一种制备皮质-下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法技术

本发明专利技术涉及一种制备皮质‑下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法，属于生物医学技术领域。本发明专利技术将H9细胞贴壁增殖培养并消化得到拟胚体，一部分细胞分化形成神经管样细胞结构，用神经诱导培养液悬浮培养，使其自发形成球状神经前体细胞，将神经球包埋到基质胶内，用神经诱导培养液继续培养，获得皮质神经球；另一部分细胞在SHH通路激动剂的作用下进行腹侧化持续诱导，获得下皮质视神经球。将皮质神经球和下皮质神经球同时消化成为单细胞，静置待其聚集并自发组织构成皮质‑下皮质多脑区复合类器官。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学，尤其是指一种制备皮质-下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法。

技术介绍

1、人大脑皮层由谷氨酸能兴奋性神经元和γ-氨基丁酸(gaba)能抑制性神经元共同构成。其中，兴奋性神经元发育自皮质区(pallium region)，通过放射状迁移定位到大脑皮层的位置；而抑制性神经元发育源自皮质下区(subpallium region)的内侧(medialganglionic eminence，mge)和尾侧神经节隆起(caudal ganglionic eminence，cge)，通过切向迁移到大脑皮质。这两类神经元之间形成精密的局部环路，在调控皮层高级脑功能中发挥重要作用。

2、近年来，从hpscs分化出来的人脑类器官被认为是研究人脑发育/发病机制的有效实验模型。hpscs可在体外通过诱导，自发组织成被称为类器官(organoid)的多细胞器官样结构。人脑类器官可以在很大程度上概括离散的大脑区域的结构功能特性，为人脑发育和神经系统疾病提供了可研究的模型基础。已有研究通过单细胞测序对比分析了人类大脑细胞、人脑类器官细胞和猕猴等灵长本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备皮质-下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤S1中，将H9细胞增殖至密度为60-80％时进行消化处理，得到所述拟胚体。

3.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤S1中，所述DMEM/F12培养基、非必须氨基酸NEAA和细胞培养添加剂N2的体积比为(96-98):(1-2):(1-2)。

4.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤S2中，在不含有胎牛血清的神经诱导培养液中进行贴壁培养。

5.根据权利要求1所述的诱导分化方法，...

【技术特征摘要】

1.一种制备皮质-下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤s1中，将h9细胞增殖至密度为60-80％时进行消化处理，得到所述拟胚体。

3.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤s1中，所述dmem/f12培养基、非必须氨基酸neaa和细胞培养添加剂n2的体积比为(96-98):(1-2):(1-2)。

4.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤s2中，在不含有胎牛血清的神经诱导培养液中进行贴壁培养。

5.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于：步骤s3中，所述神经诱导培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘妍，韩晓，吴依菲，徐敏，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：