一种完整腺病毒颗粒的检测方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种完整腺病毒颗粒的检测方法，包括如下步骤：S1、将活化磁珠和腺病毒抗体偶联，获得羧基磁珠‑抗体复合物；S2、采用步骤S1获得的羧基磁珠‑抗体复合物对完整腺病毒颗粒进行捕获；S3、分离病毒上清和磁珠；S4、提取腺病毒核酸；S5、利用qPCR进行腺病毒核酸检测。本发明专利技术利用高特异性和高亲和性的蛋白抗体与实时定量PCR，通过偶联了抗体的磁珠对不同的病毒颗粒进行捕获，进行DNA水平的测定，来准确、快速地检测完整腺病毒颗粒的含量的一种新的免疫分子法，已解决现有技术中检测方法不能完整腺病毒颗粒的技术问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种完整腺病毒颗粒的检测方法。

技术介绍

1、腺病毒发现60余年来，腺病毒感染全球普遍存在，时有局部暴发流行。腺病毒感染严重危害人类健康，快速准确的从临床样本和环境中检测完整腺病毒颗粒对评价感染风险和遏制腺病毒感染至关重要。

2、腺病毒(adenovirus，ad)是一种球形、无包膜的二十面体立体对称结构的病毒，直径大约70-90nm，其基因组为线性、非分段的双链dna，长度约25-45kb，可编码多个蛋白质。每个基因组两端都有倒置末端重复序列(invertedterminalre-peat，itr)。腺病毒衣壳由252个壳粒组成，其中240个为六邻体(hexon)，12个为五邻体(penton)。每个六邻体是六邻体蛋白的同源三聚体，三聚体的六邻体分子有一个三角形的塔尖和五面体的基底。以五邻体蛋白为基底可延伸出一纤毛(fiber)，纤毛顶端有一个膨隆为头节区(knob)，可与细胞表面受体相结合，可在病毒感染过程中发挥重要的作用。腺病毒感染宿主细胞后，其基因组进入细胞核，进行转录和复制。腺病毒的生命周期分为早期和晚期两本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：在步骤S1中，所述活化磁珠的制备方法为：将羧基磁珠用0.015MpH5.5的MES缓冲液震荡洗涤后，再加入EDC/NHS偶联剂溶液涡混匀，10-30℃反应。

3.如权利要求2所述的一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：所述EDC/NHS偶联剂与羧基磁珠的质量比为20ug/mg。

4.如权利要求3所述的一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：所述偶联的具体操作为：活化磁珠用0.015M pH5.5MES缓冲液洗涤后，加入用0.015...

【技术特征摘要】

1.一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：在步骤s1中，所述活化磁珠的制备方法为：将羧基磁珠用0.015mph5.5的mes缓冲液震荡洗涤后，再加入edc/nhs偶联剂溶液涡混匀，10-30℃反应。

3.如权利要求2所述的一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：所述edc/nhs偶联剂与羧基磁珠的质量比为20ug/mg。

4.如权利要求3所述的一种完整腺病毒颗粒的检测方法，其特征是：所述偶联的具体操作为：活化磁珠用0.015m ph5.5mes缓冲液洗涤后，加入用0.015m ph5.5mes缓冲液稀释后的pix抗体，10-30℃旋转孵育4h以上；分离弃上清液，加入200μl磁珠封闭液10-30℃旋转孵育1h后，分离弃上清液，保存液洗涤磁珠，重悬至10g/l，4℃保存备用，得到羧基磁珠-抗体复合物；所述腺病毒抗体与羧基磁珠的质量比不少于75ug/mg。

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡雪飞，杜薇，汪德强，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：