【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及邻近标记，更具体地，涉及一种基于apex2邻近标记技术探索前导链与后随链周围蛋白的方法。
技术介绍
1、邻近标记技术主要用于研究蛋白质相互作用。目前邻近标记技术有3种：邻近依赖的生物素鉴定(bioid)、turboid、近端连接酶反应(pla)及apex2邻近标记技术。
2、其中，bioid是一种用于研究蛋白质相互作用和细胞内局部化的分子生物技术。它通过将目标蛋白质与一种特殊的酶(bira酶的突变体)融合表达在细胞中，这种酶能在其周围的蛋白质上共价地加上生物素标签。通过补充生物素并利用其与酶的互作用，这个方法能够在细胞内标记与目标蛋白质相邻的或相互作用的蛋白质。之后，这些生物素化的蛋白质可以通过亲和纯化被提取，并通过质谱分析来鉴定，从而揭示目标蛋白质的相互作用伙伴和其在细胞内的分布。bioid技术由于其能够捕捉瞬态和弱相互作用，以及不需要蛋白质间直接接触的特点，成为研究蛋白质网络和细胞内定位的有力工具。然而在bira标记过程中，bira的产物——生物素-腺苷酸酯的半衰期长达数分钟，以至于它导致的标记半径偏大，得...
【技术保护点】
1.一种基于APEX2邻近标记技术探索前导链与后随链周围蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述DNA复制前导链和后随链相关的关键蛋白选自DNA聚合酶α、δ或ε的亚单位，或者是引导复制的其他辅助蛋白质。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述表达载体为PT2或PLX304。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S2所述宿主细胞选自HeLa、CHO或MEF细胞。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S2所述验证为通过Western blot或
【技术特征摘要】
1.一种基于apex2邻近标记技术探索前导链与后随链周围蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s1所述dna复制前导链和后随链相关的关键蛋白选自dna聚合酶α、δ或ε的亚单位，或者是引导复制的其他辅助蛋白质。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s1所述表达载体为pt2或plx304。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s2所述宿主细胞选自hela、cho或mef细胞。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s2所述验证为通过western blot或免疫荧光染色。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s4所述提取和纯化采用链霉亲和素珠子进行富集。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s4所述质量验证为使用生物素-hrp作为抗体进行western blot。
...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。