基因工程改造获得的分泌能力和凝血活性增强的人类八因子制造技术

本发明专利技术涉及一种基因工程改造获得的分泌能力和凝血活性增强的人类八因子，其在hFVIII A1结构域中包括至少两个替代的氨基酸。在一些实施方案中，替代的氨基酸位点包括L50V和L152P。在一些实施方案中，替代的氨基酸包括D20S、G22L、I61T、D115E、F129I、G132D、Q139E和L159F中的一个或者多个。本发明专利技术还涉及编码工程化hFVIII多肽的核酸片段，含有这种核酸片段的表达载体或rAAV载体，以及使用工程化hFVIII多肽治疗A型血友病患者的方法。

【技术实现步骤摘要】

技术介绍

1、人类fⅷ因子是一种由位于x染色体上的f8基因编码的蛋白质，由2351个氨基酸组成。f8基因的缺陷导致它所编码的fⅷ蛋白的缺失或不足。a型血友病(hemophilia a，ha)是一种由fⅷ蛋白缺乏引起的遗传性出血性疾病，包括因产生有缺陷的fⅷ、fⅷ分泌不足或缺失而导致凝血活性缺失、或因抑制剂对fⅷ的部分或全部抑制而引起的凝血活性不足。由于fⅷ的缺乏，a型血友病人的血液不能正常凝结而控制出血。

2、治疗ha的常见方法是替代疗法。浓缩的fⅷ因子被缓慢地滴入或注射到ha患者的静脉中。这些输液有助于替代患者体内缺失或低下的fⅷ。然而，这种替代疗法可能产生因注射或获得的fⅷ的抑制剂，导致这种替代疗法的失败。

技术实现思路

1、本专利技术提供了工程化的人fviii多肽、编码fviii蛋白的核酸和表达fviii蛋白的载体、含有fviii的药物组合物，以及该药物的使用方法，以解决本领域的需求，例如a型血友病的治疗。

2、第一，本专利技术提供了一种工程化的人fviii(hfviii)多肽本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种未突变的hFVIII多肽，其在hFVIII的A1结构域中替代的氨基酸选自L50V、D20S、G22L、I61T、Q139E和L159F的一个或多个。

2.一种工程化的hFVIII多肽，其在hFVIII的A1结构域中替代的氨基酸选自L50V、D20S、G22L、I61T、Q139E和L159F的一个或多个。

3.一种工程化的hFVIII多肽，其在hFVIII的A1结构域中替代的氨基酸选自(1)L50V、D20S、G22L、I61T、Q139E和L159F的一个或多个；和(2)D115E、F129I、G132D和L152P的的一个或多个的组合。

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【技术特征摘要】

1.一种未突变的hfviii多肽，其在hfviii的a1结构域中替代的氨基酸选自l50v、d20s、g22l、i61t、q139e和l159f的一个或多个。

2.一种工程化的hfviii多肽，其在hfviii的a1结构域中替代的氨基酸选自l50v、d20s、g22l、i61t、q139e和l159f的一个或多个。

3.一种工程化的hfviii多肽，其在hfviii的a1结构域中替代的氨基酸选自(1)l50v、d20s、g22l、i61t、q139e和l159f的一个或多个；和(2)d115e、f129i、g132d和l152p的的一个或多个的组合。

4.一个游离的核酸片段，其编码一种工程化的hfviii多肽。

5.一种表达载体，其包括编码一种工程化的hfviii多肽的核酸片段，该核酸片段与启动子可操作地连接在一起。

6.一种raav载体，其包括编码一种工程化的hfviii多肽核酸片段，其中该核酸片段和启动子可操作地连接在一起。

7.一种药物组合物，其包括编码一种工程化的hfviii多肽的表达载体或raav载体。

8.一种含有工程化的hfviii质粒的构建方法，其包括使用质粒paav-cb-fviii-sq作为载体，和目的基因片段用noti-hf和kpni-hf(neb)限制性内切酶进行酶切，然后用e.z.n.a.凝胶提取试剂盒进行纯化，利用酶切出来的粘性末端将载体和目的基因连接产生具有各种重链突变体的质粒。

9.一种测量fviii的活性的方法，包括在体外检测中，标准品为refacto，用培养基从...

【专利技术属性】
技术研发人员：董飚，张波，叶静娅，肖琳，郑赵悦，杨荔，刘瑜，
申请(专利权)人：四川至善唯新生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：