一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法，将活化后的大肠杆菌工程菌接入种子培养基中进行一级菌种培养，然后将培养得到的一级菌种按比例接入发酵培养基中发酵培养，制备得到核苷磷酸化酶酶液；发酵培养过程中，流加糖前培养温度为37℃，当底糖耗尽后进行流加糖，流加糖中葡萄糖与乳糖总浓度为90g/L，流加糖加糖速率控制在225‑325ml/h，流加糖后诱导温度为25‑32℃，发酵过程溶氧为20‑40％。本发明专利技术以特异性菌株大肠杆菌工程菌为生产菌株，通过控制底糖浓度、溶氧控制、流加糖配比与加糖速率以及诱导温度实现核苷磷酸化酶酶活的提升，酶活可达到500U/g以上，能够满足I+G转化过程对酶活的质量要求。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术属于呈味核苷酸生产领域，特别是涉及一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法。

技术介绍

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技术介绍
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1、i+g是以5'-肌苷酸(imp)与5'-鸟苷酸(gmp)按1：1混合而成的具有呈味作用的新一代的食品增鲜剂，被广泛的应用于食品加工领域。核苷磷酸化酶(nucleosidephosphorylase)是嘌呤生物合成补救途径中能够对核苷或脱氧核苷的可逆磷酸化催化的一种关键酶，酶催化法生产i+g不会用到价格昂贵的化学试剂，并且具有专一性强，操作过程简单，反应条件温和等显著优点逐步有替代化学合成法生产i+g趋势。

2、优良的生产菌株是发酵产酶的先决条件，但如果想进一步提高酶活，还需探索适宜的产酶发酵工艺，既要考虑菌体的生长需求，还要兼顾到酶活的提高。目前，利用大肠杆菌工程菌合成核苷磷酸化酶的过程中，受代谢途径的影响，底糖浓度、溶氧控制、流加糖配比与加糖速率以及诱导温度等设计不尽合理，导致制备得到的核苷磷酸化酶酶活性不理想，无法满足i+g转化过程对酶活的质量要求。

技术实现思路

0、专本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法，其特征在于，将活化后的大肠杆菌工程菌接入种子培养基中进行一级菌种培养，然后将培养得到的一级菌种按比例接入发酵培养基中发酵培养，制备得到核苷磷酸化酶酶液；发酵培养过程中，流加糖前培养温度为37℃，当底糖耗尽后进行流加糖，流加糖中葡萄糖与乳糖总浓度为90g/L，流加糖加糖速率控制在225-325ml/h，流加糖后诱导温度为25-32℃，发酵过程溶氧为20-40％。

2.根据权利要求1所述的一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法，其特征在于，流加糖中所述葡萄糖与所述乳糖的浓度比为60g/L：30g/L-30g/L：60g/L。p>

3.根据权...

【技术特征摘要】

1.一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法，其特征在于，将活化后的大肠杆菌工程菌接入种子培养基中进行一级菌种培养，然后将培养得到的一级菌种按比例接入发酵培养基中发酵培养，制备得到核苷磷酸化酶酶液；发酵培养过程中，流加糖前培养温度为37℃，当底糖耗尽后进行流加糖，流加糖中葡萄糖与乳糖总浓度为90g/l，流加糖加糖速率控制在225-325ml/h，流加糖后诱导温度为25-32℃，发酵过程溶氧为20-40％。

2.根据权利要求1所述的一种提高核苷磷酸化酶酶活力的方法，其特征在于，流加糖中所述葡萄糖与所述乳糖的浓度比为60g/l：30g/l-30g/l：60g/l。

3.根据权利要求1所述的一种提高核苷磷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔凡明，玉晴，吴涛，高鹏，常利斌，龚华，李岩，赵津津，
申请(专利权)人：通辽梅花生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：