一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法技术

本发明专利技术属于基因工程和酶工程领域，具体涉及一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法。该方法具体为：构建重组质粒后采用PCR扩增，纯化后DpnⅠ消化；然后转化至克隆宿主E.coli JM109中，挑选阳性克隆培养；质粒抽提后转化至表达宿主E.coli BL21（DE3）；然后加入IPTG溶液发酵；即得。本发明专利技术利用基因工程手段，采用疏水性较强的氨基酸对麦芽糖淀粉酶活性中心周围的氨基酸残基进行突变，增强氨基酸残基的疏水性，改变酶对于转苷和水解的偏好性以此提高麦芽糖淀粉酶的转苷活力，在淀粉改性方面具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和酶工程领域，具体涉及一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法。

技术介绍

1、在淀粉-脂质复合物的制备过程中，淀粉经过麦芽糖淀粉酶改性后，由于麦芽糖淀粉酶转糖苷作用形成新的α-1,6糖苷键，产生支链淀粉簇，分支密度增加。后续脱支过程中可释放更多参与络合作用的线性淀粉链，促进直链淀粉-脂质复合物的形成。然而麦芽糖淀粉酶转苷活性的偏低会导致其消耗量过大，酶解时间长，生产成本增加。

技术实现思路

1、为了改变麦芽糖淀粉酶对于转苷和水解的偏好性，本专利技术提供了一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，该方法利用基因工程手段，采用疏水性较强的氨基酸对麦芽糖淀粉酶活性中心周围的氨基酸残基进行突变，增强氨基酸残基的疏水性，改变酶对于转苷和水解的偏好性以此提高麦芽糖淀粉酶的转苷活力，在淀粉改性方面具有良好的应用前景。

2、本专利技术的技术方案如下：

3、本专利技术提供了一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，包括以下步骤：构建重组质粒opt-amym/pet-24a(+)后采用pcr扩增，纯本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：构建重组质粒opt-amyM/pET-24a(+)后采用PCR扩增，纯化后DpnⅠ消化；然后转化至克隆宿主E.coliJM109中，挑选阳性克隆培养；质粒抽提后转化至表达宿主E.coli BL21（DE3）；然后加入IPTG溶液发酵；即得。

2.根据权利要求1所述的提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，其特征在于，构建重组质粒opt-amyM/pET-24a(+)的过程为：将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的麦芽糖淀粉酶的基因以及载体pET-24a(+)使用内切酶BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切，酶切产物经切胶回收后用T4连接酶...

【技术特征摘要】

1.一种提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：构建重组质粒opt-amym/pet-24a(+)后采用pcr扩增，纯化后dpnⅰ消化；然后转化至克隆宿主e.colijm109中，挑选阳性克隆培养；质粒抽提后转化至表达宿主e.coli bl21（de3）；然后加入iptg溶液发酵；即得。

2.根据权利要求1所述的提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，其特征在于，构建重组质粒opt-amym/pet-24a(+)的过程为：将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的麦芽糖淀粉酶的基因以及载体pet-24a(+)使用内切酶bamhⅰ和hindⅲ进行双酶切，酶切产物经切胶回收后用t4连接酶进行连接，构建重组质粒opt-amym/pet-24a(+)。

3.根据权利要求2所述的提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，其特征在于，所述连接为25℃下反应3h随后4℃过夜进行连接反应。

4.根据权利要求1所述的提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的方法，其特征在于，pcr扩增的过程为：设计突变引物，将重组质粒opt-amym/pet-24a(+)作为模板，配制pcr反应体系，设置pcr运行程序进行基因扩增。

5.根据权利要求4所述的提高麦芽糖淀粉酶转苷能力的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹏飞，董一凡，崔波，马丽，吴正宗，高伟，袁超，郭丽，邹飞雪，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学山东省科学院，
类型：发明
国别省市：