，控制 ph在4.5-7.0，12.0hr-60.0hr控制 ph值在2.8-3.5，发酵培养48.0hr-60.0hr。

5.根据权利要求1或4所述的一种制备唾液酸化普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述发酵培养基培养，包括分批发酵或分批补料发酵。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：晋玉宽，王方，云权政，安静，
申请(专利权)人：北京艾普希隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：