人多能干细胞单细胞的建系方法技术

技术编号:43413397 阅读:13 留言:0更新日期:2024-11-22 17:49
本申请涉及一种适合多能干细胞(PSC)单细胞建系的方法,所述方法的特征在于建系培养基、单细胞获取方式和单细胞生长培养基的使用,所述建系培养基包含ROCK抑制剂、MEK抑制剂和GSK3抑制剂,所述单细胞获取方式为有限稀释法,所述单细胞生长培养基包含CloneR2。本申请还涉及所述方法使用的培养基,所述培养基在维持多能干细胞单细胞的干性和促进多能干细胞单细胞增殖上具有优势。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物医药领域,具体的涉及一种人多能干细胞(psc)的建系方法。


技术介绍

1、近年来,干细胞研究已经发展成为一个具有广阔前景的领域,推动了干细胞在再生医学领域的基础转化和临床进步。尤其是以人胚胎干细胞(human embryonic stemcell, hesc)和人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell, hipsc)为例的多能干细胞(psc),在再生医学和移植医学、疾病建模、药物发现筛选和人类发育生物学等方面具有重要意义。但若应用于生产目前仍有许多问题有待解决,首要的是改进干细胞建系方法。

2、hesc是首先得到研究和应用的干细胞。hesc通过从发育至囊胚阶段的胚胎中分离获得。经典的胚胎干细胞建系方法首先是酶解去除透明带或利用机械法直接分离囊胚的透明带,采用免疫外科学的方法,使用动物血清使滋养层溶解,将分离的内细胞团(innercell mass, icm)放置在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast, mef)上培养,最终得到hesc。为了克服与h本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种建立多能干细胞的单克隆细胞系的方法,其包括建系培养基的使用,所述建系培养基包括ROCK抑制剂、MEK抑制剂和GSK3抑制剂。

2.根据权利要求1所述的方法,其还包括CloneR2的使用。

3.根据权利要求2所述的方法,其还包括单细胞生长培养基的使用,所述单细胞生长培养基包括所述CloneR2。

4.根据权利要求1所述的方法,所述ROCK抑制剂为Y-27632,所述MEK抑制剂为PD0325901,所述GSK3抑制剂为CHIR-99021。

5.根据权利要求3所述的方法,所述建系培养基还包括人调蛋白、生长因子和抗氧化剂。

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【技术特征摘要】

1.一种建立多能干细胞的单克隆细胞系的方法,其包括建系培养基的使用,所述建系培养基包括rock抑制剂、mek抑制剂和gsk3抑制剂。

2.根据权利要求1所述的方法,其还包括cloner2的使用。

3.根据权利要求2所述的方法,其还包括单细胞生长培养基的使用,所述单细胞生长培养基包括所述cloner2。

4.根据权利要求1所述的方法,所述rock抑制剂为y-27632,所述mek抑制剂为pd0325901,所述gsk3抑制剂为chir-99021。

5.根据权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员:张云景思佳顾佳斌
申请(专利权)人:杭州瑞普晨创科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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