【技术实现步骤摘要】
本申请涉及抗体领域，更具体地说，它涉及一种抗血栓调节蛋白抗体及其编码序列及其制备方法及其应用。
技术介绍
1、血栓调节蛋白(thrombomodulin,tm)是一种特异表达在内皮细胞上的跨膜糖蛋白分子，是凝血酶最主要的表面受体之一。tm由575个氨基酸残基构成，包括一个疏水的信号肽序列及5个结构区：从细胞外到细胞内分别是n末端血凝素样结构区(tm-d1)、内皮生长因子(egf)样结构区(tm-d2)、富含丝氨酸/苏氨酸结构区(tm-d3)、跨膜结构区(tm-d4)及胞内结构区(tm-d5)，其中前3个结构区组成tm的胞外部分。tm在保护血管内稳态，防止血管内血栓形成方面发挥重要作用，tm能够与凝血酶形成凝血酶-tm-pc(protein c，蛋白c)复合物，使凝血酶丧失活化纤维蛋白原的能力，并能够抑制内外凝血反应；同时tm通过激活pc成为活化的pc(apc)，apc作为重要的抗炎分子，具有抗炎作用。重组人可溶性血栓调节蛋白(rhstm)由tm的胞外部分组成，与完成的tm相比，具有相同的抗凝、抗炎作用。
2、tm抗原对多种血液系统疾病的诊断有参考意义。研究表明，血管内皮细胞(vec)损伤是触发和(或)促进动脉粥样硬化、高血压、心肌梗死和心衰等血液系统疾病的关键因素，而血浆中的tm是内皮受损的标志之一。并且已有研究显示tm在包括血液系统疾病在内的多种人类疾病中上调。
3、目前对动脉粥样硬化的指标均是在后期治疗前的检测指标，而血栓调节蛋白是一个动脉粥样硬化形成前即血栓形成的一个重要标志物，可作为动脉粥样硬化形
技术实现思路
1、为了提供特异性结合血栓调节蛋白的抗体，本申请提供一种抗血栓调节蛋白抗体及其编码序列及其制备方法及其应用。
2、第一方面，本申请提供一种抗血栓调节蛋白抗体，采用如下的技术方案：
3、一种抗血栓调节蛋白抗体，所述抗血栓调节蛋白抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括包含如下氨基酸序列的cdr-l1，cdr-l2和cdr-l3：
4、cdr-l1：qgllynsnqkns，cdr-l2：was，cdr-l3：qqyynypwt；
5、所述重链可变区包括包含如下氨基酸序列的cdr-h1，cdr-h2和cdr-h3：cdr-h1：gfafstyd，cdr-h2：issgggyt，cdr-h3：grrgygnsgyamdy。
6、优选的，所述轻链可变区包含氨基酸序列seq id no：2，所述重链可变区包含氨基酸序列seq id no：4。
7、通过采用上述技术方案，特异性结合血栓调节蛋白的抗血栓调节蛋白抗体具有新序列，并表现出优异的抗体亲和力和诊断特异性，能够与临床样本中的血栓调节蛋白特异性结合，有利于提高动脉粥样硬化等疾病的诊断或检测的准确性。
8、第二方面，本申请提供一种dna序列，采用如下的技术方案：
9、一种dna序列，用于编码所述抗血栓调节蛋白抗体。
10、优选的,所述dna序列包括编码抗血栓调节蛋白抗体轻链可变区的，如seq id no：1所示的核苷酸序列-l。
11、优选的,所述dna序列包括编码抗血栓调节蛋白抗体重链可变区的，如seq id no：3所示的核苷酸序列-h。
12、通过采用上述技术方案，具有新序列的dna序列能够编码特异性结合血栓调节蛋白的抗血栓调节蛋白抗体，有利于制备得到优异的抗体亲和力和诊断特异性的抗血栓调节蛋白抗体。
13、第三方面，本申请提供一种抗血栓调节蛋白抗体的制备方法，采用如下的技术方案：
14、一种抗血栓调节蛋白抗体的制备方法，包括以下步骤：
15、抗原免疫动物；制备杂交瘤细胞；细胞亚克隆；挑选单克隆杂交瘤细胞株；培养杂交瘤细胞并制备抗体。
16、通过采用上述技术方案，能够高效制得具有优异的抗体亲和力和诊断特异性的抗血栓调节蛋白抗体。
17、优选的，制得的抗血栓调节蛋白抗体的抗体亚型为igg1。
18、在一个具体的可实施方案中,所述抗原免疫动物的具体方法包括：
19、构建血栓调节蛋白的质粒；
20、用构建血栓调节蛋白的质粒免疫小鼠，共免疫3-5次，每次间隔2-3周，免疫注射剂量为20-100μg/只；
21、质粒免疫结束后，对小鼠进行一次蛋白加强免疫，加强免疫的蛋白注射剂量为100-400μg/只。
22、通过上述技术方案，实现了在小鼠体内的基因免疫，在小鼠体内引起特异性体液和细胞免疫应答，产生抗体。
23、在一个具体的可实施方案中，所述杂交瘤细胞具体制备方法包括：
24、取经过dna质粒免疫的小鼠脾细胞，将其与小鼠骨髓瘤细胞混合得到混合细胞，充分混匀，离心，弃上清液，培养混合细胞并使小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
25、通过上述技术方案，将小鼠的脾细胞中的淋巴b细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞。
