【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，涉及一种基于化学衍生法检测217-磷酸化微管蛋白片段的方法及应用。
技术介绍
1、在阿尔茨海默病的诊断过程中，精确地检测血浆中阿尔茨海默病(ad)相关生物标志物——217-磷酸化微管蛋白片段(p-tau 217)的水平具有重要意义。然而，由于p-tau217在血浆中的浓度极低，常规质谱检测技术面临着灵敏度不足的挑战。阿尔茨海默病是一种神经退行性疾病，其早期诊断对于疾病的管理和治疗至关重要。p-tau 217作为ad的一个重要生物标志物，在疾病的早期诊断和进展监测中扮演着重要角色。然而，目前的检测方法依赖于高性能但昂贵的质谱设备，并且需要长时间的色谱分离，增加了检测成本和复杂性。
2、传统p-tau 217检测方法如华盛顿大学圣路易斯分校开发的技术，该技术在样品处理过后，采用nanoacquity uplc系统进行液相分离，其中使用高端的fusiontmlumostmtribridtm质谱仪对p-tau 217进行分析；又例如哥登堡大学开发的lc-ms方法，样品处理完成后，采用dionex 3000系统进行nano lc液相分析，然后使用eclipsetmtribridtm质谱仪对p-tau 217进行分析。上述方法均需要使用高端质谱仪进行检测，增加了检测的成本和复杂性。
技术实现思路
1、为克服现有技术的缺点与不足，本专利技术提出一种基于化学衍生法检测217-磷酸化微管蛋白片段的方法及应用，通过提高p-tau 217(217-磷酸化微管蛋白片段)
2、本专利技术的目的可以通过以下方案来实现：
3、第一方面，本专利技术提供一种基于化学衍生法检测217-磷酸化微管蛋白片段的方法，所述方法包括以下步骤：
4、s1、向p-tau 217溶液中加入tmpp-ac-osu、三乙胺溶液，混合后进行衍生化反应，再加入氨水溶液进行淬灭反应，得到样品溶液；
5、s2、取样品溶液进行lc-ms/ms检测。
6、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s1中，所述p-tau 217溶液的浓度为0.001-1000pg/ml。
7、在一些优选实施例中，所述p-tau 217溶液采用的溶剂为2wt.％乙腈的水溶液。
8、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s1中，p-tau 217与tmpp-ac-osu的用量比为0.001-1000pg/ml：1-300ug。
9、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s1中，p-tau 217、三乙胺溶液、氨水溶液的用量比为0.001-1000pg/ml：0.01-10μl：1.01-10μl。
10、进一步地，所述氨水溶液的浓度为18-23wt.％；三乙胺溶液的浓度为18-22wt.％。
11、进一步地，所述p-tau 217溶液的浓度为0.1-1000pg/ml。
12、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s1中，所述混合的方法包括震荡搅拌，所述震荡搅拌的时间为0.5-2小时，震荡搅拌的频率为800-1200rpm。
13、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s1中，p-tau 217经过衍生化反应生成p-tau217-chem衍生物。
14、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s1中，用羟胺溶液替换氨水溶液。
15、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s2中，将样品溶液移入进样小瓶或96孔进样板，上样lc/ms/ms进行检测。
16、作为本专利技术的一个实施方案，步骤s2中，lc/ms/ms检测的参数包括：
17、色谱条件：
18、色谱柱：睿康c18色谱柱；
19、流动相a：水+0.1％氨水；
20、流动相b：乙腈+0.1％氨水；
21、流动相梯度如下：
22、 时间(min) 流动相b的比例(％) 流速(ml/min) 0.0 5 0.4 0.5 5 0.4 3.0 50 0.4 3.5 95 0.4 4.5 95 0.4 5.0 5 0.4 6.0 5 0.4
23、。
24、质谱采集参数如下：
25、 化合物 母离子 子离子 ce rf tau217 539 678.5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于化学衍生法检测217-磷酸化微管蛋白片段的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述p-Tau 217溶液的浓度为0.001-1000pg/mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，p-Tau 217与TMPP-Ac-OSu的用量比为0.001-1000pg/mL：1-300ug。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，p-Tau 217、三乙胺溶液、氨水溶液的用量比为0.001-1000pg/mL：0.01-10μL：1.01-10μL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述氨水溶液的浓度为18-23wt.％；三乙胺溶液的浓度为18-22wt.％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述混合的方法包括震荡搅拌，所述震荡搅拌的时间为0.5-2小时，震荡搅拌的频率为800-1200RPM。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，用羟胺溶液替换氨水溶液
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，将样品溶液移入进样小瓶或96孔进样板，上样LC/MS/MS进行检测。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述LC/MS/MS检测的色谱条件：
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述LC/MS/MS检测的质谱采集参数如下：
...【技术特征摘要】
1.一种基于化学衍生法检测217-磷酸化微管蛋白片段的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中，所述p-tau 217溶液的浓度为0.001-1000pg/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中，p-tau 217与tmpp-ac-osu的用量比为0.001-1000pg/ml：1-300ug。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中，p-tau 217、三乙胺溶液、氨水溶液的用量比为0.001-1000pg/ml：0.01-10μl：1.01-10μl。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中，所述氨水溶液的浓度为1...
【专利技术属性】
技术研发人员：段立坤，李姝妹，翟立斐，谢晓磊，
申请(专利权)人：上海睿质科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。