一种转氨酶突变体及其筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种转氨酶突变体及其筛选方法，属于转氨酶制备技术领域。提供一种转氨酶突变体及其筛选方法，转氨酶突变体为ω‑转氨酶突变体，ω‑转氨酶的Genbank登录号为3WWJ_A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；ω‑转氨酶突变体为SEQ ID NO:1所示的ω‑转氨酶氨基酸序列第67、69、155或283位中的一个或多个进行单位点或多位点突变获得；本发明专利技术整体上具有转化效率高、催化效益好的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种转氨酶突变体及其筛选方法，属于转氨酶制备。

技术介绍

1、转氨酶(transaminase)是不对称合成光学纯手性胺的关键酶，为辅酶磷酸吡哆醛(plp)依赖型酶，在反应过程中plp与5’-磷酸吡哆胺(pmp)会相互进行转换，同时催化氨基从合适的供体到羰基受体的可逆转移，根据氨基被转移到不同位置的氨基受体上，可将转氨酶分为α-转氨酶和ω-转氨酶，α-转氨酶需要一个α位置的羰基受体来发挥其催化功能，ω-转氨酶可以催化任何结构的酮酸、酮、醛和胺，并且具有优异的立体选择性，因此具有更高的应用价值，可以更广泛应用于医药中间体的合成中。

2、r-3-氨基哌啶是重要的医药中间体，主要用来合成二肽基肽酶-iv(dpp-iv)抑制剂，如阿格列汀(alogliptin)、利拉利汀(linagliptin)等降血糖药物。利用化学合成方法合成(r)-3-氨基哌啶涉及较多试剂，且操作复杂，工序繁琐，成本较高，且无法得到高光学纯度的目标产物，利用转氨酶合成(r)-3-氨基哌啶方法转化率高，选择性好，工艺流程简单易行，绿色环保，适于大规模推广应用。

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【技术保护点】

1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体为ω-转氨酶突变体，所述ω-转氨酶的Genbank登录号为3WWJ_A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

2.根据权利要求1所述的一种转氨酶突变体，其特征在于：所述ω-转氨酶突变体由序列SEQ ID NO.1所示的所述ω-转氨酶氨基酸经下列之一或多个位点突变而得：所述ω-转氨酶第67位的酪氨酸突变为精氨酸、赖氨酸或异亮氨酸；所述ω-转氨酶第69位的苏氨酸突变为赖氨酸、甲硫氨酸或亮氨酸；所述ω-转氨酶第155位的谷氨酰胺突变为半胱氨酸、丝氨酸或精氨酸；所述ω-转氨酶第283位的苏氨酸突变位苯丙氨酸、赖氨酸或甲硫氨酸。<...

【技术特征摘要】

1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体为ω-转氨酶突变体，所述ω-转氨酶的genbank登录号为3wwj_a，其氨基酸序列如seq id no.1所示；

2.根据权利要求1所述的一种转氨酶突变体，其特征在于：所述ω-转氨酶突变体由序列seq id no.1所示的所述ω-转氨酶氨基酸经下列之一或多个位点突变而得：所述ω-转氨酶第67位的酪氨酸突变为精氨酸、赖氨酸或异亮氨酸；所述ω-转氨酶第69位的苏氨酸突变为赖氨酸、甲硫氨酸或亮氨酸；所述ω-转氨酶第155位的谷氨酰胺突变为半胱氨酸、丝氨酸或精氨酸；所述ω-转氨酶第283位的苏氨酸突变位苯丙氨酸、赖氨酸或甲硫氨酸。

3.根据权利要求2所述的一种转氨酶突变体，其特征在于：所述ω-转氨酶突变体的重组表达载体，通过将重组转氨酶基因的核酸序列连接于各种载体上构建而成。

4.根据权利要求3所述的一种转氨酶突变体，其特征在于：所述载体选用...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨莹，周慧，刘尚，黄雅文，朱凯，刘建锋，
申请(专利权)人：宿迁阿尔法科技有限公司，
类型：发明
国别省市：