一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法技术

本发明专利技术公开了一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，酶体系为构建的重组大肠杆菌工程菌pET28a‑UCK‑BL21(DE3)、pET28a‑PPK‑BL21(DE3)、pET28a‑CMK‑BL21(DE3)、pET28a‑NDK‑BL21(DE3)、pET28a‑CCT‑BL21(DE3)和pET28a‑CKI‑BL21(DE3)通过发酵培养，诱导表达相应的重组酶胞苷‑尿苷激酶(UCK)、多聚磷酸酶(PPK)、胞苷酸激酶(CMK)、核苷二磷酸激酶(NDK)、磷酸胆碱胞苷酰转移酶(CCT)和胆碱激酶(CKI)的混合酶体系；通过混合酶体系水相一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠；本发明专利技术的方法，提供了一种反应步骤简单、收率高、成本低、环保且安全的制备胞磷胆碱钠的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药和生物化工，具体涉及一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法。

技术介绍

1、胞磷胆碱钠(citicoline or cdp-choline)是细胞膜磷脂质中的主要成分，作为内源性合成磷脂酰胆碱的中间体可促进神经细胞膜磷脂的合成。其作为脑代谢激活剂，具有修复脑损伤，抗缺氧，改善记忆，增强智力等作用。临床上主要用于急性颅脑外伤和脑手术后意识障碍；治疗帕金森氏综合症；神经性耳聋；对老年痴呆症、抑郁症、延缓衰老，提高学习效果和记忆力等有一定疗效。

2、目前，生产胞磷胆碱钠的方法主要有三种，包括化学合成法、微生物转化法和酶催化合成法。化学合成法存在反应转化率低、副产物较多、生产成本高、环境污染严重且安全隐患多等问题。

3、例如，中国专利文献cn201410250694.4a公开的制备方法，以胞苷酸、磷酸胆碱为底物，对甲苯磺酰氯为缩合剂，在n-二甲基甲酰胺存在下缩合成胞磷胆碱钠。其工艺路线如下：

4、

5、此方法的缺陷在于，胞磷胆碱钠与缩合剂分离较难，产品不适合药用。>

6、中国专利本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：包括多酶体系为构建的重组大肠杆菌工程菌所制备的重组酶的混合酶；

2.根据权利要求1所述的一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：还包括设计引物以Thermus thermophiles(菌株编号ATCC 33923)基因组为模板PCR克隆SEQ ID NO.1所示的UCK基因(NCBI登录号为NZ_AQOS01000030.1)；

3.根据权利要求1所述的一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：分别发酵培养所述重组大肠杆菌工程菌pET28a-UCK-BL21(DE3)...

【技术特征摘要】

1.一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：包括多酶体系为构建的重组大肠杆菌工程菌所制备的重组酶的混合酶；

2.根据权利要求1所述的一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：还包括设计引物以thermus thermophiles(菌株编号atcc 33923)基因组为模板pcr克隆seq id no.1所示的uck基因(ncbi登录号为nz_aqos01000030.1)；

3.根据权利要求1所述的一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：分别发酵培养所述重组大肠杆菌工程菌pet28a-uck-bl21(de3)、pet28a-ppk-bl21(de3)、pet28a-cmk-bl21(de3)、pet28a-ndk-bl21(de3)、pet28a-cct-bl21(de3)和pet28a-cki-bl21(de3)，使其表达重组酶胞苷-尿苷激酶(uck)、多聚磷酸酶(ppk)、胞苷酸激酶(cmk)、核苷二磷酸激酶(ndk)、磷酸胆碱胞苷酰转移酶(cct)和胆碱激酶(cki)；

4.根据权利要求3所述的一种多酶体系一锅催化胞苷合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述重组胞苷-尿苷激酶(...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国庆，
申请(专利权)人：深圳华酶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：