一种小麦试管苗叶片反复再生的方法技术

本发明专利技术涉及一种通过小麦试管苗叶片的组织培养使小麦试管苗反复再生的方法，属于植物组织培养技术领域，其步骤包括：（１）胚性愈伤组织的诱导；（２）愈伤组织的继代培养；（３）试管苗的获得；（４）试管苗叶片诱导愈伤组织；（５）二次再生苗的诱导；（６）诱导生根；（７）二次再生苗的移栽。本发明专利技术所提供的小麦试管苗幼叶反复再生的方法成功解决了小麦试管苗反复再生难的问题，是国内外首次通过小麦试管苗幼叶建立起小麦试管苗反复再生体系，使运用叶绿体转基因技术获得同质化的叶绿体转基因小麦成为可能。经试验统计：通过使用本方法试管苗叶片诱导愈伤组织的频率及二次再生苗的频率分别达到了９３％和６６％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种小麦试管苗叶片再生的方法，尤其涉及一种通过小麦试管苗叶片的组织培养使小麦试管苗反复再生的方法，属于植物组织培养

技术介绍
小麦(Triticum aestivum L)是我国的重要经济作物，是粮食的主要来源之一。为了改良小麦，目前所进行的小麦转基因研究，都是将目的基因转入细胞核。与细胞核转基因相比，叶绿体转基因具有表达量高、遗传稳定、环境友好等优点。而作为作物遗传改良新方向的叶绿体基因工程并未运用于小麦遗传性状的改良。这是由于小麦等禾谷类粮食作物很难利用绿色的叶组织进行反复再生，严重限制了其叶绿体转基因工作的开展。 国外的叶绿体基因工程应用主要集中在双子叶植物(Daniell et al.2005)，例如烟草、马铃薯、番茄和胡萝卜等。这些植物之所以能够成功获得性状稳定遗传的改良植株，一个最主要原因是最初获得的叶绿体转基因杂合体可以在筛选过程中使绿色叶片或者绿色愈伤组织反复再生，在反复再生和筛选过程中，逐渐淘汰未转化的叶绿体和未转化的细胞，最终获得同质化的转化体——即叶绿体转基因纯合体(Grevich，J. J.2005)。而单子叶的禾谷类作物，如小麦、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小麦试管苗叶片反复再生方法，步骤包括：（１）胚性愈伤组织的诱导（２）愈伤组织的继代培养（３）试管苗的获得（４）试管苗叶片诱导愈伤组织（５）二次再生苗的诱导（６）诱导生根（７）二次再生苗的移栽；其特征在于：步骤（１）胚性愈伤组织诱导的方法是：取开花后１４～１６天的小麦未成熟麦穗，于体积比为７５％酒精中浸３～８分钟灭菌；然后将未成熟麦粒从麦穗上剥下放至无菌培养皿中，腹沟向下将其夹住，用解剖针挑出幼胚；再挑选直径０．８～１．２ｍｍ的幼胚，盾片向上接种于愈伤组织诱导培养基Ⅰ上，２述分化培养基Ⅱ配方是：ＭＳ基本成分＋Ｂ５维生素＋１３０～１７０ｍｇ／Ｌ谷氨酰胺＋０．４～０．６ｍｇ／ＬＴＤＺ＋０．８～１...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：侯丙凯，王文超，耿晓霞，胡洪群，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]