26、在一个具体的可实施方案中，挑选单克隆杂交瘤细胞株的具体方法包括：
27、采用elisa方法进行阳性母克隆筛选；
28、采用有限稀释法及elisa方法进行单克隆筛选。
29、通过采用上述技术方案，筛选得到既能够分泌抗血栓调节蛋白抗体，又具有无限增殖能力的单克隆杂交瘤细胞株。
30、在一个具体的可实施方案中，制备所述抗血栓调节蛋白抗体的具体方法为：
31、将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔，小鼠腹腔膨胀后，收集腹水，离心，取上清，过滤；
32、采用protein a/g预装柱纯化方法，纯化，洗脱，得到抗血栓调节蛋白抗体。
33、通过上述技术方案，获得纯度较高的抗血栓调节蛋白抗体。
34、第四方面，本申请提供一种抗血栓调节蛋白抗体的应用，采用如下的技术方案：一种抗血栓调节蛋白抗体的应用，应用于制备血栓调节蛋白检测试剂盒。
35、通过采用上述技术方案，能够准确、高效的检测出临床样品中的血栓调节蛋白浓度，提高了对动脉粥样硬化等疾病的诊断和监测的有效性和准确性。
36、第五方面，本申请提供一种血栓调节蛋白检测试剂盒，采用如下的技术方案：
37、一种血栓调节蛋白检测试剂盒，包括所述抗血栓调节蛋白抗体。
38、通过采用上述技术方案，能够获得具有检测准确性高、灵敏度强的血栓调节蛋白检测试剂盒。
39、综上所述，本申请具有以下有益效果：
40、1、本申请提供了具有新序列的抗血栓调节蛋白抗体，具有亲和力高和诊断特异性好的，有利于快速、准确的检测临床样品中的血栓调节蛋白的浓度，能有效助力于动脉粥样硬化等疾病的诊断和监测；
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1.一种抗血栓调节蛋白抗体，其特征在于，所述抗血栓调节蛋白抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括包含如下氨基酸序列的CDR-L1，CDR-L2和CDR-L3：
2.根据权利要求1所述的抗血栓调节蛋白抗体，其特征在于：所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO：2，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO：4。
3.一种DNA序列，编码如权利要求1-2所述的抗血栓调节蛋白抗体。
4.根据权利要求2所述的DNA序列，其特征在于：所述DNA序列包括编码抗血栓调节蛋白抗体轻链可变区的，如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列-L。
5.根据权利要求2所述的DNA序列，其特征在于：所述DNA序列包括编码抗血栓调节蛋白抗体重链可变区的，如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列-H。
6.权利要求1-2所述的一种抗血栓调节蛋白抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：制得的抗血栓调节蛋白抗体的抗体亚型为IgG1。
8.根据权利要求6所述的制备
9.一种权利要求1-2所述的抗血栓调节蛋白抗体的应用，其特征在于：应用于制备血栓调节蛋白检测试剂盒。
10.一种血栓调节蛋白检测试剂盒，包括权利要求1-2所述的抗血栓调节蛋白抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种抗血栓调节蛋白抗体，其特征在于，所述抗血栓调节蛋白抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括包含如下氨基酸序列的cdr-l1，cdr-l2和cdr-l3：
2.根据权利要求1所述的抗血栓调节蛋白抗体，其特征在于：所述轻链可变区包含氨基酸序列seq id no：2，所述重链可变区包含氨基酸序列seq id no：4。
3.一种dna序列，编码如权利要求1-2所述的抗血栓调节蛋白抗体。
4.根据权利要求2所述的dna序列，其特征在于：所述dna序列包括编码抗血栓调节蛋白抗体轻链可变区的，如seq id no：1所示的核苷酸序列-l。
5.根据权利要求2所述的d...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓战胜，杨华，何婷，邹小宇，谢君，
申请(专利权)人：深圳市雅为泓源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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