【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及伤口感染相关病原体的检测，更具体地，涉及弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、破伤风杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌的检测。
技术介绍
1、弗氏柠檬酸杆菌(citrobacter freundii，cf)为柠檬酸杆菌属中的代表种，是一种典型的人-畜-鱼共患病条件性致病菌，动物和人均可感染致病性弗氏柠檬酸杆菌而发生腹泻、食物中毒和继发感染。产头孢菌素酶(ampc)、超广谱β-内酰胺酶(esbls)、金属β-内酰胺酶(mbls)耐药基因的弗氏柠檬酸杆菌分离株对人致病性的报道较多，而且出现复合产酶的泛耐药菌株，其耐药性日益严重。研究提示弗氏柠檬酸杆菌可能是一种尚未被人们充分认识的病原菌，且有危害加重的趋势。
2、普通变形杆菌(proteus vulgaris，pv)属于变形杆菌属，广泛存在于水、土壤、腐败的有机物以及人和动物的肠道中，最常见的是普通变形杆菌，此外还有奇异变形杆菌、摩根氏变形杆菌等。普通变形杆菌有明显的多形性，可呈球形和丝状等多形态，无芽胞、无荚膜，有周鞭毛，运动活泼。普通变形杆菌广泛存在于泥土和污水及人、畜粪便中，为条件致病菌，当机体抵抗力下降时，可引起尿路感染、呼吸道感染、腹膜炎、胃肠炎等各种感染。
3、破伤风杆菌(clostridium tetani，ct)是一种革兰染色阳性厌氧性芽胞杆菌。破伤风杆菌广泛存在于土壤、粪便和腐败的植物物质中。这种细菌主要通过伤口或破损的皮肤进入人体，尤其是深而污染的伤口。一旦进入体内，破伤风杆菌会在缺氧的环境中产生破伤风毒素。破伤风
4、嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia，sma)是一种革兰氏阴性、非发酵性的细菌，属于假单胞菌科。嗜麦芽窄食单胞菌的形态特征包括短杆状或略呈弯曲的形状，大小约为0.5-1.5微米。它通常不产生孢子，也不具有运动性。在培养基上生长时，嗜麦芽窄食单胞菌通常呈现为淡黄色或无色的菌落。它是医院环境中常见的细菌之一，尤其是在重症监护室和呼吸道感染患者中。嗜麦芽窄食单胞菌对多种抗生素具有天然的耐药性，这使得它成为医院感染管理中的一个挑战。嗜麦芽窄食单胞菌可以引起多种感染，包括呼吸道感染、尿路感染、伤口感染和血液感染等。它在医院获得性肺炎中尤其常见，尤其是在免疫系统受损的患者中。此外，嗜麦芽窄食单胞菌还可能导致败血症、心内膜炎和脑膜炎等严重感染。
5、上述致病菌的患者常常会有急性肠胃炎、败血症、脑膜炎等病症，危机生命安全，因此早期诊断病原体并给予及时有效的抗感染治疗是改善预后的关键，能够大大降低发病率和病死率。然而，通过临床症状和常规的实验室检测很难鉴别确定所感染的细菌种类，而且目前细菌培养条件较苛刻，造成培养阳性率低，且多重混合感染的培养极为困难，这给感染患者及临床医生带来很大困扰。
6、因此，本领域需求一种产品能够简单、快速地检测上述病原体，并且灵敏度高，特异性好。
技术实现思路
1、有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种伤口感染相关病原体联检并区分的组合物，包括检测弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、破伤风杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌中至少3种病原体所示的引物探针：
2、如seq id no:1～3所示的检测弗氏柠檬酸杆菌的上游引物、下游引物及探针；
3、如seq id no:4～6所示的检测普通变形杆菌的上游引物、下游引物及探针；
4、如seq id no:7～9所示的检测破伤风杆菌的上游引物、下游引物及探针；以及
5、如seq id no:10～12所示的检测嗜麦芽窄食单胞菌的上游引物、下游引物及探针。
6、本专利技术提供一种伤口感染相关病原体联检并区分的组合物，包括：
7、如seq id no:1～3所示的检测弗氏柠檬酸杆菌的上游引物、下游引物及探针；
8、如seq id no:4～6所示的检测普通变形杆菌的上游引物、下游引物及探针；
9、如seq id no:7～9所示的检测破伤风杆菌的上游引物、下游引物及探针；以及
10、如seq id no:10～12所示的检测嗜麦芽窄食单胞菌的上游引物、下游引物及探针。
11、本专利技术提供的联检的组合物，主要利用多重荧光pcr分析方法，通过检测不同病原体上的靶点，对不同病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、破伤风杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等至少三种病原体的检测和区分。本专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到500拷贝/ml，特异性好，检测更为准确。
12、进一步地，所述组合物包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
13、在一些具体的实施方案中，内标是人源内标基因。在一个具体的实施方案中，内标是rnase p。
14、在一些具体的实施方案中，所示组合物中的探针在5’端标记有荧光报告基团。
15、进一步地，本专利技术组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
16、在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用atto425、quasar705、fam、hex、rox和cy5，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。
17、在一些具体的实施方案中，弗氏柠檬酸杆菌探针的荧光报告基团为fam；普通变形杆菌探针的荧光报告基团为hex或ivc；破伤风杆菌探针的荧光报告基团为rox；嗜麦芽窄食单胞菌探针的荧光报告基团为cy5。
18、进一步地，在一些实施方案中，本专利技术的组合物可以同时包括上述引物对和探针组成的一组或多组。在本专利技术中，“组”是指检测一个靶点的互相匹配的上游、下游引物和探针。
19、本专利技术的组合物可以任意组合成检测对应4个靶点的任意组合形式。本领域技术人员可以根据需要进行组合，检测哪几个靶点，即把对应靶点的引物和探针对进行组合即可。这些组合形式均包括在本专利技术中。
20、举例来说，可以包括上述4对引物和探针中的任意3组，可以包括上述4对引物和探针组合。
21、在一些具体的实施方案中，本专利技术组合物用于荧光pcr。
22、进一步地，探针的3’末端还具有非荧光淬灭剂。
23、进一步地，探针的3’末端还具有淬灭基团，例如bhq1或bhq2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种伤口感染相关病原体联检并区分的组合物，包括检测弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、破伤风杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌中至少3种病原体所示的引物探针：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，弗氏柠檬酸杆菌的荧光报告基团为FAM；普通变形杆菌的荧光报告基团为HEX或IVC；破伤风杆菌的荧光报告基团为ROX；嗜麦芽窄食单胞菌的荧光报告基团为CY5。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物在制备伤口感染相关病原体联检并区分的试剂盒中的用途，其中，所述病原体为弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、破伤风杆菌，和嗜麦芽窄食单胞菌。
7.一种伤口感染相关病原体联检并区分的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1～5中任一项所述的组合物。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：核酸释放试剂、核酸提取试剂、DNA聚合酶、dNTP、dUTP、UDG酶、PCR缓冲液以及Mg2+中的至少一种。
10.一种用于制备伤口感染相关病原体联检并区分的试剂的用途，所述联检包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种伤口感染相关病原体联检并区分的组合物，包括检测弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、破伤风杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌中至少3种病原体所示的引物探针：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，弗氏柠檬酸杆菌的荧光报告基团为fam；普通变形杆菌的荧光报告基团为hex或ivc；破伤风杆菌的荧光报告基团为rox；嗜麦芽窄食单胞菌的荧光报告基团为cy5。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：程星，谭德勇，吴康，刘佳，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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