微生物计数差值原理检测辐射处理食品方法技术

用于检测辐射处理食品的一种筛选方法，属于食品卫生领域，具体涉及一种运用微生物计数差值方法检测辐射处理食品的筛选方法。其技术方案是利用荧光显微镜对在波长为４５０ｎｍ至４９０ｎｍ蓝光激发下发橙黄色和黄色荧光的微生物单位进行计数，同时检测细菌总数，两数值取对数后以荧光计数单位减去细菌总数得到差值，该差值再与限量值比较来判断样品是否经过辐照处理。本发明专利技术包括试剂培养基的配制、仪器设备、样品预处理方法、荧光计数单位检测方法、细菌总数检测方法、计算方法和结果判读方法。本发明专利技术填补了我国辐射处理食品检测方法的空白，用于出入境调味料、中草药等的辐射处理检测，本方法具有适用范围广、高通量和既能检测样品是否经过辐射处理，也能对产品、货物的卫生状况进行监测的优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品卫生检验领域，涉及用微生物差值的方法来检测辐射处理食品的技术。
技术介绍
食品辐射处理保藏作为二十世纪50年代发展起来的一种食品保藏技术，已广泛 应用于新鲜肉类及其制品、水产品及其制品、蛋及蛋制品、粮食、水果、蔬菜、调味料、草药、 饲料等，达到杀菌、杀虫、抑制发芽、延迟后熟等目的，具有保持食品原有成分和风味，无药 物残留、不污染环境、杀菌效果彻底、能对产品及包装食品进行加工处理、成本底、能耗少等 优势。 目前，全世界已有42个国家和地区批准辐射处理农产品和食品240多种，年市场 销售辐射处理食品的总量达30多万吨。辐射处理食品种类也逐年增加，截止2005年我国 辐射处理食品种类已达7大类56个品种。7大类产品分别是辐射处理豆类、谷物及其制品； 辐射处理干果果脯类；辐射处理熟畜禽肉类；辐射处理冷冻包装畜禽肉类；辐射处理香辛 料类；辐射处理水果、蔬菜类；辐射处理水产品类。 国际辐射处理食品规定要求，经电离辐射处理食品的标签上，必须在紧靠食品名 称处用文字指明该食品经辐射处理；配料中有辐射处理食品也必须在配料表中指明。我国 标签法和食品辐射处理管理办法中也规定了辐射处理食品应有标识，但很难在我国市场上 看到有标识的辐射处理食品，我国辐射处理食品的消费者接受性问题依然是阻碍辐射处理 商品标识的主要原因。欧盟在对市场上销售的食品进行抽查的结果中检出没有标识的辐射 处理冷冻水产品和调味品等，这应引起我国有关部门的注意，提防禁止辐射处理食品的国 家以此或以没有标识为由设立新的技术壁垒。 目前，检测辐射处理食品的方法主要有气相色谱/质谱联用法、气相色谱法、高效 液相色谱法、DNA裂解产物检测法、电子自旋共振光谱检测法、热释光分析法、激光成像检测 法、超微弱发光法、光释光分析法等。微生物检测方法，具有较化学、物理分析方法更广泛的 适用范围，并具有高通量的特点，对仪器设备要求不高，可以在不同硬件水平的实验室实施 辐射处理食品的检验。目前，我国还没有公布此类方法标准。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术填补了国内辐射处理食品检测的空白，提供了一种应用微 生物计数差值方法检测辐射处理剂量的方法，具体来讲就是，通过对显微镜荧光菌落计数 和普通菌落计数相结合来检测辐射处理剂量的方法。该方法具有快速、准确，应用范围广的 特点。 通过微生物计数差值方法检测食品辐射处理剂量的方法包括检测样品的荧光染 色；检测样品中显微镜荧光计数单位；检测样品中菌落总数；判定依据的建立。 微生物计数差值方法优势和特点 该方法具有检测适用范围广、简便和高通量、硬件设备要求不高和能在辐射检测同时对样品微生物污染进行监控。1.适用范围广 与化学法例如针对碳氢化合物的气相色谱检测法相比具有更广泛的适用范围。针 对碳氢化合物的气相色谱检测法是以检测含有脂肪样品中脂肪酸结构在辐射后发生改变 为基础的，因此，对含脂肪低或不含脂肪的样品将无法检测；又如针对2_十二烷基环丁酮 的气相色谱_质谱检测法也是针对样品脂肪中的棕榈酸和硬脂酸进行检测，同样受到上述 限制。而微生物计数差值方法则不受样品组分的影响，凡是加工食品在加工前都将或多或 少受到微生物污染，这就具备了本方法实施的基本条件。 2.简便和高通量 本方法操作过程简单。每完成一份样品平均仅需5 IO分钟，如使用多联抽滤装置更可使效率倍增。抽滤_制片_荧光计数、检测细菌总数两个平行过程均可同时或连续操作多份样品。 3.硬件配置要求 主要设备仅需抽滤装置和具落射荧光的显微镜即可，常规微生物实验室即可实 施。 4.辐射检测同时对样品微生物污染进行监控 本方法的基础是微生物计数检测，而辐射处理的重要目的之一就是杀灭微生物，保持处理的产品卫生条件，延长保质期。而在进行辐射处理需评估初始微生物状态，以确定所需辐射的剂量，以及在处理后对处理效果进行必要的验证也需进行微生物检测，从而达到控制微生物污染的目的。本方法在检测的过程中采用了细菌总数的检测，从而使本方法既可以用来检测食品是否经过辐射处理，又可对产品微生物状况进行监测。 正如上文所述，本专利技术的方法适用范围广泛，经过实际检测，证明除可应用于调味品、中草药以外，还可用于肉制品、水产品和乳制品等其它食品的检测。 本专利技术是通过以下技术方案实现的 1.试剂及培养基 分析过程中仅可采用分析纯试剂。