一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法技术

本发明专利技术属于细胞技术领域，涉及小鼠肝脏多种原代细胞的分离，是一种用于小鼠肝细胞、肝星状细胞和肝单个核细胞分离和纯化的简易可行方案，适用于一般实验室的小鼠体内相关细胞分离及进一步培养。本发明专利技术所提供的方法核心是在小鼠下腔静脉插管的基础上使用胶原酶溶液进行灌注消化，随后经过一系列分离和连续纯化步骤，实现小鼠肝脏中肝细胞、肝星状细胞和肝单个核细胞等多种原代细胞的获取。该发明专利技术一定程度上克服了目前肝脏细胞分离方法单一，兼顾了高效、经济，又能避免实验动物滥用的特点，从而为相关肝病体外实验的开展奠定坚实基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学细胞领域，特别涉及一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法。

技术介绍

1、目前，全球有数亿人口正遭受肝病的困扰，作为一种危害性极大的常见疾病，肝病一直受到世界卫生组织的高度关注并作为重要公共卫生问题对待，因此开展肝病相关的研究具有重要意义，其中体外细胞实验是肝病研究过程中不可或缺的步骤，肝脏提取的多种原代细胞可广泛用于各种急慢性肝病的基础研究。

2、肝脏包含实质成分和非实质成分，肝脏实质成分主要指肝细胞，是行使肝功能的基本单位；肝脏非实质成分是肝脏中起着连接、支撑肝实质成分的组织结构，其不具备行使肝功能的作用；除此之外，肝脏中富含大量的免疫细胞，特别是在小鼠肝脏中免疫细胞富集的现象则更加明显，包括t淋巴细胞、b淋巴细胞、树突状细胞、γδt细胞、库弗细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤t细胞等，它们共同参与肝脏的免疫调节。当肝脏受到病原微生物、药物、化学和酒精等因素刺激时均可引起肝细胞损伤，进而激活肝内免疫应答反应，导致包括病毒性肝炎、药物性肝炎、自身免疫性肝炎和酒精性肝炎在内的多种肝脏疾病。为了阐明各种肝病的发病机理，探本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法，其特征在于，步骤S3中，小鼠可采用麻醉昏迷或死亡时间不超过5min的实验小鼠；灌洗流程可循环4-5次，消化肝脏25-30min。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法，其特征在于，步骤S4中，200目细胞过滤筛的孔径为70μm；在细胞悬液具有残留的细小组织块时，可用无菌玻璃棒研磨。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代...

【技术特征摘要】

1.一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法，其特征在于，步骤s3中，小鼠可采用麻醉昏迷或死亡时间不超过5min的实验小鼠；灌洗流程可循环4-5次，消化肝脏25-30min。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠肝脏逆行灌注消化法同步分离多种原代细胞的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘建，纪翠锋，全无暇，王江涛，缪延栋，时巍巍，
申请(专利权)人：滨州医学院烟台附属医院，
类型：发明
国别省市：