本发明专利技术公开了一种肺炎型支原体药敏快速检测试剂及制备方法，由肺炎型支原体培养基和药敏板两部分组成。肺炎型支原体培养基由新鲜牛血清、新鲜酵母液、葡萄糖、酚红和抑菌剂组成。通过控制培养液中ｐＨ值、葡萄糖及酚红的浓度，提高试剂反应速度。药敏板是２４孔培养板，标有１～１２号，每个号标有Ａ、Ｂ两孔，共２４孔。１～１１号分别包被１１种药物，每个号的Ａ、Ｂ两孔分别包被同一种药的高、低浓度药液。本发明专利技术性能稳定，判断标准直观、反应快，２４小时可报结果。不仅能快速检出肺炎支原体，而且能检出所感染肺炎支原体对哪种药物敏感，对用药治疗有直接指导作用。为肺炎支原体感染病的快速诊断有效治疗提供保证。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外诊断试剂及制备方法，特别涉及因支原体引起的呼吸道及肺部疾病检测的药敏检测试剂及制备方法。
技术介绍
肺炎型支原体是呼吸道和肺部感染性疾病的常见病原体，检出率占呼吸道感染人群的20% 40%。肺炎支原体感染可引起上呼吸道感染及支原体肺炎，其用药方法与病毒性、细菌性感染均不同，不同个体感染的肺炎支原体对药物的敏感性也不同，肺炎支原体诊断加药敏的检测试剂，能保证肺炎支原体病早期诊断及科学用药，使患者得到及时有效治疗。目前国内外对支原体实验诊断技术较多，如特异性抗体检测技术、代谢抑制试验、Southern Blot、PCR法等。抗体检测技术易出现交叉反应。代谢抑制试验，需加特异性抗体抑制支原体生长，技术较复杂，临床应用不多。Southern Blot实验技术要求高，不易普遍开展，PCR法容易出现假阳性和假阴性，已被国家卫生部下令禁止用于临床检验。而培养法是根据支原体的生活特性而采用的特异培养基检测支原体的方法。该方法不仅能特异性地诊断支原体感染，还能和药敏板结合，对所感染的支原体进行药敏分析。目前各医院使用的支原体培养基有单一的解脲支原体培养基，单一的人型支原体培养基，和联合型支原体培养基。而且单一支原体培养基已有人申报了中国专利(申请号9611701.0)。联合型支原体培养基也有中国专利(申请号00113758. 1)。以上支原体培养基均应用于尿道生殖道的支原体感染的诊断，而用于呼吸道和肺部支原体感染的肺炎支原体检测试剂已有商品问世，但未见专利文献报道。肺炎型支原体药敏检测试剂至今未见相关商品及专利文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，该试剂能特异性地检出肺炎支原体的同时检测所感染的肺炎支原体对哪种常用药敏感，主要用于小儿科和呼吸科的呼吸道和肺部支原体感染的诊断及指导临床用药治疗，为肺炎支原体感染性疾病的及早诊断及有效治疗提供保证。 为达到以上目的，本专利技术是采取如下技术方案予以实现的 —种肺炎型支原体药敏快速检测试剂，包括肺炎支原体培养基和药敏板，其特征在于，所述肺炎支原体培养基按质量百分比包括下述组分 基础培养基70 90% ; 小牛血清10 30% ; 酵母粉O. 5 2. 5% ; 葡萄糖O. 1 0. 5%; 上述肺炎支原体培养基中还包括外加0. 08 0. 2ppm的酚红、10 20万单位/100ml的青霉素； 其中基础培养基按质量百分比包括下述组分4 母液 96 99% 氯化钠 0. 3 0. 7% 磷酸二氢钾0. 1 0. 3% 蛋白胨 0. 3 3% 其中母液为牛肉浸出液与猪胃或肺消化液按质量比4 : 6 6 : 4的混合溶液； 所述药敏板是一块24孔培养板，标有1 12号，每号标有A、B两孔，其中1 11号孔分别包被有11种常规治疗支原体药物，这些药物从以下7大类药物中筛选出13内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类；每个号的A、 B两孔分别包被同一种药的低、高两种不同浓度的药液，高浓度药液均为一次成人药量溶解到1 5ml缓冲液中，低浓度药液为高浓度药液再稀释15 25倍，第12孔不包被药物，留作对照。 —种上述肺炎型支原体药敏快速检测试剂的制备方法，包括下述步骤 —、肺炎支原体培养基的制备 (1)分别提取新鲜牛肉浸出液、猪胃或肺消化液，按质量比4 : 6 6 : 4的比例，将牛肉浸出液与猪胃或肺消化液的混合制得培养基母液； (2)将以上培养基母液与下列物质按质量百分比搅拌混合母液 96 99%氯化钠 0. 3 0. 7%磷酸二氢钾 0. 1 0. 3%蛋白胨 0.3 3%待氯化钠、磷酸二氢钾和蛋白胨完全溶解后，煮沸过滤，取滤液，即制得基础培养液；(3)将基础培养基与下列物质按质量百分比搅拌混合均匀，基础培养基 70 90%小牛血清 10 30%酵母粉 0. 5 2. 5%葡萄糖 0. 1 0. 5%外加酚红0. 08 0. 2pp m，青霉素10 20万单位/100ml，调节pH值为6. 0 8. 0，即制得肺炎支原体培养基。 二、药敏板的制备 (1)将24孔培养板每两孔标一个孔号，孔号从1标至12，每号的两孔分别记为A、B孔，经粗洗、精洗、4(TC恒温烤干备用； (2)从以下7大类药物P内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类中筛选出11种常规治疗支原体药物； (3)每种药按成人每次药量溶解到1 5ml缓冲液中，待药完全溶解后，离心提取上清，再配成两种浓度高浓度药液为一次成人药量1 5ml，低浓度药液为高浓度药液再稀释15 25倍， (4)用加样器分别吸取各药物的低、高浓度药液，分加到药敏板1-11号各自的A、B两孔内，静置30分钟后，吸出弃去。 上述方案中，所述1 11号孔分别包被11种药物及A、B两孔低、高浓度药液的浓度如下表所示药物名称低浓度药液(mg/ml)高浓度药液(mg/ml)盐酸多西环素0.6 —-1.09. 0 '12. 0四环素1.6 —-2.016. 0 ' 30. 0克拉霉素0.4 --0.86. 25 ' 14. 0交沙霉素0.3 --0.64. 0 '8. 0盐酸米诺环素0.3 --0.64. 0 '8. 0阿奇霉素1.4 --1.814. 0 ' 28. 0司帕沙星0.8 --1.29. 0 '17. 0红霉素1.4 --1.816. 0 ' 28. 0盐酸洛美沙星1.0 --3.017. 0 ' 35. 0氯氟沙星1.0 --3.017. 0 ' 35. 0盐酸左氧氟沙星0.8 —-1.412. 0 ' 20. 0。 本专利技术的优点是性能稳定，判断标准直观，特异性强，不需特殊设备，24小时可报结果。本试剂已在两家医院进行临床试验，观察200多例病例，得到较好结果，同步盲法批内批间反应结果的符合率达100%，说明试剂性能稳定。按药敏反应结果指导临床用药，显效和有效率达98%以上。说明该试剂对临床用药有直接指导作用，为肺炎型支原体感染型疾病的早期诊断及有效治疗提供了保证。具体实施例方式以下结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明。 —种肺炎型支原体药敏快速检测试剂，包括肺炎支原体培养基和药敏板，肺炎支原体培养基包括下述组分基础培养基、小牛血清、酵母粉、葡萄糖。外加微量酚红和青霉素。具体实施例参见表l。 表l肺炎支原体培养基组成 质量百分比％<table>table see original document page 6</column></row><table> 表1中，基础培养基包括下述组分母液、氯化钠、磷酸二氢钾、蛋白胨。具体实施例(代号为基1 基4)参见表2。 表2基础培养基组成 质量百分比％<table>table see original document page 7</column></row><table> 表2中母液(代号为母1 母4)为牛肉浸出液与猪胃或肺消化液按质量比4 : 6 6 : 4的混合溶液。具体如表3所示。 