一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的霍山石斛蛋白PPB3-Ⅱ及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性的霍山石斛蛋白PPB3‑Ⅱ及其制备方法和应用，属于生物医药领域。以α‑葡萄糖苷酶抑制活性为指示进行活性追踪，采用硫酸铵沉淀、超滤分离、DEAE阴离子交换层析和凝胶层析对霍山石斛蛋白进行分离纯化，最终得到霍山石斛蛋白PPB3‑Ⅱ。采用HPLC检验其纯度，采用LC‑MS/MS方法结合NCBI数据库检索，鉴定出霍山石斛PPB3‑Ⅱ中的三个蛋白。机制研究表明，PPB3‑Ⅱ对α‑葡萄糖苷酶的抑制类型是一种非竞争与反竞争性的混合型抑制。PPB3‑Ⅱ动态猝灭α‑葡萄糖苷酶的荧光。有益效果：本发明专利技术的PPB3‑Ⅱ蛋白具有安全、高效等优点，可用于降血糖药物或食品等方面的开发利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，具体地涉及霍山石斛蛋白ppb3-ⅱ及其制备方法和应用。

技术介绍

1、糖尿病(diabetes mellitus，dm)是一种以血糖水平升高为特征，受环境、遗传及其他多种因素共同影响的代谢性疾病。2型糖尿病(t2dm)约占所有糖尿病病例的90％，主要是由机体对胰岛素正常作用的抵抗引起的。血糖水平升高往往导致各种并发症，包括心脑血管疾病和感觉神经病变，对人体健康构成重大威胁。α-葡萄糖苷酶抑制剂已成为有效治疗2型糖尿病的一线降糖药物。这些抑制剂的作用机制是削弱α-葡萄糖苷酶的活性，从而抑制双糖或低聚糖的水解。这延缓了碳水化合物的吸收，最终减少餐后高血糖。临床上，阿卡波糖和伏格列波糖是最常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂。尽管这些药物有效，但由于患者长期使用后有明显的肠道副作用而受到应用限制。因此寻找替代或补充的抗糖尿病药物对全世界t2dm的管理具有巨大的兴趣和重要性。

2、长期以来，植物蛋白因其对代谢问题，特别是糖尿病的良好作用而受到关注并被用作药物。霍山石斛为兰科石斛属多年生草本植物，主产于安徽大别山地区，是我国名贵中药材之本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种霍山石斛蛋白PPB3-Ⅱ的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的霍山石斛蛋白PPB3-Ⅱ的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：将霍山石斛鲜条茎粉碎，加水，加热提取，得霍山石斛水提液；加乙醇搅拌，静置后收集上清液；冷冻干燥，加水，离心，留上清液；加入硫酸铵，静置，离心，收集沉淀，即得。

3.根据权利要求1所述的霍山石斛蛋白PPB3-Ⅱ的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中超滤离心具体为：采用3kDa、10kDa和30kDa的高性能超滤离心管对DHPP溶液进行分级超滤。

4.根据权利要求1所述的霍山石斛蛋白PPB3...

【技术特征摘要】

1.一种霍山石斛蛋白ppb3-ⅱ的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的霍山石斛蛋白ppb3-ⅱ的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：将霍山石斛鲜条茎粉碎，加水，加热提取，得霍山石斛水提液；加乙醇搅拌，静置后收集上清液；冷冻干燥，加水，离心，留上清液；加入硫酸铵，静置，离心，收集沉淀，即得。

3.根据权利要求1所述的霍山石斛蛋白ppb3-ⅱ的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中超滤离心具体为：采用3kda、10kda和30kda的高性能超滤离心管对dhpp溶液进行分级超滤。

4.根据权利要求1所述的霍山石斛蛋白ppb3-ⅱ的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中deae纤维素阴离子交换层析的条件包括：分别用100mm tris-hcl(ph 8.0)和不同浓度的nacl溶液(0.25m、0.5m、0.7m和1.0m)进行洗脱，上样量为6ml，上样浓度为5mg/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈乃东，李娇，陶强，郝经文，曹皖雪，
申请(专利权)人：皖西学院，
类型：发明
国别省市：