提供了tau报告组合物、tau报告细胞和tau报告动物，其包含与第一报告蛋白连接的四重复序列(4R)tau同种型和与不同于该第一报告蛋白的第二报告蛋白连接的三重复序列(3R)tau同种型。提供了用于制备此类tau报告细胞和tau报告动物以及使用此类tau报告细胞和tau报告动物评估tau靶向试剂的活性的方法。
1、人mapt基因编码6种不同的tau同种型：2n4r、1n4r、0n4r、2n3r、1n3r、0n3r。含有4r(4个重复序列)与3r(3个重复序列)tau的转录物之间的差异是基于外显子10的包含(4r)或排除(3r)。人通常表达相等比率的3r和4r tau。在一些tau蛋白病诸如阿尔茨海默病中，来自死后脑组织的实验证据表明，tau的不溶性聚集体由3r和4r tau组成。在罕见的tau蛋白病诸如进行性核上性麻痺(psp)和皮质基底节变性(cbd)中，4r tau蛋白是具有聚集倾向的tau种类。这些不同类型的聚集体在疾病中的原因是未知的。
2、迄今为止，一个主要的挑战是开发测量不同tau同种型的mrna的测定法。例如，tau的“r/重复序列”结构域使得设计引物对和taqman探针以测量3r tau具有挑战性。由于用于测量某些tau同种型的测定法的这种缺乏，精确地测试应当仅减少4r tau而不影响3r tau的试剂(例如，sirna)相对于应当减少两者的试剂(例如，sirna)的特异性是具有挑战性的。
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【技术保护点】
1.一种细胞，所述细胞包含与第一报告蛋白连接的四重复序列(4R)tau同种型和与不同于所述第一报告蛋白的第二报告蛋白连接的三重复序列(3R)tau同种型。
2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述细胞包含第一融合蛋白和第二融合蛋白，所述第一融合蛋白包含与所述第一报告蛋白融合的所述4R tau同种型，所述第二融合蛋白包含与所述第二报告蛋白融合的所述3Rtau同种型。
3.根据权利要求2所述的细胞，其中所述细胞包含编码所述第一融合蛋白的第一核酸和编码所述第二融合蛋白的第二核酸，其中所述细胞表达所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白。
4.根据权利要求1所述的细胞...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细胞，所述细胞包含与第一报告蛋白连接的四重复序列(4r)tau同种型和与不同于所述第一报告蛋白的第二报告蛋白连接的三重复序列(3r)tau同种型。
2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述细胞包含第一融合蛋白和第二融合蛋白，所述第一融合蛋白包含与所述第一报告蛋白融合的所述4r tau同种型，所述第二融合蛋白包含与所述第二报告蛋白融合的所述3rtau同种型。
3.根据权利要求2所述的细胞，其中所述细胞包含编码所述第一融合蛋白的第一核酸和编码所述第二融合蛋白的第二核酸，其中所述细胞表达所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白。
4.根据权利要求1所述的细胞，其中所述细胞包含第一核酸和第二核酸，所述第一核酸包含所述4r tau同种型的编码序列和所述第一报告蛋白的编码序列，所述第二核酸包含所述3r tau同种型的编码序列和所述第二报告蛋白的编码序列，其中所述细胞表达所述4rtau同种型、所述3r tau同种型、所述第一报告蛋白和所述第二报告蛋白。
5.根据权利要求4所述的细胞，其中所述4r tau同种型的所述编码序列和所述第一报告蛋白的所述编码序列被第一2a肽的编码序列分隔开，并且所述3r tau同种型的编码序列和所述第二报告蛋白的编码序列被第二2a肽的编码序列分隔开。
6.根据权利要求5所述的细胞，其中所述第一2a肽是第一p2a肽，并且所述第二2a肽是第二p2a肽。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的细胞，其中所述第一核酸和所述第二核酸被整合到所述细胞的基因组中。
8.根据权利要求3至7中任一项所述的细胞，其中所述细胞包含病毒载体，所述病毒载体包含所述第一核酸和所述第二核酸。
9.根据权利要求8所述的细胞，其中所述病毒载体是慢病毒载体或腺相关病毒(aav)载体。
10.根据权利要求3至7中任一项所述的细胞，其中所述细胞包含含有所述第一核酸的第一病毒载体和含有所述第二核酸的第二病毒载体。
11.根据权利要求10所述的细胞，其中所述第一病毒载体和所述第二病毒载体是慢病毒载体或腺相关病毒(aav)载体。
12.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述第一报告蛋白是第一荧光报告蛋白，并且所述第二报告蛋白是第二荧光报告蛋白。
13.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述第一报告蛋白是eyfp，并且所述第二报告蛋白是mcherry。
14.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述4r tau同种型和所述3rtau同种型是人的。
15.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述4rtau同种型是2n4r tau同种型。
16.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述3rtau同种型是2n3r tau同种型。
17.根据权利要求1至14中任一项所述的细胞，其中所述4r tau同种型是2n4r tau同种型，并且其中所述3rtau同种型是2n3rtau同种型。
18.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述4r tau同种型包含seq id no:13中所示的序列，并且所述3r tau同种型包含seq id no:14中所示的序列。