表3 母液组成 质量百分比％<table>table see original document 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肺炎型支原体药敏快速检测试剂，包括肺炎支原体培养基和药敏板，其特征在于，所述肺炎支原体培养基按质量百分比包括下述组分： 基础培养基７０～９０％； 小牛血清１０～３０％； 酵母粉０．５～２．５％； 葡萄糖０．１～０．５％； 上述肺炎支原体培养基中还包括外加０．０８～０．２ｐｐｍ的酚红、１０～２０万单位／１００ｍｌ的青霉素； 上述肺炎支原体培养基中，基础培养基按质量百分比包括下述组分： 母液 ９６～９９％ 氯化钠 ０．３～０．７％ 磷酸二氢钾 ０．１～０．３％ 蛋白胨 ０．３～３％ 其中母液为牛肉浸出液与猪胃或肺消化液按质量比４∶６～６∶４的混合的混合溶液； 所述药敏板是一块２４孔培养板，标有１～１２号，每号标有Ａ、Ｂ两孔，其中１～１１号孔分别包被有１１种常规治疗支原体药物，这些药物从以下７大类药物中筛选出：β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类；每个号的Ａ、Ｂ两孔分别包被同一种药的低、高两种不同浓度的药液，高浓度药液均为一次成人药量溶解到１～５ｍｌ缓冲液中，低浓度药液为高浓度药液再稀释１５～２５倍，第１２孔不包被药物，留作对照。...
【技术特征摘要】
一种肺炎型支原体药敏快速检测试剂，包括肺炎支原体培养基和药敏板，其特征在于，所述肺炎支原体培养基按质量百分比包括下述组分基础培养基70～90％；小牛血清10～30％；酵母粉0.5～2.5％；葡萄糖0.1～0.5％；上述肺炎支原体培养基中还包括外加0.08～0.2ppm的酚红、10～20万单位/100ml的青霉素；上述肺炎支原体培养基中，基础培养基按质量百分比包括下述组分母液96～99％氯化钠 0.3～0.7％磷酸二氢钾 0.1～0.3％蛋白胨 0.3～3％其中母液为牛肉浸出液与猪胃或肺消化液按质量比4∶6～6∶4的混合的混合溶液；所述药敏板是一块24孔培养板，标有1～12号，每号标有A、B两孔，其中1～11号孔分别包被有11种常规治疗支原体药物，这些药物从以下7大类药物中筛选出β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类；每个号的A、B两孔分别包被同一种药的低、高两种不同浓度的药液，高浓度药液均为一次成人药量溶解到1～5ml缓冲液中，低浓度药液为高浓度药液再稀释15～25倍，第12孔不包被药物，留作对照。2.如权利要求1所述的肺炎型支原体药敏快速检测试剂，其特征在于，所述1 11号 孔分别包被11种药物及A、B两孔低、高浓度药液的浓度如下表所示药物名称盐酸多西环素四环素交沙霉素 盐酸米诺环素司帕沙星盐酸洛美沙星盐酸左氧氟沙星低浓度药液(mg/ml)0. 6 1. 01.6 2.0 16.00. 4 0. 8 6. 250. 3 0. 6 4. 0 -0. 3 0. 6 4. 0 -1.4 1.8 14.00.8 1.2 9.0 1.4 1.8 16.01.0 3.0 17.01.0 3.0 17.00. 8 1. 4 12. 0高浓度药液(mg/ml) 9. 0 12. 0- 30. 0- 14. 0 8. 08. 0 -28. 017. 0 -28. 0 -35. 0 -35. 0 -20. 0。3. —种权利要求1所述肺炎型支原体药敏快速检测试剂的制备方法，包括下述步骤 一、肺炎支原体培养基的制备(i)分别提取新鲜牛肉浸出液、猪胃或肺消化液，按质量比4 : 6 6 : 4的比例，将牛肉浸出液与猪胃或肺消化液的混合制得培养基母...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄威权，黄新凤，
申请(专利权)人：黄威权，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]
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