基于mtDNA Cytb基因的苹果蠧蛾PCR检测引物及检测方法和应用技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体涉及一种基于mtDNA Cytb基因的苹果蠧蛾PCR检测引物及检测方法和应用。引物为Cp‑Cytb‑F和Cp‑Cytb‑R，核苷酸序列如下：Cp‑Cytb‑F：5’‑GGTTCATTAATTGATTTACCATCTCCCTCT‑3’，Cp‑Cytb‑R：5’‑TACCTAATGGATTATTTGAACCTA‑3’。本发明专利技术的PCR引物及建立的反应体系和反应条件，可以快速鉴别苹果蠹蛾，无需测序和序列比对，具有灵敏度高、特异性强、快速、简便且稳定性强的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因检测，具体涉及一种基于mtdna cytb基因的苹果蠧蛾pcr检测引物及检测方法和应用。

技术介绍

1、目前用于苹果蠹蛾鉴定的方法主要有：1)形态特征鉴定。在检疫工作中，截获的往往是低龄幼虫或卵，通常的作法是对其进行室内饲养至老熟幼虫后再进行鉴定，耗时长，延长了进出口物品的通关时间，增加了检疫人员的工作强度；2)mt dna cytb基因序列变异水平高于mt dna coⅰ和mt dnacoⅱ；pcr技术等，coⅰ和coⅱ技术曾用于鉴别苹果蠹蛾及其近缘种，但是需要将pcr产物回收、纯化、测序，根据序列比对和系统发育树构建来判断检测结果，操作步骤太多，也导致耗时长。

2、综上，现有苹果蠹蛾鉴定方法存在的问题是耗时长，检测速度慢。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种基于mtdna cytb基因的苹果蠧蛾pcr检测引物及检测方法和应用。本专利技术的引物及pcr反应体系和反应条件，可以快速鉴别苹果蠹蛾，无需测序和序列比对，具有灵敏度高、特异性强、快速、简便且稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于mtDNA Cytb基因的苹果蠧蛾PCR检测引物，其特征在于，为Cp-Cytb-F和Cp-Cytb-R，核苷酸序列如下：

2.一种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物和PCR检测试剂。

3.一种检测苹果蠧蛾的PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的检测苹果蠧蛾的PCR检测方法，其特征在于，PCR扩增反应体系为25μL，包括：引物Cp-Cytb-F、Cp-Cytb-R各0.5μL，基因组DNA1μL，10×EasyTaq Buffer2.5μL，High pure dNTPs 2μL，EasyTaq D...

【技术特征摘要】

1.一种基于mtdna cytb基因的苹果蠧蛾pcr检测引物，其特征在于，为cp-cytb-f和cp-cytb-r，核苷酸序列如下：

2.一种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物和pcr检测试剂。

3.一种检测苹果蠧蛾的pcr检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的检测苹果蠧蛾的pcr检测方法，其特征在于，pcr扩增反应体系为25μl，包括：引物cp-cytb-f、cp-cytb-r各0.5μl，基因组dna1μl，10×easytaq buffer2.5μl，high pure dntps 2μl，easytaq dnapolymerase 1μl，ddh2o补足至25μl。

5.根据权利要求4所述的检测苹果蠧蛾的pcr检测方法，其特征在于，pcr的扩增反应条件为：

6.根据权利要求5所述的检测苹果蠧蛾的pcr检...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兴亚，于明丽，秦发亮，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：