使用的所有试剂须经0. 2 i！ m滤膜过滤或高压 灭菌无菌处理。(1)蛋白胨盐水稀释液 a.成分 氯化钠 8. 5g 蛋白胨 l.Og 蒸馏水或去离子水 1000mL b.制法 在水中溶解各成分。必要时，调节ra值，使灭菌后的最终ra值为7. 2±0. 2，20°C 25°C。高压灭菌121°C 士rC，15min。稀释液储存于玻璃瓶中于4°C 6可存放不超过2 周。 (2)缓冲溶液，PH 3. 0 a.柠檬酸溶液，物质浓度C(C6H807 H20) = 0. lmol/L i.成分一水合柠檬酸21. 0g 蒸馏水或去离子水 lOOOmL ii.制法 水溶解一水合柠檬酸。溶液储存于玻璃瓶中于4t: 6t:可存放不超过3个月。 b.氢氧化钠溶液，C(NaOH) = 0. lmol/1 i.成分 氢氧化钠 4. 0g或 氢氧化钠溶液，lmol/1 lOOmL 蒸馏水或去离子水 900mL ii.制法 以水溶解氢氧化钠或稀释氢氧化钠溶液。溶液储存于玻璃瓶中于4°C 6t:可存 放不超过3个月。 c.完全成分缓冲液，pH 3. 0 i.成分 柠檬酸溶液((2)a) lOOmL 氢氧化钠溶液((2)b) 54mL ii.制法 混合柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液。以柠檬酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH值至 3.0±0.2。用前须经0.2iim滤膜过滤除菌。溶液储存于玻璃瓶中于4°C 6。C可存放不超 过3周。 (3)吖啶橙溶液 a.缓冲液，P朋.6 i.成分 柠檬酸溶液((2) a)35. 5mL 氢氧化钠溶液((2)b) lOOmL ii.制法 混合柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液。以柠檬酸溶液或氢氧化钠溶液调ra值6.6±0.2。用前须经孔径0.2iim滤膜(5.3)过滤除菌。溶液储存于玻璃瓶中于4°C 6°C可存放不超过3周。 b.完全成分吖啶橙溶液 i.成分 吖啶橙 0. 025g 缓冲液，PH6. 6((3)a) lOOmL ii.制法 在缓冲液中溶解吖啶橙。用前须经孔径0. 2 m滤膜过滤除菌。溶液储存于棕色 玻璃瓶中于4°C 6t:可存放不超过1周。 注1 :可购买浓縮的吖啶橙溶液，并且由于安全原因推荐采用这种方式。 注2 :由于吖啶橙被认为是可诱导突变的物质，在称量染色剂时应佩戴一次性手套和口罩。 (4) 2-丙醇(5) Triton X-IOO， 1 %清洗液 a.成分d Triton X-100蒸馏水或去离子水lOOOmL b.制法 将Triton X-100与8(TC热水混合。用前须经孔径0. 2 y m滤膜过滤除菌。溶液储存于玻璃瓶中于4°C 6t:可存放不超过3周。 (6)胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖琼脂(平板计数琼脂) a.成分 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸膏 2. 5g 葡萄糖1. 0g 琼脂(根据凝固的强度决定琼脂的用量)12g 18g 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用微生物计数法（计数荧光单位Ｎ↓［１］、计数细菌总数Ｎ↓［２］）检测辐射处理食品的筛选方法，原理为：将由计数荧光单位得到的数值与计数细菌总数方法进行差值计算。如果二者的差值大于某一限值，则表明样品可能经过辐射处理处理。

【技术特征摘要】
一种应用微生物计数法(计数荧光单位N1、计数细菌总数N2)检测辐射处理食品的筛选方法，原理为将由计数荧光单位得到的数值与计数细菌总数方法进行差值计算。如果二者的差值大于某一限值，则表明样品可能经过辐射处理处理。2. 权力1所述的方法包括以下四个主要过程(1) 以具落射荧光的显微镜计数荧光单位(n》，取lg值得^ ;(2) 以标准细菌总数计数方法计数样品中活菌数0g，取lg值得^ ;(3) 计算差值N3 = NrN2。(4) 将N3与临界限量值(L)比较进行判定，若N3 > L，初筛阳性；若N3 < L，初筛阴性。3. 权力l-2所述荧光单位检测所应用的荧光染色剂为吖啶橙。4. 权力1-2所述荧光单位检测所应用的荧光为蓝光，波长为450nm至490nm。5. 权力l-4所述的荧光单位检测计数范围包括在波长为450nm至490nm蓝光激发下发橙色至橙黄色荧光的微生物单位。6. 权力l-2所述荧光单位检测所采用的滤膜可以是叠放的双层滤膜(上层滤膜直径25mm孔径10 y m，下层滤膜直径25mm孔径0. 6 y m聚碳酸酯膜。7. 权力l-2所述细菌总数检测方法可以是任何一种细菌总数的标准检测方法，培养条件是30。C 士rC培养72h。8. 权力l-2所述方法的计算公式是具有以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：宓捷波，
申请(专利权)人：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]