一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3-脱氢莽草酸中的应用技术

本发明专利技术公开了一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术所述重组大肠杆菌，以大肠杆菌SA01为出发菌株，敲除了3‑脱氢莽草酸脱氢酶编码基因aroE，负调控转录抑制因子编码基因tyrR和磷酸烯醇式丙酮酸磷酸转移酶编码基因ptsH，并过量半乳糖透性酶基因galP和抗反馈抑制的DHAP合成酶编码基因aroF<supgt;fbr</supgt;，最终得到的重组菌株发酵40h，3‑脱氢莽草酸产量达到了117g/L，对葡萄糖得率达到0.52g/g。本发明专利技术发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行，无需额外添加抗生素，周期短且得率高，培养基成本低廉，适用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3-脱氢莽草酸中的应用，属于生物工程。

技术介绍

1、3-脱氢莽草酸(3-dehydroshikimate,dhs)是芳香族氨基酸生物合成途径中的关键代谢产物，能进一步转化为原儿茶酸(protocatechuic acid，pca)、莽草酸(shikimate，sa)、没食子酸(gallic acid，ga)、香兰素(vanillin)等一系列重要的化学品。3-脱氢莽草酸分子式为c7h8o5，相对分子质量为172.14，该类化学品作为食品、药品和日用化学品的主要原料而备受关注。目前，3-脱氢莽草酸主要依赖生物发酵法，它是在植物，真菌和细菌的莽草酸途径中发现的天然代谢物，微生物的发酵作用温和可控，底物的来源较为多样，生产成本较低。因此，3-脱氢莽草酸的生物法生产将为其后续芳香族化合物的生产提供充足的前体供应，对于解决化石能源危机和环境可持续发展具有积极的意义。

2、目前，利用微生物合成dhs的研究中，主要有以下方案：

3、文献1(fed-batch fermentor synthes本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌株与出发菌株相比，具有降低或消失的3-脱氢莽草酸脱氢酶的酶活性和/或其编码基因的表达水平，并且，还具有如下(1)～(5)任一所示的特性：

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述3-脱氢莽草酸脱氢酶的编码基因的Gene ID为947776；所述乙酸激酶、丙酮酸激酶、磷酸烯醇式丙酮酸磷酸转移酶、丙酮酸脱氢酶、负调控转录抑制因子TyrR、乳酸脱氢酶的编码基因的Gene ID分别为946775、946527、946886、946132、945879、946315；

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，以启动子Pj23...

【技术特征摘要】

1.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌株与出发菌株相比，具有降低或消失的3-脱氢莽草酸脱氢酶的酶活性和/或其编码基因的表达水平，并且，还具有如下(1)～(5)任一所示的特性：

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述3-脱氢莽草酸脱氢酶的编码基因的gene id为947776；所述乙酸激酶、丙酮酸激酶、磷酸烯醇式丙酮酸磷酸转移酶、丙酮酸脱氢酶、负调控转录抑制因子tyrr、乳酸脱氢酶的编码基因的gene id分别为946775、946527、946886、946132、945879、946315；

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，以启动子pj23119驱动所述3-脱氢奎尼酸合酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、转酮醇酶、半乳糖透性酶、磷酸烯醇式丙酮酸合酶和/或dhap合成酶的编码基因的表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴静，王翔鹤，胡贵鹏，刘立明，盛琦，李振栋，王明，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：