【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽，尤其涉及一种具有降脂功能的大蒜肽及其制备方法与应用。
技术介绍
1、在现代血脂异常是一类十分常见的疾病，俗称高脂血症，血脂异常是动脉粥样硬化的主要成因，也是冠心病与缺血性脑卒中的独立危险因素。血脂异常一般根据临床经验分为四类：高胆固醇(tc)血症、高甘油三酯(tg)血症、混合型高脂血症、低高密度脂蛋白(ldl)血症。
2、血脂异常通常反应在血脂tc、tg、ldl升高，严重时还会导致高密度脂蛋白(hdl)降低。降脂药物可以通过改善tc、tg等指标进而治疗血脂异常，但现有降脂西药如胰脂肪酶抑制剂(奥利司他)、hmgcr抑制剂(他汀类)等都存在一定的毒副作用。
3、食物源生物活性肽具有易吸收、生物利用度高、低致敏性、性状稳定等优势。因此，研发新型高效、安全的食物源生物活性肽类降脂药物尤为重要。
技术实现思路
1、本专利技术以大蒜为主要原料，以胰脂肪酶抑制率、降低油酸诱导的高脂hepg2细胞模型中脂质含量为指标，设计了全新制备工艺，制备得到的大蒜降脂肽可以用于治疗或辅助治疗血脂异常。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种具有降脂功能的大蒜肽，所述大蒜肽为fl7、pf7、at8、gg8或ar9中的一种；
4、所述fl7的氨基酸序列为：fdplaql、所述pf7的氨基酸序列为：prpneyf、所述at8的氨基酸序列为：agwlfvst、所述gg8的氨基酸序列为：gwl
5、本专利技术还提供了所述的一种具有降脂功能的大蒜肽的制备方法，包括如下步骤：
6、(1)将大蒜与水混合均质，过滤得到滤液；将所述滤液与硫酸铵混合，静置，离心得沉淀；
7、(2)将步骤(1)所述沉淀与磷酸缓冲液混合复溶，透析、冻干，得到大蒜粗蛋白粉，并配置成大蒜粗蛋白溶液；
8、(3)将步骤(2)所述大蒜粗蛋白溶液与碱性蛋白酶混合酶解，离心，收集上清液即为酶解产物；
9、(4)将步骤(3)得到的酶解产物进行超滤，取分子量<3.5kda的组分，纯化、鉴定、虚拟筛选。
10、优选的，步骤(1)所述大蒜与水的质量比为1:4～8；所述硫酸铵的饱和度为75～85％。
11、优选的，步骤(1)所述离心的转速为7000～9000r/min，时间为4～6min；所述静置的温度为3～5℃，时间为10～16h。
12、优选的，步骤(2)所述大蒜粗蛋白溶液以水为溶剂；所述大蒜粗蛋白溶液的质量浓度为0.3～0.7％；所述大蒜粗蛋白溶液的ph为9～10。
13、优选的，步骤(3)所述碱性蛋白酶加酶量为8000～12000u/g；所述酶解的温度为40～50℃，时间为2～4h；所述离心的转速为7000～9000rpm，时间为15～25min。
14、优选的，步骤(3)所述纯化的方法为：
15、将分子量<3.5kda的组分与水混合，得到待纯化溶液；将待纯化溶液装入1.6cm×55cm规格的层析柱，自然沉降完全后，用超纯水平衡1～2h；单次过柱上样量为2ml，洗脱流速为1ml/min，洗脱溶液为超纯水，每10min收集一管，收集50～100min的组分，得到纯化后的多肽样品。
16、优选的，步骤(3)使用maldi-tof质谱法进行鉴定，具体包括如下步骤：
17、以0.1％三氯乙酸为溶剂，配制最终浓度为2～3μg/μl的纯化后得到的多肽样品溶液；
18、一级质谱分析条件：线性正离子模式，检测范围为700～3500da，氮激光器，波长为340～360nm，激光频率为450～550hz，能量范围为20％～50％，多肽标准品ii进行校正；
19、二级质谱分析条件：lift二级质谱分析方法，根据一级母离子确定二级检测范围，二级检测范围为200～1600da，激光能量范围为18％～80％；
20、使用分析软件flexanalysis 3.4进行自动标峰处理，采用mascot对蛋白质一级、二级质谱信息进行搜库，得到最佳匹配数据为鉴定肽段。
21、优选的，步骤(3)所述虚拟筛选的方法为：将鉴定肽段通过在线数据库peptideranker对活性概率进行预测，以评分＞0.5为阈值，筛选出具有较高概率具有活性的肽序列；利用pepdraw、pepcalc和toxinpred对所述肽序列理化性质和毒性做出预测；将活性评分＞0.5的肽序列利用分子对接筛选抑制胰脂肪酶活性的肽序列。
22、本专利技术还提供了所述的一种具有降脂功能的大蒜肽或所述的方法制备得到的具有降脂功能的大蒜肽在制备降脂药物中的应用。
23、与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
24、本专利技术得到的大蒜肽能有效抑制胰脂肪酶活性，同时显著降低油酸诱导的高脂hepg2细胞内总甘油三酯和总胆固醇水平。且本专利技术所述大蒜肽序列天然无毒、稳定性高，作用靶点明确，符合药物制剂开发需求，可作为脂功能分子应用于治疗或者辅助治疗血脂异常的特医食品、保健品和药物。
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1.一种具有降脂功能的大蒜肽，其特征在于，所述大蒜肽为FL7、PF7、AT8、GG8或AR9中的一种；
2.权利要求1所述的一种具有降脂功能的大蒜肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述大蒜与水的质量比为1:4～8；所述硫酸铵的饱和度为75～85％。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的转速为7000～9000r/min，时间为4～6min；所述静置的温度为3～5℃，时间为10～16h。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述大蒜粗蛋白溶液以水为溶剂；所述大蒜粗蛋白溶液的质量浓度为0.3～0.7％；所述大蒜粗蛋白溶液的pH为9～10。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述碱性蛋白酶加酶量为8000～12000U/g；所述酶解的温度为40～50℃，时间为2～4h；所述离心的转速为7000～9000rpm，时间为15～25min。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述纯化的
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(3)使用MALDI-TOF质谱法进行鉴定，具体包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述虚拟筛选的方法为：将鉴定肽段通过在线数据库Peptide Ranker对活性概率进行预测，以评分＞0.5为阈值，筛选具有活性的肽序列；利用Pepdraw、PepCalc和ToxinPred对所述肽序列理化性质和毒性做出预测；将活性评分＞0.5的肽序列利用分子对接筛选抑制胰脂肪酶活性的肽序列。
10.权利要求1所述的一种具有降脂功能的大蒜肽或权利要求2～9任一项所述的方法制备得到的具有降脂功能的大蒜肽在制备降脂药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有降脂功能的大蒜肽，其特征在于，所述大蒜肽为fl7、pf7、at8、gg8或ar9中的一种；
2.权利要求1所述的一种具有降脂功能的大蒜肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述大蒜与水的质量比为1:4～8；所述硫酸铵的饱和度为75～85％。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的转速为7000～9000r/min，时间为4～6min；所述静置的温度为3～5℃，时间为10～16h。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述大蒜粗蛋白溶液以水为溶剂；所述大蒜粗蛋白溶液的质量浓度为0.3～0.7％；所述大蒜粗蛋白溶液的ph为9～10。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述碱性蛋白酶加酶量为8000～12000u/g；所述酶解的...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖治理，任锐，王弘，孙远明，李美英，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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