利用纳米酶促电活性分子二茂铁-酪胺沉积反应放大检测信号的电化学免疫传感器及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物传感器技术领域，涉及一种利用纳米酶促电活性分子二茂铁‑酪胺沉积反应放大检测信号的电化学免疫传感器及其制备方法和应用。本发明专利技术以是基于96孔板和纳米酶催化电活性分子二茂铁‑酪胺沉积信号放大的超灵敏分体式生物传感器，将电活性分子二茂铁‑酪胺作为信号放大元件，标记于信号抗体，通过捕获抗体探针、目标抗原和信号抗体之间的夹心免疫反应，实现电流检测信号的显著放大和对目标抗原的灵敏检测。本发明专利技术的传感器与ELISA同时用于检测临床肝癌患者血清中的SMP30抗体水平，结果显示出一致性，回收率为93～104％，对肿瘤标志物的便携式、快速检测又极大的推广与应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物传感器，涉及一种利用纳米酶促电活性分子二茂铁-酪胺沉积反应放大检测信号的电化学免疫传感器及其制备方法和应用。

技术介绍

1、肝细胞癌的死亡率几乎和发病率持平，是影响人类健康的最大威胁之一，肝细胞癌危险因素多，早期症状隐匿，预后差等原因使其患者发病率逐年增加。因此，探索灵敏、快速、特异的新型肝癌标志物和检测工具对肝细胞癌的早期监测和诊断尤其重要。衰老标记蛋白-30(smp30)，又称调节钙蛋白，主要以正常人肝细胞和肾小管上皮细胞中表达为主，而在hcc组织中smp30的表达量低于hcc癌旁组织。虽然，传统的肿瘤标志物是由癌细胞直接产生的，但肿瘤能够诱导机体发生免疫反应，产生抗肿瘤相关抗原的自身抗体，该抗体表达水平同肿瘤发展密切相关，能够在肿瘤相关抗原浓度低的情况下作为肿瘤的诊断标志物相关研究表明，smp30抗体在afp阴性的早期肝癌中有显著的阳性表达，因此，smp30抗体被认为是肝细胞癌的一个有吸引力的新型靶点，可作为追踪、诊断早期肝癌的可靠肿瘤标志物。

2、纳米酶是指尺寸在纳米结构范围，由单组分的纳米材料制备的人造酶。它表现出类本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.利用纳米酶促电活性分子二茂铁-酪胺沉积反应放大检测信号的电化学免疫传感器，其特征在于：所述电化学免疫传感器是基于96孔板和纳米酶催化电活性分子二茂铁-酪胺沉积信号放大的超灵敏分体式生物传感器，将电活性分子二茂铁-酪胺作为信号放大元件，标记于信号抗体，通过捕获抗体探针、目标抗原和信号抗体之间的夹心免疫反应，实现电流检测信号的显著放大和对目标抗原的灵敏检测。

2.一种如权利要求1所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：(1)制备免疫复合物GO/Hemin-Ab2：S1.将羧基化氧化石墨烯溶于超纯水中，超声分散，离心，取上清液，S2.接着再将氯化血红素溶...

【技术特征摘要】

1.利用纳米酶促电活性分子二茂铁-酪胺沉积反应放大检测信号的电化学免疫传感器，其特征在于：所述电化学免疫传感器是基于96孔板和纳米酶催化电活性分子二茂铁-酪胺沉积信号放大的超灵敏分体式生物传感器，将电活性分子二茂铁-酪胺作为信号放大元件，标记于信号抗体，通过捕获抗体探针、目标抗原和信号抗体之间的夹心免疫反应，实现电流检测信号的显著放大和对目标抗原的灵敏检测。

2.一种如权利要求1所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：(1)制备免疫复合物go/hemin-ab2：s1.将羧基化氧化石墨烯溶于超纯水中，超声分散，离心，取上清液，s2.接着再将氯化血红素溶于二甲基甲酰胺中，与步骤s1得到的上清液混合，超声处理，再通过离心将沉淀物和上清液分离，pbs缓冲液洗涤2次，在烘箱中干燥得到go/hemin，然后，将得到的氯化血红素功能化的go/hemin分散到超纯水中，超声后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺，室温下搅拌，再加入多克隆抗体，反应，然后离心分离上清和沉淀，用pbs洗涤，最后在真空干燥机中干燥后置于pbs溶液重悬，制备最终的免疫复合物go/hemin-ab2，备用；(2)制备ge/aunps/mpa/tyr修饰的金电极：1)用氧化铝匀浆抛光金电极(ge)，将打磨干净的ge放入无水乙醇中超声清洗，接着在超纯水中超声清洗，如此交替超声，重复3次；2)将三电极系统同时置于0.5mh2so4溶液的电解槽中进行电化学清洗，采用电化学循环伏安法慢扫，再进行电解池充放电，将电解池接通，接着进行cv快扫，最后再次进行cv慢扫，以上操作重复两次，ddh2o洗涤三次；3)将在第一步中处理好的ge浸入haucl4溶液中，电沉积aunps，形成aunps修饰的ge/aunps，将ge/aunps在3-巯基丙酸中孵育过夜，得ge/aunps/mpa，将edc-nhs溶液滴在ge/aunps/mpa表面室温孵育，接着将tyr溶液滴加到ge/aunps/mpa表面，在室温下孵育，利用羧基与氨基的缩合反应，将酪胺固定在电极表面，用水冲洗后，获得aunps/mpa/tyr修饰的金电极(ge/aunps/mpa/tyr)；(3)室温下孵育目标ag，以使ab1与ag发生特异性免疫反应；再滴加步骤(1)制备好的go-hemin-ab2孵育1h，然后将14μl1mg.ml-1fc-tyr、14μl1mg.ml-1tyr、14μl50mmh2o2组合成的混合溶液继续滴入，同时将步骤(2)获得的ge/aunps/mpa/tyr也加入，在37℃中持续反应30min，即可得到所述的电化学免疫传感器。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：在步骤s1中，所述羧基化氧化石墨烯与超纯水的比例为1mg：1ml，超声分散3h以上，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，虞先濬，黄勇，钟莉娉，何坚，施思，徐近，王旭，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：