19.根据权利要求1至14中任一项所述的细胞，其中所述4r tau同种型是1n4r tau同种型。
20.根据权利要求1至14和19中任一项所述的细胞，其中所述3r tau同种型是1n3r tau同种型。
21.根据权利要求1至14中任一项所述的细胞，其中所述4r tau同种型是1n4r tau同种型，并且其中所述3rtau同种型是1n3rtau同种型。
22.根据权利要求1至14和19至21中任一项所述的细胞，其中所述4r tau同种型包含seq id no:23、27、31或47中所示的序列，并且所述3r tau同种型包含seq id no:24、28、32或49中所示的序列。
23.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
24.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述细胞是人细胞。
25.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述细胞是永生化细胞。
26.根据任一前述权利要求所述的细胞，其中所述细胞是hek293细胞。
27.一种细胞群体，所述细胞群体包含多个根据任一前述权利要求所述的细胞。
28.一种非人动物，所述非人动物包含与第一报告蛋白连接的四重复序列(4r)tau同种型和与不同于所述第一报告蛋白的第二报告蛋白连接的三重复序列(3r)tau同种型。
29.根据权利要求28所述的非人动物，其中所述非人动物包含第一融合蛋白和第二融合蛋白，所述第一融合蛋白包含与所述第一报告蛋白融合的所述4r tau同种型，所述第二融合蛋白包含与所述第二报告蛋白融合的所述3r tau同种型。
30.根据权利要求29所述的非人动物，其中所述非人动物包含编码所述第一融合蛋白的第一核酸和编码所述第二融合蛋白的第二核酸，其中所述非人动物表达所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白。
31.根据权利要求28所述的非人动物，其中所述非人动物包含第一核酸和第二核酸，所述第一核酸包含所述4r tau同种型的编码序列和所述第一报告蛋白的编码序列，所述第二核酸包含所述3r tau同种型的编码序列和所述第二报告蛋白的编码序列，其中所述非人动物表达所述4r tau同种型、所述3r tau同种型、所述第一报告蛋白和所述第二报告蛋白。
32.根据权利要求31所述的非人动物，其中所述4r tau同种型的编码序列和所述第一报告蛋白的编码序列被第一2a肽的编码序列分隔开，并且所述3r tau同种型的编码序列和所述第二报告蛋白的编码序列被第二2a肽的编码序列分隔开。
33.根据权利要求32所述的非人动物，其中所述第一2a肽是第一p2a肽，并且所述第二2a肽是第二p2a肽。
34.根据权利要求30至33中任一项所述的非人动物，其中所述第一核酸和所述第二核酸被整合到所述非人动物的基因组中。
35.根据权利要求30至34中任一项所述的非人动物，其中所述非人动物包含病毒载体，所述病毒载体包含所述第一核酸和所述第二核酸。
36.根据权利要求35所述的非人动物，其中所述病毒载体是慢病毒载体或腺相关病毒(aav)载体。
37.根据权利要求30至34中任一项所述的非人动物，其中所述非人动物包含含有所述第一核酸的第一病毒载体和含有所述第二核酸的第二病毒载体。
38.根据权利要求37所述的非人动物，其中所述第一病毒载体和所述第二病毒载体是慢病毒载体或腺相关病毒(aav)载体。
39.根据权利要求28至38中任一项所述的非人动物，其中所述第一报告蛋白是第一荧光报告蛋白，并且所述第二报告蛋白是第二荧光报告蛋白。
40.根据权利要求28至39中任一项所述的非人动物，其中所述第一报告蛋白是eyfp，并且所述第二报告蛋白是mcherry。
41.根据权利要求28至40中任一项所述的非人动物，其中所述4r tau同种型和所述3rtau同种型是人的，任选地其中所述4r tau同种型和所述3rtau同种型各自包含r5l突变、l237v突变或g243v突变，或者任选地其中所述4r tau同种型和所述3r tau同种型各自包含n279k突变、l284r突变或s285r突变。
42.根据权利要求28至41中任一项所述的非人动物，其中所述4r tau同种型是2n4rtau同种型。
43.根据权利要求28至42中任一项所述的非人动物，其中所述3r tau同种型是2n3rtau同种型。
44.根据权利要求28至41中任一项所述的非人动物，其中所述4r tau同种型是2n4rtau同种型，并且其中所述3rtau同种型是2n3r tau同种型。
45.根据权利要求28至44中任一项所述的非人动物，其中所述4r tau同种型包含seqid no:13中所示的序列，并且所述3r tau同种型包含seq id no:14中所示的序列。
46.根据权利要求28至41中任一项所述的非人动物，其中所述4r tau同种型是1n4rtau同种型。
47.根据权利要求28至41和46中任一项所述的非人动物，其中所述3r tau同种型是1n3rtau同种型。
48.根据权利要求28至41中任一项所述的非人动物，其中所述4r tau同种型是1n4rtau同种型，并且其中所述3rtau同种型是1n3r tau同种型。
49.根据权利要求28至41和46至48中任一项所述的非人动物，其中所述4rtau同种型包含seq id no:23、27、31或47中所示的序列，并且所述3r tau同种型包含seq id no:24、28、32或49中所示的序列。
50.根据权利要求28至49中任一项所述的非人动物，其中所述非人动物是哺乳动物。
51.根据权利要求28至50中任一项所述的非人动物，其中所述非人动物是啮齿动物。
【专利技术属性】
技术研发人员：杰弗里·海恩斯，基思·克罗斯比，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：
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