一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法技术

本发明专利技术公开了一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法，包括如下步骤：(1)将NDV细胞病毒液进行冰冻、解冻处理，反复进行多次，再进行超声破碎处理，得细胞悬液；(2)将细胞悬液离心去除细胞碎片和细胞核，收集上清液。采用本发明专利技术的方法，细胞破碎率高，且释放出的新城疫病毒血凝效价高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病毒制备，具体涉及一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法。

技术介绍

1、目前，我国新城疫疫苗的生产主要是通过接种9-10日龄的鸡胚来培养制备疫苗，直接采用鸡胚进行病毒扩增有以下潜在困难：(1)需要大量的人力和物力，属于劳动密集工艺；(2)该工艺很依赖spf鸡胚的充足供应，一旦鸡群中存在疾病或鸡群的spf状态中断都有可能使spf鸡胚供应不足；(3)鸡胚尿囊液含有成分复杂的杂蛋白和卵黄，给下游纯化过程带来一定的困难；(4)鸡是许多细菌的天然宿主，容易被感染，有研究表明由母体遗传给鸡胚的潜在污染比人为操作所带来的污染几率大很多。因此急需选择新的新城疫病毒疫苗生产介质进行新城疫病毒的生产。

2、近年来，己有多种细胞用于新城疫病毒(ndv)的增殖，如mdbk细胞、牛肾胚胎细胞系(bs/bek)、df-1细胞(鸡胚成纤维细胞)、悬浮vero细胞等。由于ndv属于细胞内病毒，具有很强的细胞结合活性，所以病毒收获时必须收集并有效破碎细胞才能得到大量游离的病毒颗粒。目前在针对病毒的大规模生产过程中，大多采用了冻融法来裂解细胞收获胞内病毒。但冻融法存在不易放大、产量不稳定的缺点，限制了病毒类生物制品的生产规模。也有通过低渗或化学裂解的方法来收获细胞内病毒，但大量结合在细胞膜上的病毒并未充分释放，而且很多化学裂解试剂同样会破坏有包膜病毒的包膜，使得病毒失去生物活性。

技术实现思路

1、有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法，本专利技术的方法能够有效地裂解细胞释放新城疫病毒。

2、本专利技术采取的具体技术方案是：

3、一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法，包括如下步骤：

4、(1)将ndv细胞病毒液进行冰冻、解冻处理，反复进行多次，再进行超声破碎处理，得细胞悬液；

5、(2)将细胞悬液离心去除细胞碎片和细胞核，收集上清液。

6、进一步地，步骤(1)所述的冰冻、解冻处理为将ndv细胞病毒液放在液氮冰冻4-6min钟后，再拿到23-27℃下缓慢解冻。

7、进一步地，步骤(1)冰冻、解冻处理反复进行三次。

8、进一步地，所述超声破碎处理是在冰浴条件下进行，超声处理完之将细胞悬液迅速置于冰上。

9、进一步地，所述为超声破碎处理在180w的条件下进行破碎，超声处理细胞病毒液1分钟，单次破碎2秒，间隔2秒，进行15次破碎。

10、进一步地，所述细胞悬液在4℃下以4000rpm离心10分钟去除细胞碎片和细胞核。

11、进一步地，收集上清液保存在-80℃冰箱。

12、进一步地，所述ndv细胞病毒液是取bsr t7/5细胞进行生长培养，然后接种新城疫病毒培养而得。

13、本专利技术的有益效果是：采用本专利技术的方法，细胞破碎率高，且释放出的新城疫病毒血凝效价高，即本专利技术的方法能够有效地裂解细胞释放新城疫病毒。

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【技术保护点】

1.一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将NDV细胞病毒液进行冰冻、解冻处理，反复进行多次，再进行超声破碎处理，得细胞悬液；(2)将细胞悬液离心去除细胞碎片和细胞核，收集上清液。

2.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，步骤(1)所述的冰冻、解冻处理为将NDV细胞病毒液放在液氮冰冻4-6min钟后，再拿到23-27℃下缓慢解冻。

3.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，步骤(1)冰冻、解冻处理反复进行三次。

4.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，所述超声破碎处理是在冰浴条件下进行，超声处理完之将细胞悬液迅速置于冰上。

5.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，所述为超声破碎处理在功率强度为180W的条件下进行破碎，超声处理细胞病毒液1分钟，单次破碎2秒，间隔2秒，进行15次破碎。

6.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，所述细胞悬液在4℃下以4000rpm离心10分钟去除细胞碎片和细胞核。

7.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，收集上清液保存在-80℃冰箱。

8.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，所述NDV细胞病毒液是取BSRT7/5细胞进行生长培养，然后接种新城疫病毒培养而得。

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【技术特征摘要】

1.一种裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将ndv细胞病毒液进行冰冻、解冻处理，反复进行多次，再进行超声破碎处理，得细胞悬液；(2)将细胞悬液离心去除细胞碎片和细胞核，收集上清液。

2.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，步骤(1)所述的冰冻、解冻处理为将ndv细胞病毒液放在液氮冰冻4-6min钟后，再拿到23-27℃下缓慢解冻。

3.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，步骤(1)冰冻、解冻处理反复进行三次。

4.根据权利要求1所述裂解细胞释放新城疫病毒的方法，其特征在于，所述超声破碎处理是在冰浴条件下进行，超声处理完之将...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，钟莉娉，罗宜群，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：