一种制备植物单细胞的方法技术

本发明专利技术采用植物外植体愈伤组织培养的方式，在培养基中添加含有荧光基团的碳源，诱导产生带有荧光基团的、细胞壁较薄的、容易被单一酶解离的、细胞形态大小均一的愈伤组织，经单一酶解离后的细胞，通过流式细胞仪检测，所制备的叶片单细胞纯度和活力分别为98.5%和99.95，结团率仅为1.5%，细胞纯度和活力较传统技术方案分别提高32.6%和21.05，结团率降低31.0%；以水稻种子为外植体，获得了细胞纯度和活力分别高达99.5%和100%的种子单细胞，突破了传统酶解法不能制备种子单细胞的局限性；另外，通过红花繼木叶片和水稻种子共同诱导，制备的细胞纯度和活力分别高达99.98%和100.0，克服了物种间异质性导致的单细胞制备的局限性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养，具体地说，涉及一种制备植物单细胞的方法。

技术介绍

1、动植物等生物是由很多单细胞组成的高级生命体，可以进行复杂的生命活动，植物根、茎、叶、以及动物内脏是单细胞分离的常见样品。从动植物组织中分离出单细胞并进行培养，对研究动植物器官功能、基因遗传突变性等具有重要意义。然而，动植物组织中多个细胞、蛋白质粘连在一起，难以分离单个细胞；尤其在植物学领域，植物细胞具有细胞壁结构，细胞间的连接主要依赖于细胞壁中胶层，细胞壁中的纤维素、半纤维素以及木质素的相互作用决定细胞间的粘连程度。

2、植物单细胞悬液的制备通常使用机械法和酶解法。机械法常使用刀片等将浸在酶提取缓冲液中的植物材料切碎，孵育数分钟，释放细胞，再经过滤、离心获得细胞悬液，然而，每种植物的细胞结构异质性较大，即使同一物种不同组织类型，同一组织类型不同组织部位，都存在明显的差异。例如细胞大小（不同发育时期，不同组织部位等）、细胞结构（海绵组织、栅栏组织、气孔细胞、胚乳细胞、叶肉细胞、维管束细胞等）、细胞形态（长形，圆形，椭圆形，梭形，菱形等）等（图1-图6），因此，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，由以下步骤组成：

2.根据权利要求1所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述植物，来源于藻类植物和/或苔藓类植物和/或蕨类植物和/或种子植物和/或禾本科植物和/或木本科植物和/或裸子植物和/或被子植物和/或乔木和/或灌木和/或野生植物和/或人工栽培植物和/或单子叶植物和/或双子叶植物。

3.根据权利要求1所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述外植体，来源于小麦和/或水稻和/或玉米和/或燕麦和/或黑麦和/或大麦和/或谷子和/或高粱和/或青稞和/或大豆和/或蚕豆和/或豌豆和/或绿豆和/或小豆和/或甘薯和/或马...

【技术特征摘要】

1.一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，由以下步骤组成：

2.根据权利要求1所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述植物，来源于藻类植物和/或苔藓类植物和/或蕨类植物和/或种子植物和/或禾本科植物和/或木本科植物和/或裸子植物和/或被子植物和/或乔木和/或灌木和/或野生植物和/或人工栽培植物和/或单子叶植物和/或双子叶植物。

3.根据权利要求1所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述外植体，来源于小麦和/或水稻和/或玉米和/或燕麦和/或黑麦和/或大麦和/或谷子和/或高粱和/或青稞和/或大豆和/或蚕豆和/或豌豆和/或绿豆和/或小豆和/或甘薯和/或马铃薯和/或木薯和/或棉花和/或大麻和/或亚麻和/或黄麻和/或油菜和/或花生和/或芝麻和/或甜菜和/或甘蔗和/或橡胶和/或桑和/或枸杞和/或甘草和/或黄芪和/或人参和/或三七和/或薄荷和/或银杏和/或薰衣草和/或茴香和/或丁香和/或茶叶和/或咖啡和/或可可和/或烟叶和/或番茄和/或啤酒花中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述愈伤组织培养基，由无机盐、激素、碳源和琼脂组成，包括ms固体培养基和/或b5固体培养基和/或white固体培养基和/或n6固体培养基。

5. 根据权利要求4所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述无机盐，包括硝酸铵和/或氯化钙和/或硫酸镁和/或磷酸氢钾和/或磷酸二氢钾和/或硝酸钾和/或硝酸钙和/或硼酸和/或氯化钴和/或硫酸亚铁和/或硫酸锰(ii) 和/或碘化钾和/或钼酸钠和/或硫酸锌和/或乙二胺四乙酸铁钠和/或硫酸铜，可以单独和/或两种以上混合添加；含量为硝酸铵0.1g/l-1.0g/l和/或氯化钙0.5g/l-1.5g/l和/或硫酸镁0.01g/l-0.1g/l和/或磷酸氢钾0.1g/l-1.0g/l和/或磷酸二氢钾1.5g/l-2.0g/l和/或硝酸钾0.5g/l-1.0g/l和/或硝酸钙0.25g/l-1.58g/l和/或硼酸1.1g/l-1.96g/l和/或氯化钴0.001g/l-0.01g/l和/或硫酸亚铁0.01g/l-0.09g/l和/或硫酸锰(ii)0.01g/l-0.1g/l和/或碘化钾0.025g/l-0.055g/l和/或钼酸钠0.002g/l-0.005g/l和/或硫酸锌0.025g/l-0.25g/l和/或乙二胺四乙酸铁钠1.12g/l-1.59g/l和/或硫酸铜0.001g/l-0.02g/l，可以单独和/或两种以上混合添加。

6.根据权利要求4所述的一种制备植物单细胞的方法，其特征在于，所述激素，包括生长素和/或合成生长素和/或生长素类似物和/或2，4-二氯苯氧乙酸和/或3，5-二甲基苯氧乙酸和/或苯氧乙酸和/或苯乙酸和/或对氯苯氧乙酸和/或3，6-二氯邻茴香酸和/或萘乙酸和/或吲哚乙酸和/或吲哚-3-丁酸和/或6-苄基氨基嘌呤和/或6-( γ，γ-二甲基烯丙基氨基)嘌呤和/或噻苯隆和/或赤霉素和/或脱落酸，可以单独和/或两种以上混合添加；含量为生长素0.001g/l-0.005g/l和/或合成生长素0.001g/l-0.005g/l...

【专利技术属性】
技术研发人员：晋玉宽，王方，安静，
申请(专利权)人：北京艾普希隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：